qRT-PCR法分析甲状腺乳头状癌FEZ1/LZTS1基因异常表达研究

目的:采用qRT-PCR法检测甲状腺乳头状癌(PTC)FEZ1/LZTS1基因的异常表达,分析异常表达与临床特点之间的关系。方法:用试剂盒提取42例甲状腺乳头状癌及癌旁正常组织标本RNA,采用实时荧光定量PCR扩增FEZ1/LZTS1基因并进行分析,判断基因异常表达。结果:42例PTC中,34例FEZ1/LZTS1基因与内参照基因相比,拷贝数量比值明显低于癌旁组织,显示为异常表达,且与民族、年龄、性别及肿瘤大小无相关性;临床Ⅰ、Ⅱ期的异常表达率高于Ⅲ、Ⅳ期,差异具有统计学意义。结论:FEZ1/LZTS1基因的异常表达可能与PTC的发生发展相关,qRT-PCR技术能够快速分析FEZ1/LZTS1基因的异常表达,对PTC的诊断可能具有辅助作用。

乳腺浸润性微乳头状癌FEZ1/LZTS1基因的表达及启动子区域甲基化的研究

背景与目的研究FEZ1/LZTS1基因在乳腺浸润性微乳头状癌中的表达,分析其与淋巴结转移等相关病理学特征的关系,并从FEZ1/LZT1基因启动子区域甲基化角度探讨IMPC浸润转移的分子机制。 方法采用免疫组织化学LSAB法检测100例IMPC中FEZ1／LZTS1的表达，选取100例IDC-NOS作为对照，比较其差异并分析FEZ1／LZTS1的表达与淋巴结转移等相关病理学特征的关系；运用重亚硫酸盐处理基因组DNA—PCR扩增一直接测序的方法对冻存9例纯型IMPC、9例混合型IMPC、9例正常乳腺组织及4s例IDC组织DNA中FEZ1／LZTS1基因启动子区域甲基化状态进行检测；

FEZ1/LZTS1基因与原发性肝癌相关性研究

目的:研究FEZ1/LZTS1基因和原发性肝癌的相关性。方法:新鲜肝癌组织及正常肝脏组织各96例,分别提取癌组织(其中肝细胞癌86例,胆管上皮癌6例,混合性癌4例)和正常组织总RNA,采用RT-PCR方法检测肝癌组织和正常肝脏组织FEZ1/LZTSl基因mRNA的表达。运用免疫组织化学法(SP法)分别检测96例肝癌和正常肝脏组织标本FEZI/LZTSl基因蛋白表达。结果:FEZ1/LZTS1基因的mRNA表达在96例肝癌组织中的情况如下:27例(28.1%)缺失,28例(29.2%)表达下降,41例(42.7%)表达正常;而FEZ1/LZTS1基因mRNA在相应的96例正常肝脏组织中全部表达。肝癌组织FEZ1/LZTS1基因的mRNA表达与正常肝脏组织相比显著下调(P<0.01)。FEZ1/LZTS1基因蛋白在全部正常肝脏组织中表达,在肝癌组织中30例(31.3%)强阳性(+),20例(20.8%)中度阳性(+/-),26例(27.1%)弱阳性(-/+),20例(20.8%)阴性(-)。结论:与正常组织比,FEZ1/LZTS1基因和蛋白表达在原发性肝癌组织中明显缺失或减少,这可能导致肝癌的发生。

FEZ1/LZTS1基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨FEZ1/LZTS1基因在膀胱移行细胞癌中的表达及在肿瘤发生、发展中的作用。方法:对40例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜应用RT-PCR方法检测FEZ1/LZTS1基因mRNA的表达。结果:FEZ1/LZTS1基因mRNA在正常膀胱黏膜中阳性率100%,无表达缺失;而在膀胱移行细胞癌中阳性率42.50%,阴性率57.50%,两者间阴性率的差异有统计学意义(P<0.01);FEZ1/LZTS1基因mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱移行细胞癌中的阴性率分别28.57%、61.54%和84.62%,三者之间阴性率差异有统计学意义(P<0.05);在表浅性和浸润性膀胱移行细胞癌中阴性率分别为28.57%和89.47%,两者之间阴性率差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论:FEZ1/LZTS1基因mRNA在膀胱移行细胞癌中出现表达缺失,并且与肿瘤的病理分级和临床分期有关。FEZ1/LZTS1基因表达缺失可能作为评价肿瘤分化程度、估计预后的参考指标。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

FEZ1基因在食管癌变过程中的作用

目的探讨FEZ1基因在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其与患者预后的关系。方法采用Western blot和免疫组化法分析FEZ1基因在ESCC中的表达情况,应用SPSS 13.0软件分析其与临床病理资料及预后的关系。结果 FEZ1蛋白阳性表达在食管癌中的表达与浸润深度、肿瘤大小相关(P<0.05);而与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05)。正常食管组织中FEZ1的蛋白表达(4.3±0.39)明显高于食管癌组织中(1.6±0.25),且差异有显著性(P<0.05)。FEZ1的高表达提示患者的5年生存率高。结论 FEZ1基因在食管癌的发生、发展过程中起着重要的作用;FEZ1基因在食管癌中可能是候选的抑癌基因。

大鼠FEZ1基因的克隆及其在中枢神经系统的表达

轴突成束和延伸蛋白ζ-1(fasciculationandelongationproteinzeta-1,FEZ1),是线虫UNC-76蛋白在哺乳动物中的一种同系物,与轴突向外生长、成束、延伸相关。为了克隆该蛋白的基因并观察其在中枢神经系统(CNS)的表达情况,本研究通过FEZ1的特异引物从SD大鼠脑组织中经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得FEZ1基因;通过RT-PCR法分析FEZ1在生后7d的SD大鼠CNS的不同部位(大脑皮层、嗅球、脊髓)的表达情况。成功获得FEZ1的基因克隆,并观察到生后7d的SD大鼠的大脑皮层、嗅球、脊髓内均有FEZ1表达,且脊髓的表达水平较高。本研究结果为进一步研究大鼠FEZ1基因的生物学活性及在神经系统内的表达和应用奠定了基础。

FEZ1基因在食管鳞癌中表达及其病理学相关性的研究

目的:研究FEZ1(fasciculation and elongation protein zeta 1)基因外显子区rs559668多态性表达与食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma ESCC)临床指标及恶性程度的相关性。方法:(1)提取90例食管鳞癌手术切除癌组织标本和正常食管组织标本28例,同时评估鳞癌分化程度及进行TNM分期。(2)应用PCR–RFLP技术扩增FEZ1基因,并对目的基因进行酶切,测定FEZ1基因rs559668的多态性,并进行基因分型,进行不同基因型与临床病理因素的相关性研究。结果:鳞癌组织中C等位基因的频率显著低于正常组织(41.11%vs 67.86%,P<0.05);鳞癌组织中CC基因型频率显著低于正常组织(24.44%vs 42.86%,P<0.05);与CC及TC基因型组相比,TT基因型组分化程度低和浸润程度深TNM分期较晚。结论:FEZ1基因rs559668的C等位基因与食管鳞癌的发生具有相关性,与鳞癌的分化程度、浸润深度、转移范围以及TNM分期呈负相关。因此FEZ1基因可视为一种抑癌基因。

老年宫颈鳞癌组织中亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1和Survivin的表达及意义

目的检测老年人子宫鳞癌中亮氨酸拉链肿瘤抑制基因(FEZ)1和生存素(Survivin)的表达,探讨二者的关系及临床意义。方法宫颈鳞癌老年患者59例为观察组,23例因子宫脱垂切除的全子宫中非肿瘤性的宫颈组织为对照组,应用免疫组化SP法检测两组中FEZ1和Survivin的表达,分析其表达特征及相关性。结果两组FEZ1和Survivin表达的阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。观察组中FEZ1和Survivin表达阳性率与肿瘤的最大径、宫旁浸润密切相关;Survivin表达阳性率与肿瘤淋巴结转移密切相关。观察组中FEZ1和Survivin表达无相关性。结论 FEZ1低表达、Survivin高表达是促进老年人宫颈鳞癌形成的因素,二者参与肿瘤进展。FEZ1和Survivin无明显协同作用。

喉癌组织中FEZ1／LZTS1基因的表达及其临床意义

目的：探讨FEZ1／LZTS1基因在喉鳞状细胞癌中的表达缺失及其与临床病理的关系。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，分析50例原发性喉癌组织和癌旁组织中FEZ1／LZTS1基因的表达情况。结果：FEZ1／LZTS1基因在癌旁组织中表达率明显高于喉癌组织（P〈0．01）；在喉癌组织中FEZ1／LZTS1基因阳性表达率随其病理分级、临床分期升高而降低（P〈0．01），而与患者年龄、性别和原发灶部位无关。结论：FEZ1／LZTS1基因的表达缺失可能对LSCC的发生发展起重要作用，是LSCC发展中的重要分子事件。

肿瘤发生发展与FEZ1／LZTS1关系的研究进展

肿瘤的发生与基因的改变，特别是原癌基因的激活及抑癌基因的失活有密切的联系。在肿瘤的发生过程中，8p的缺失是多种人类肿瘤发生中重要的遗传学改变，人们一直期望如同在3p的缺失区域发现FHIT基因一样在8p发现重要的候选抑癌基因。

抑癌基因研究新进展

乳腺癌缺失基因2(deleted in breast cancer 2,DBC2)、亮氨酸拉链基序编码基因1 (leucine zipper tumor suppressor 1,LZTS1)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1B基因(low density lipoprotein receptor-related protein 1B,LRP1B)是近年来研究较热的3种可能的抑癌基因,越来越多的证据显示这几个基因的突变、异常表达或者增强子的甲基化异常等与多种肿瘤的发生有密切关系。对其进一步的研究将对多种肿瘤的预防和治疗大有裨益。