FG020326通过增加泰素帝介导caspase-8和3激活的敏感性克服多药耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)的主要特征是具有药泵功能的P-gp的高表达,近来研究发现P-gp还抑制caspase依赖方式凋亡,使MDR细胞免于多种形式的caspase依赖性凋亡。本研究拟探讨新型化合物FG020326对耐药细胞MCF-7/ADR的细胞毒作用,克服MCF-7/ADR对泰素帝的凋亡抵抗作用及机制。方法:MTT法测定FG020326体外逆转活性,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测凋亡通路PARP、caspase-3、caspase-8的表达,并用比色法测定caspase-8和3的活性。结果:10μmol/LFG020326作用下MCF-7/ADR细胞对泰素帝耐药性逆转了24倍。10μmol/LFG020326作用下,0.1μmol/L泰素帝可诱导MCF-7/ADR细胞染色质凝集,凋亡小体产生以及出现亚凋亡峰。10μmol/LFG020326作用48h,泰素帝介导的caspase激活敏感性增加,0.1μmol/L泰素帝诱导下出现caspase-8和caspase-3,PARP裂解。与0.1μmol/L泰素帝单独作用相比,10μmol/LFG020326作用下,泰素帝介导的caspase-8和caspase-3活性显著提高,并呈时间依赖性,48h活性最高。结论:新型化合物FG020326可显著逆转MCF-7/ADR对泰素帝的抗药性,通过增加泰素帝介导的caspase-8和caspase-3的激活敏感性克服MDR细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性。

反相高效液相色谱法检测小鼠血浆中FG020326方法的建立

目的建立测定多药耐药（multidrug resistance，MDR）逆转剂FG020326在KM小鼠血浆中血药浓度的方法。方法将KM小鼠（20．0～25．1）g随机分组，每组6只，♀♂各半，尾静脉注射，给药量为30mg·kg^-1，分时取血、处理。采用反相色谱柱，应用外标法测定FG020326在KM小鼠血浆中的血药浓度。结果在所建立的方法学下，FG020326的保留时间为7．9min；标准曲线为·↑Y=0．0144X-0．0285（r=0．9998），在162．5～41600μg·L^-1血浆浓度范围内呈良好的线性关系，最低检测浓度40μg·L^-1（S／N=3）；在650、2600、20800μg·L^-1低、中、高3个浓度下的绝对回收率为68．66％～84．63％，相对回收率为92．58％～110．88％；日内及日间RSD均小于3．2％（n=5）。在室温及冷冻-解冻试验中，FG020326具有良好的稳定性，RSD分别小于1．3％和6．0％。尾静脉单次给药后，FG020326在体内过程符合二室模型，T1/2α为0．088h，T1/2β为5．33h，AUC0-∝。为14183h·μg·L^-1，Vd为0．37L。结论该方法快速、准确、简便，能够满足FG020326药代动力学研究要求。