LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

LncRNA FGD5-AS1对口腔鳞状细胞癌细胞恶性表型的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)FGD5-AS1对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响与机制。方法利用在线数据库分析FGD5-AS1在OSCC中的表达。以在滕州市中心人民医院口腔科收集的30例OSCC患者的肿瘤组织、正常组织和体外培养的人口腔黏膜细胞(HOK)和OSCC细胞(SCC-9、HSC-4、SCC-25、CAL-27)为研究对象,采用qRT-PCR法检测FGD5-AS1和miR-129-5p表达。将FGD5-AS1表达最高的CAL-27细胞分成Control组、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+NC inhibitor组和si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-129-5p的靶向关系;Western blot检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达。构建体内异种移植瘤模型,并分为sh-NC组、sh-FGD5-AS1组、miR-129-5p inhibitor组和sh-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组,检测肿瘤体积和肿瘤;qRT-PCR检测移植瘤组织FGD5-AS1、miR-129-5p表达;免疫组化检测移植瘤组织HMGB1、Ki67表达。结果数据库分析显示,OSCC肿瘤组织中FGD5-AS1的表达水平是正常组织的4倍,且FGD5-AS1表达与OSCC患者分级较差相关。与正常组织或人口腔黏膜细胞相比,肿瘤组织和OSCC细胞系中FGD5-AS1表达明显升高,miR-129-5p表达明显降低(P<0.05),选择FGD5-AS1表达水平最高的CAL-27细胞进行转染实验。沉默FGD5-AS1可升高细胞凋亡率,降低细胞活力、划痕愈合率及侵袭细胞数,并增强miR-129-5p表达,下调HMGB1表达(P<0.05)。miR-129-5p是FGD5-AS1的靶基因,抑制miR-129-5p表达可逆转沉默FGD5-AS1对OSCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。体内实验显示,沉默FGD5-AS1明显抑制移植瘤生长和HMGB1、Ki67表达(P<0.05),抑制miR-129-5p则相反;抑制miR-129-5p可逆转沉默FGD5-AS1对肿瘤生长和HMGB1、Ki67表达的抑制作用(P<0.05)。结论FGD5-AS1在OSCC细胞中上调,干扰FGD5-AS1可通过靶向调控miR-129-5p/HMGB1轴,抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-524-5p调控前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨lncRNA FGD5-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法培养正常人前列腺上皮细胞P69及前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3;qRT-PCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的表达水平;将LNCaP细胞分为si-lncRNA FGD5-AS1组、si-NC组、miR-524-5p组、miR-NC组、anti-miR-524-5p+si-lncRNA FGD5-AS1组、anti-miR-NC+si-lncRNA FGD5-AS1组;CCK-8检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的靶向关系。结果与正常人前列腺上皮细胞P69相比,前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3中lncRNA FGD5-AS1表达水平升高,miR-524-5p表达水平降低(P<0.05)。干扰lncRNA FGD5-AS1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活性降低,细胞克隆数、迁移和侵袭数量减少(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-524-5p;抑制miR-524-5p表达逆转了干扰lncRNA FGD5-AS1对前列腺癌细胞LNCaP增殖、迁移和侵袭的影响。结论干扰lncRNA FGD5-AS1表达通过靶向上调miR-524-5p抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖、迁移和侵袭。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/CDK6轴对膀胱癌细胞恶性生物行为的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA(miR)-129-5p/周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)轴对膀胱癌(BC)细胞恶性生物行为的影响。方法选取105例经确诊为BC的患者肿瘤组织与癌旁组织标本,培养人BC细胞株T24,采用RT-qPCR法测定组织和T24细胞中FGD5-AS1、miR-129-5p和CDK6 mRNA的表达。将T24细胞随机分为对照组(Control组)、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+inhibitor NC组、si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组。CCK-8法检测T24细胞活力、Wound healing实验测定T24细胞迁移、Transwell实验测定T24细胞侵袭、流式细胞术测定T24细胞凋亡、Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase3和CDK6蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证FGD5-AS1和miR-129-5p、miR-129-5p和CDK6的关系。结果BC肿瘤组织中FGD5-AS1、CDK6 mRNA高表达,miR-129-5p低表达(P<0.05)。沉默FGD5-AS1后,FGD5-AS1表达、A 450值、划痕愈合率、侵袭数目、Bcl-2、CDK6表达降低,miR-129-5p表达、凋亡率、Bax、Caspase3蛋白表达升高(P<0.05)。抑制miR-129-5p表达逆转了FGD5-AS1沉默对BC细胞各指标的影响(P<0.05)。FGD5-AS1靶向负调控miR-129-5p表达,miR-129-5p靶向负调控CDK6表达。结论沉默FGD5-AS1可能通过上调miR-129-5p来抑制CDK6蛋白的表达,从而抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为,促进细胞凋亡。

牡荆苷上调FGD5-AS1抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡

[目的]探究牡荆苷对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其与FGD5-AS1的调控关系。[方法]大鼠心肌细胞H9c2分为对照组,H/R组,H/R+牡荆苷低、中、高剂量组,H/R+pcDNA组,H/R+pcDNAFGD5-AS1组,H/R+牡荆苷+si-NC组和H/R+牡荆苷+si-FGD5-AS1组。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白表达,试剂盒检测SOD活性和MDA含量,RT-PCR检测FGD5-AS1表达。[结果]与H/R组比较,H/R+牡荆苷低、中、高剂量组凋亡率各降低13%、25%、48%,Caspase-3蛋白表达量各下降21%、38%、56%,cleaved Caspase-3蛋白表达各下降17%、40%、65%,MDA含量各下降15%、36%、52%,SOD活性升高0.88、2.73、3.86倍,FGD5-AS1表达各升高0.84、1.84、3.00倍(均P<0.05),呈浓度依赖性。与H/R+pcDNA组比较,H/R+pcDNA-FGD5-AS1组凋亡率、Caspase-3和cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量分别下降60%、70%、74%、60%(均P<0.05),SOD活性升高4.04倍(P<0.05)。与H/R+牡荆苷+si-NC组比较,H/R+牡荆苷+si-FGD5-AS1组凋亡率、Caspase-3和cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量上升0.72、1.21、1.38、0.93倍(均P<0.05),SOD活性降低67%(P<0.05)。[结论]牡荆苷可抑制H/R诱导的H9c2细胞氧化应激和凋亡,其作用机制可能与上调细胞中FGD5-AS1表达有关。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。

LncRNA FGD5-AS1通过miR-873-5p/GTPBP4轴促进肝细胞癌发展的研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1对肝细胞癌(HCC)发展的调控机制。方法通过RT-qPCR检测FGD5-AS1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平。采用CCK-8、EdU、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测FGD5-AS1对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用。运用双荧光素酶报告和RNA下拉实验探明FGD5-AS1、miR-873-5p和GTPBP4之间的相互作用。结果FGD5-AS1在肝癌组织和细胞中表达上调。FGD5-AS1表达下调可抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。FGD5-AS1直接与miR-873-5p结合,并竞争性抑制其表达,以提高HCC细胞中促癌基因GTPBP4的表达水平。FGD5-AS1的作用是由miR-873-5p/GTPBP4轴介导的。结论FGD5-AS1可通过调控miR-873-5p/GTPBP4轴从而促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-421对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1与微小RNA-421(miR-421)的靶向调控关系及其对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法利用H/R诱导心肌细胞H9C2损伤,采用实时荧光定量PCR检测lncRNAFGD5-AS1和miR-421表达。在心肌细胞中转染pcDNA-FGD5-AS1、anti-miR-421,或共转染pcDNAFGD5-AS1和miR-421,之后进行H/R损伤。采用试剂盒评估丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞术分析凋亡率,Westernblotting法测定B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证lncRNAFGD5-AS1对miR-421的靶向调控。结果缺氧/复氧使心肌细胞中lncRNAFGD5-AS1表达、SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达减少,并使miR-421表达、MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达增多(P均<0.05)。lncRNAFGD5-AS1过表达降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞的MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达,提高SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达(P均<0.05),抑制miR-421表达与其效果相同。lncRNAFGD5-AS1靶向调控miR-421的表达。共转染pcDNA-FGD5-AS1和miR-421提高缺氧/复氧诱导的心肌细胞的MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达,降低SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达(P均<0.05)。结论在缺氧/复氧诱导的心肌细胞中,lncRNAFGD5-AS1通过靶向miR-421,减轻细胞氧化应激,并抑制其凋亡,从而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-15a-5p表达,上调miR-15a-5p能逆转过表达lncRNA FGD5-AS1对LPS诱导的THP-1细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的影响(P<0.05)。结论:过表达lncRNA FGD5-AS1通过靶向下调miR-15a-5p表达减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-195-5p调控弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞活性

目的:探讨FGD5-AS1靶向miR-195-5p调控弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞增殖及凋亡的分子机制。方法:qRTPCR检测B淋巴母细胞IM-9与弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-Ly1、OCI-Ly4、OCI-Ly10中FGD5-AS1、miR-195-5p表达;si-NC、si-FGD5-AS1、miR-NC、miR-195-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-195-5p、si-FGD5-AS1+anti-miR-NC、si-FGD5-AS1+antimiR-195-5p分别转染OCI-Ly1细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因实验检测FGD5-AS1与miR-195-5p的靶向关系,Western blot检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、β-catenin蛋白表达。结果:与IM-9细胞比较,弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-Ly1、OCI-Ly4、OCI-Ly10中FGD5-AS1表达升高(P<0.05),miR-195-5p表达降低(P<0.05);转染si-FGD5-AS1或miR-195-5p mimics,与阴性对照相比,细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实FGD5-AS1可靶向结合miR-195-5p;OCI-Ly1细胞转染anti-miR-195-5p,与转染anti-miR-NC相比,细胞活力升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05);OCI-Ly1细胞转染si-FGD5-AS1与antimiR-195-5p,与转染si-FGD5-AS1、anti-miR-NC比较,细胞活力升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。结论:干扰FGD5-AS1表达可通过靶向miR-195-5p减弱弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

长链非编码 RNA FGD5-AS1通过miR-542-3p/GTPBP4对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对肝癌细胞放射敏感性的影响及其分子机制.方法:运用qRT-PCR检测FGD5-AS1、miR-542-3p和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况;采用克隆形成实验和流式细胞仪分析FGD5-AS1和GTPBP4表达变化对肝癌细胞系放射敏感性的影响.利用基因沉默、qRT-PCR和Western blot检测FGD5-AS1对miR-542-3p及其靶基因GTPBP4表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析lncRNA FGD5-AS1对miR-542-3p/GTPBP4表达的调控作用.结果:FGD5-AS1和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调,miR-542-3p在肝癌组织和肝癌细胞系中表达下调.沉默FGD5-AS1可增强肝癌细胞Huh7和PLC5的放射敏感性.沉默GTPBP4可以抑制Huh7和PLC5细胞的克隆形成,促进Huh7和PLC5细胞的凋亡,增强Huh7和PLC5细胞的放射敏感性.GTPBP4是miR-542-3p的下游靶基因,miR-542-3p可以负向调控GTPBP4的表达水平;而FGD5-AS1可负向调控miR-542-3p的表达,并正向调控GTPBP4的表达水平;FGD5-AS1对HCC细胞放射敏感性的影响又依赖于miR-542-3p.结论:FGD5-AS1作为miR-542-3p的“分子海绵”竞争性上调GTPBP4的表达进而影响肝癌细胞的放射敏感性.

下调长链非编码RNA FGD5-AS1抑制肾癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的研究lncRNAFGD5-AS1对肾癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法2020年7月至2021年2月,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测FGD5-AS1在肾癌细胞中的表达。以表达最高的肾癌细胞为对象,分别转染小干扰siRNA-FGD5-AS1质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测FGD5-AS1和细胞因子信号转导抑制因子6(suppressorof cytokinesignaling 6,SOCS6)mRNA的表达。Westernblotting检测SOCS6和NF-κB信号通路蛋白表达。二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)实验和Transwell侵袭实验检测细胞增殖和侵袭。结果肾癌细胞株中FGD5-AS1表达均高于近端肾小管细胞(P<0.01),FGD5-AS1在ACHN细胞中表达最多(P<0.01)。对照组和实验组FGD5-AS1表达分别为(1.01±0.09)和(0.20±0.03),差异有统计学意义(t=8.46,P<0.01);SOCS6 mRNA的表达分别为(0.33±0.05)和(1.02±0.13),差异有统计学意义(t=5.05,P<0.01)。与对照组相比,实验组SOCS6蛋白表达增加,NF-κB信号通路蛋白表达均明显降低,实验组ACHN细胞增殖能力降低(均P<0.05)。对照组和实验组的侵袭细胞数分别为(80.49±10.50)个和(32.29±8.03)个,差异有统计学意义(t=3.65,P<0.05)。结论FGD5-AS1在肾癌细胞株中表达增加,下调FGD5-AS1表达可通过正向调控SOCS6基因表达抑制肾癌细胞的增殖和侵袭。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-106a-5p减轻ox-LDL诱导的HUVECs损伤

目的探讨lncRNA FGD5-AS1对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其对miR-106a-5p的调控作用。方法Ox-LDL诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立细胞损伤模型,pcDNA-FGD5-AS1、anti-miR-106a-5p及其阴性对照分别转染至HUVECs后加入ox-LDL处理细胞,pcDNA-FGD5-AS1分别与miR-NC、miR-106a-5p mimics共转染至HUVECs后加入ox-LDL处理细胞;RT-qPCR检测FGD5-AS1、miR-106a-5p的表达量;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的水平;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测FGD5-AS1与miR-106a-5p的靶向关系;Western blot检测cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达量。结果Ox-LDL诱导的HUVECs中FGD5-AS1 mRNA的表达量降低(P<0.05),而miR-106a-5p mRNA的表达量升高(P<0.05);转染pcDNA-FGD5-AS1可降低ox-LDL诱导的HUVECs中MDA的水平、凋亡率与cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平(P<0.05),而增强SOD、CAT的活性(P<0.05);FGD5-AS1可靶向调控miR-106a-5p;转染anti-miR-106a-5p可降低ox-LDL诱导的HUVECs中MDA的水平、凋亡率与cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平(P<0.05),而增强SOD、CAT的活性(P<0.05);pcDNA-FGD5-AS1与miR-106a-5p mimics共转染后可逆转pcDNA-FGD5-AS1对ox-LDL诱导的HUVECs凋亡及氧化应激的作用。结论FGD5-AS1过表达可通过靶向调控miR-106a-5p抑制氧化应激及凋亡,进而减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。

FGD5-AS1调控miR-133a-3p对脓毒症血管内皮细胞的细胞活性、凋亡及炎症因子表达的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(LncRNA FGD5-AS1)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及其分子机制。方法:原代培养大鼠血管内皮细胞,10 mg/ml LPS处理细胞24 h构建脓毒症模型。采用qRT-PCR检测FGD5-AS1与微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达水平。分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-FGD5-AS、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-NC、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-133a-3p转染至血管内皮细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-133a-3p的相互作用;Western blot检测P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。结果:与control组相比,LPS组血管内皮细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),miR-133a-3p的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著升高(P<0.05);与LPS+pcDNA3.1组相比,LPS+pcDNA3.1-FGD5-AS组血管内皮细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著降低(P<0.05);miR-133a-3p过表达可抑制野生型质粒WT-FGD5-AS1细胞的荧光素酶活性,且FGD5-AS1可负向调控miR-133a-3p的表达(P<0.05);miR-133a-3p过表达可逆转FGD5-AS1过表达对LPS诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响。结论:LncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-133a-3p抑制LPS诱导的血管内皮细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。

FGD5-AS1和miR-223在川崎病患儿血浆中的水平及意义

目的探讨川崎病(KD)患儿血浆微小核糖核酸-223(miR-223)、FGD5-AS1的表达水平及临床意义。方法选取收治的KD患儿75例作为KD组,选取同期参加体检的健康儿童60例作为健康对照组,感染发热患儿60例作为发热对照组。根据冠状动脉Z值将KD组患儿分为无冠状动脉损伤组59例和冠状动脉损伤组16例。采用实时荧光定量PCR检测研究对象血浆miR-223、FGD5-AS1表达水平;采用Pearson检验分析KD患儿血浆FGD5-AS1与miR-223表达水平的相关性;使用ROC曲线分析FGD5-AS1、miR-223对KD患儿冠状动脉损伤的诊断价值。结果KD组、发热对照组患儿血小板计数(PLT)、血沉(ESR)及血浆miR-223、白细胞介素-6(IL-6)、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)表达水平均明显高于健康对照组儿童,FGD5-AS1表达水平明显低于健康对照组儿童(P<0.05)。KD组患儿PLT、ESR及血浆miR-223、IL-6、NT-proBNP表达水平均明显高于发热对照组患儿,FGD5-AS1表达水平明显低于发热对照组患儿(P<0.05)。治疗后KD患儿血浆miR-223表达水平明显降低,FGD5-AS1表达水平明显升高(P<0.05)。KD患儿血浆miR-223与FGD5-AS1表达水平呈负相关(P<0.05);miR-223表达水平与血浆IL-6、NT-proBNP表达水平均呈正相关(P<0.05),FGD5-AS1表达水平与血浆IL-6、NT-proBNP表达水平均呈负相关(P<0.05)。冠状动脉损伤组患儿PLT、ESR及血浆miR-223、IL-6、NT-proBNP表达水平均明显高于无冠状动脉损伤组患儿,FGD5-AS1表达水平明显低于无冠状动脉损伤组患儿(P<0.05)。血浆FGD5-AS1、miR-223水平联合检测对KD患儿冠状动脉损伤诊断的曲线下面积为0.907(95%CI:0.845~0.969),优于二者单独检测。结论KD患儿血浆FGD5-AS1表达水平明显降低、miR-223表达水平明显升高,二者间可能存在相互作用参与KD进展,可作为评估冠状动脉损伤发生的有效指标。

lncRNA FGD5-AS1调控miR-761影响骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)中含有5个PH结构域的反义RNA1(PH domain containing 5 antisense RNA 1,FGD5-AS1)和可能机制对骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法收集2016—2018年在本院接受手术的30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和瘤旁组织标本,男18例,女12例;年龄7~69岁,平均年龄(20.2±1.29)岁。采用逆转录定量聚合酶链式反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测FGD5-AS1的表达水平。将骨肉瘤细胞U2OS分为转染小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、转染si-FGD5-AS1(si-FGD5-AS1)组、转染si-FGD5-AS1和miRNA模拟物阴性对照(si-FGD5-AS1+miR-NC)组、转染si-FGD5-AS1和miR-761 mimics(si-FGD5-AS1+miR-761)组、转染si-FGD5-AS1和miRNA抑制物阴性对照(si-FGD5-AS1和anti-miR-NC)组和转染si-FGD5-AS1和miR-761抑制物(si-FGD5-AS1和anti-miR-761)组。噻唑蓝(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法、集落形成实验、流式细胞术分别检测细胞活力、克隆形成能力和细胞凋亡。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定FGD5-AS1对miR-761的靶向调控作用。结果与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中FGD5-AS1的表达水平显著升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-FGD5-AS1组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与si-FGD5-AS1+miR-NC组比较,si-FGD5-AS1+miR-761组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与si-FGD5-AS1和anti-miR-NC组比较,si-FGD5-AS1和anti-miR-761组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著升高,而细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。FGD5-AS1对miR-761具有靶向负性调控作用。结论骨肉瘤中FGD5-AS1呈高表达。抑制FGD5-AS1通过上调miR-761可抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA FGD5-AS1调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(lncRNA FGD5-AS1)调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将大鼠心肌细胞H9c2及人心肌细胞随机分为对照组、模型组、lncRNA FGD5-AS1过表达组、miR-195-5p inhibitor组、阴性对照组、lncRNA FGD5-AS1过表达+miR-195-5p mimics组,分组处理后检测其lncRNA FGD5-AS1、miR-195-5p和PIM1表达、增殖、凋亡、促炎性细胞因子水平。结果与对照组相比,模型组细胞lncRNA FGD5-AS1、PIM1 mRNA及蛋白表达、存活率,增殖率降低(P<0.05);miR-195-5p表达,凋亡率,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);过表达lncRNA FGD5-AS1可逆转模型组细胞上述变化,上调miR-195-5p可减弱过表达lncRNA FGD5-AS1的逆转作用。结论过表达lncRNA FGD5-AS1可通过下调miR-195-5p增强PIM1表达,从而抑制高糖诱导的心肌细胞炎症反应,促进细胞存活,减轻细胞凋亡。

慢性牙周炎患者龈沟液lncRNA FGD5-AS1和lncRNAFAS-AS1水平与病原菌感染相关性研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)FGD5-AS1、LncRNA-FAS-AS1在慢性牙周炎患者龈沟液中的表达及其与病原菌感染、病情严重程度的相关性。方法选取2020年1月-2022年6月本院收治的168例慢性牙周炎患者为研究对象(观察组),根据患者病情程度分为轻度组(74例)、中度组(51例)和重度组(43例),同期选取健康体检者150例为对照组。收集一般资料,比较龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1水平;采用Pearson相关分析龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1表达与牙周指标及病原菌感染的相关性;利用受试者工作特征(ROC)曲线评估lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1水平对慢性牙周炎患者的诊断价值。结果观察组患者龈沟液lncRNA FAS-AS1(0.64±0.15)、lncRNA FGD5-AS1(0.52±0.14)表达水平均低于对照组[(1.01±0.18)、(1.09±0.25)],PD、AL、PLI、SBI水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1水平随病情程度的加重而降低,其中重度组慢性牙周炎患者龈沟液lncRNA FAS-AS1(0.41±0.10)、lncRNA FGD5-AS1(0.29±0.12)表达水平低于轻度组[(0.79±0.17)、(0.67±0.15)]、中度组[(0.62±0.15)、(0.51±0.14)],中度组患者龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1表达水平低于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组共检出病原株249株,对照组共检出37株。观察组牙龈卟林单胞菌、伴放线放线菌、福赛类杆菌检出率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1表达水平与慢性牙周炎患者发生病原菌感染的点二列相关系数分别为-0.782、-0.713,差异有统计学意义(P<0.05);慢性牙周炎患者龈沟液中lncRNA FGD5-AS1、lncRNA FAS-AS1表达与PD、AL、PLI、SBI均呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示,龈沟液lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1水平诊断慢性牙周炎患者的曲线下面积(AUC)分别为0.914、0.890,联合诊断的AUC为0.950,较单一指标检测升高(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者龈沟液中lncRNA FAS-AS1、lncRNA FGD5-AS1表达均下降,二者联合检测对慢性牙周炎患者有一定诊断价值,并与病情程度及病原菌感染的发生密切相关。

lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌细胞恶性生物行为的影响

目的探讨lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌(EC)细胞恶性生物行为的影响。方法qRT-PCR、Westernblot分别检测人EC细胞HEC-1A以及人子宫颈内膜细胞End1/E6E7中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4蛋白表达;将HEC-1A细胞分为NC组、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+inhibitor NC组、si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测lncRNA FGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4的关系;qRT-PCR检测HEC-1A细胞中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p表达;CCK-8法检测HEC-1A细胞增殖情况;流式细胞术检测HEC-1A细胞凋亡;Transwell检测HEC-1A细胞侵袭、迁移数量;Westernblot检测HEC-1A细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平。结果与End1/E6E7细胞相比,HEC-1A细胞中lncRNA FGD5-AS1、SOX4水平均显著上调(P<0.05),miR-129-5p显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-FGD5-AS1组HEC-1A细胞OD450值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA FGD5-AS1表达量、SOX4、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),HEC-1A细胞凋亡率、miR-129-5p表达量、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而miR-129-5p低表达减弱了沉默lncRNA FGD5-AS1抑制HEC-1A细胞恶性生物行为的作用;lncRNA FGD5-AS1靶向调节miR-129-5p/SOX4轴。结论沉默lncRNA FGD5-AS1可能通过上调miR-129-5p来抑制SOX4表达,进而对EC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭产生影响。

红花黄色素对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及其机制

目的探讨红花黄色素是否通过调控lncRNA FGD5-AS1/miR-302a-3p分子轴而减轻高糖诱导的小鼠足细胞损伤。方法体外培养小鼠足细胞,使用高糖与不同剂量的红花黄色素处理细胞。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测FGD 5-AS 1、miR-302 a-3 p表达,双荧光素酶报告实验检测FGD 5-AS 1、miR-302 a-3 p的靶向关系。高糖诱导的小鼠足细胞中分别转染pcDNA-FGD5-AS1与si-FGD5-AS1,并检测细胞增殖及凋亡。Western blot法检测cleaved caspase-12、cleaved-PARP、CHOP、p-eIF2α、GRP78的表达。结果高糖处理后细胞存活率与FGD 5-AS 1的表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-12、cleaved-PARP、CHOP、p-eIF2α、GRP78蛋白表达及miR-302 a-3 p的表达升高(P<0.05),红花黄色素可逆转高糖对细胞FGD 5-AS 1、miR-302 a-3 p表达及增殖、凋亡、内质网应激的作用,双荧光素酶报告实验证实FGD 5-AS 1可靶向结合miR-302 a-3 p,转染pcDNA-FGD5-AS1对高糖诱导的小鼠足细胞增殖、凋亡的作用与红花黄色素的作用相似,转染si-FGD5-AS1可降低红花黄色素对高糖诱导的小鼠足细胞增殖、凋亡的作用。结论红花黄色素可能通过调控FGD5-AS1/miR-302a-3p通路从而减轻高糖诱导的小鼠足细胞损伤。