基于FGF2表达探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及对NLRP3炎症小体的影响

目的探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及分子机制。方法①将18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、红景天苷组,每组6只。对照组不做处理;模型组和红景天苷组分别于实验第1天、第2天、第4天尾静脉注射阿霉素6 mg/kg,红景天苷组在实验第1天时于阿霉素注射前腹腔注射红景天苷8 mg/kg。分别于实验第1天、第7天和第14天称量小鼠体重,超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)。实验第14天,处死小鼠后称心脏和左心室质量,测量胫骨长度,计算心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值,硫代巴比妥酸法测定心肌组织匀浆(总)、心肌组织线粒体部分、心肌组织细胞质部分中丙二醛(MDA)相对含量,DHE荧光探针法测定心肌组织匀浆(总)中活性氧(ROS)含量,Western blot法检测心肌组织中白细胞介素-1β前体(Pro-IL-1β)、IL-1β、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)前体(Pro-Caspase-1)、Caspase-1 p20蛋白表达情况。②取大鼠H9c2心肌细胞,实验设空白组(细胞不做处理)、阿霉素组(加入0.5μmol/L阿霉素处理48 h)、阿霉素+红景天苷组(加入0.5μmol/L阿霉素和10μg/mL红景天苷处理48 h)、阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(加入0.5μmol/L阿霉素+10μg/mL红景天苷+0.1μg/mL FGF2抗体处理48 h),CCK-8测定细胞活力,Western blot法测定细胞中FGF2蛋白表达情况。结果①实验第1天、第7天和第14天,3组小鼠体重比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。实验第7天,模型组和红景天苷组小鼠LVEF均明显低于对照组(P均<0.05),模型组和红景天苷组比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第14天,模型组小鼠LVEF、心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值均明显低于对照组(P均<0.05),红景天苷组均明显高于模型组(P均<0.05)。实验第14天,模型组小鼠心肌组织(总)MDA相对含量、心肌细胞线粒体部分MDA相对含量、心肌组织中ROS含量和心肌组织中IL-1β、NLRP3、Caspase-1 p20蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),红景天苷组上述各指标均明显低于模型组(P均<0.05);模型组小鼠心肌组织中Pro-Caspase-1蛋白相对表达量明显低于对照组(P<0.05),红景天苷组明显高于模型组(P<0.05);各组间心肌细胞胞质部分MDA相对含量和心肌组织中Pro-IL-1β相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。②阿霉素组细胞活力OD值和细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组细胞活力OD值明显高于阿霉素组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显高于阿霉素组(P均<0.05),阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可通过上调FGF2的表达抑制NLRP3炎症小体激活,减轻阿霉素诱导的心脏毒性。

FGF2通过PERK/EIF2α/ATF4信号通路调节缺氧诱导的巩膜成纤维细胞增殖和胶原代谢

目的研究FGF2对缺氧诱导的巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts,SF)增殖和胶原的影响并探讨其可能调节的下游信号通路。方法用5%O2刺激SF 24 h诱导近视SF模型,RT-qPCR检测FGF2 mRNA表达,Western blot检测FGF2蛋白表达。细胞计数试剂盒8(Cell Count Kit-8,CCK-8)、流式细胞术和Western blot分别检测细胞增殖活力、细胞凋亡和胶原代谢相关蛋白collagenⅠ、MMP2以及通路蛋白PERK、p-PERK、EIF2α、EIF2α、ATF4表达。结果缺氧刺激可促进FGF2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01)并激活PERK/EIF2α/ATF4通路(P<0.001),抑制SF细胞增殖(P<0.001)和collagenⅠ表达(P<0.001),诱导MMP2表达(P<0.001)及细胞凋亡(P<0.001)。敲降FGF2或经PERK抑制剂GSK2606414处理可逆转缺氧对SF细胞的作用,促进细胞增殖活力(P<0.001)和collagenⅠ表达(P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01)。结论FGF2通过调节PERK/EIF2α/ATF4通路的激活,影响缺氧诱导的SF增殖及胶原代谢。

慢性应激损害大鼠学习记忆且抑制海马及额叶FGF2蛋白表达

慢性应激能够影响学习和记忆等认知功能。海马和额叶是与学习和记忆联系密切的脑区,参与信息的获得、保持及提取。碱性成纤维生长因子(FGF2)对神经元发生、存活以及损伤修复具有重要促进作用,目前成为神经系统退行性疾病相关研究的热点。本研究旨在探索慢性应激如何影响大鼠学习和记忆能力,以及这一过程中FGF2蛋白在海马和额叶中表达的改变。实验中将16只雄性SD大鼠随机分为对照组和慢性应激组,采用慢性不可预见温和刺激建立大鼠慢性应激模型,通过Morris水迷宫实验及Y迷宫实验检测学习与记忆功能的改变,并对海马及额叶中FGF2蛋白的表达情况进行Western blot及免疫组织化学检测。结果发现,5周慢性应激导致大鼠学习和记忆能力受损,海马及额叶FGF2蛋白表达下调。因此认为,FGF2蛋白可能参与慢性应激损害学习记忆能力的机制,提示FGF2可能是诊断和治疗神经系统退行性病变的分子靶目标。

FGF2通过活化Akt-mTOR信号促进乳腺癌细胞化疗耐受

目的:探讨成纤维细胞生长因子FGF2在介导乳腺癌化疗耐受中的作用及机制。方法:用不同信号通路抑制剂处理两株乳腺癌耐药细胞系MCF-7/5-Fu和T47D/5-Fu,MTS实验检测药物敏感性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白活性变化,ELISA检测FGF2蛋白含量。结果:Akt抑制剂、m TOR抑制剂和FGFR抑制剂能明显逆转耐药细胞对5-Fu和Paclitaxel的耐药性,而ERK1/2抑制剂对耐药细胞的化疗敏感性无明显影响。耐药细胞中p-Akt、和p-S6K(即m TOR活性)水平高于亲本细胞,耐药细胞中FGF2 m RNA和培养上清中FGF2蛋白含量高于相应的亲本敏感细胞。FGF2重组蛋白可增加亲本细胞对5-Fu和Paclitaxel的耐药性,同时活化Akt-m TOR信号通路。结论:FGF2-FGFR-Akt-m TOR信号活化促进乳腺癌化疗耐受。

Klotho对FGF2诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转分化的抑制作用

目的探讨Klotho抑制成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质转分化(epithelia-mesenchymal transition,EMT)的作用及机制。方法重组人Klotho蛋白预孵育前后,倒置显微镜观察FGF2对HK-2细胞形态的影响,免疫荧光检测上皮细胞标志物cytokeratin和间充质细胞标志物vimentin的表达变化,Western blot检测α-SMA、E-cadherin和ERK1/2的表达变化。结果 100 ng/mL的FGF2作用于HK-2细胞48 h后,HK-2细胞变成长梭形,细胞间隙明显增大,上皮细胞标志物E-cadherin的表达明显下降,间充质细胞标志物α-SMA表达明显升高(P<0.05),提示FGF2可以诱导HK-2细胞发生EMT。而Klotho蛋白预孵育可以显著抑制FGF2诱导的EMT,并且FGF2/FGFR(FGFs受体)下游信号分子pERK1/2的表达明显减弱(P<0.05)。结论 Klotho可以通过减弱FGF2信号通路活化抑制FGF2诱导的HK-2细胞EMT,Klotho可能参与了肾间质纤维化的发生和发展。

FGF2/FGFR1/ERK信号通路在高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化中的机制及肾元颗粒的干预作用

目的:探讨FGF2/FGFR1/ERK在高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化中的信号转导机制及肾元颗粒的干预作用。方法:以高糖(30 mmol/L)诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型,分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组。采用CCK-8法确定大鼠血清加入浓度,Western blot及RT-PCR检测FGF2、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达水平,ELISA法分析各组细胞ERK及磷酸化ERK(p-ERK)水平。结果:与正常组比较,模型组FGF2、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达显著增高(P<0.05),p-ERK水平显著增高(P<0.05)。与模型组比较,肾元颗粒组FGF2、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),p-ERK水平显著降低(P<0.05)。结论:肾元颗粒含药血清能通过下调高糖诱导的HK-2细胞FGF2的表达,抑制FGF2/FGFR信号转导途径从而改善肾小管上皮细胞转分化,这可能是其防治糖尿病肾病的机制之一。

miR-195在宫腔粘连组织中的表达及其与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的关系

目的:探讨miR-195在宫腔粘连(IUA)组织中的表达及其与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的关系。方法:选取2017年9月~2019年2月在本院接受宫腔镜治疗的IUA患者118例作为IUA组,同期在本院进行宫腔镜下诊刮的功能失调性子宫出血患者80例作为对照组。比较两组宫腔镜所得组织中miR-195及转化生长因子-β1(TGF-β1)/信号传导蛋白(Smads)、成纤维细胞生长因子(FGF2)/成纤维细胞生长因子受体(FGFR1)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路相关分子表达量的差异,采用Pearson检验评估IUA患者宫腔粘连组织中miR-195表达量与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的相关性。结果:IUA组中miR-195的表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IUA组中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);IUA组中FGF2、FGFR1、ERKmRNA的表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验发现,IUA组中miR-195表达量与TGF-β1/Smads通路相关分子TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达量呈正相关,与FGF2/FGFR1/ERK通路相关分子FGF2、FGFR1、ERK mRNA的表达量呈正相关(P<0.05)。结论:miR-195在IUA病灶组织中高表达,可能通过激活TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK信号通路促进病情进展。

FGF2通过MAPK信号通路影响奶牛乳腺分支形态变化

为确定FGF2调节奶牛乳腺分支主要信号通路,首先将青春期奶牛乳腺类器官镶嵌在鼠尾Ⅰ型胶原中并添加FGF2作三维培养;通过FGFR1受体抑制剂(FGF2+PD173074组)、PI3K/AKT信号通路抑制剂(FGF2+LY-294002组)或MAPK/ERK信号通路抑制剂(FGF2+U0126组)阻断信号通路,确定不同处理下84 h时奶牛乳腺分支率;利用Western blot检测处理时间0、15、60、240和600 min时各组p-AKT、AKT、p-ERK和ERK相对蛋白表达量。研究发现,FGF2主要通过MAPK信号通路影响奶牛乳腺分支。文章揭示FGF2在影响奶牛乳腺分支形态发生中起主要作用的下游信号通路,对奶牛乳腺分支形态发生分子机制研究具有推动作用。

电离辐射对大鼠颌下腺TNFα和FGF2表达的影响

目的:观察照射后大鼠颌下腺TNFα和FGF2的表达变化,探讨放疗后唾液腺纤维化的可能分子机制。方法 :19只大鼠随机分为对照组(只麻醉不照射)、照射组。照射组用15 Gy的X射线进行颌下腺区局部照射1次,照射后3 d和30 d处死大鼠取颌下腺,4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片,免疫组化染色观察颌下腺TNFα和FGF2表达的变化。结果:照射后3 d和30 d大鼠颌下腺TNFα和FGF2表达均升高,30 d组高于3 d组。结论:照射后唾液腺纤维化可能与TNFα和FGF2表达升高有关。

bFGF2抑制BMP9诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2向成骨细胞分化

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)对于骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响,并探讨其机制。方法用BMP9和FGF2重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,测定成骨早期标志物碱性磷酸酶(ALP)活性变化,茜素红S染色观察成骨晚期标志物钙盐沉积,p12SBE-luc荧光素酶报告基因活性检测,Western blot检测经典信号通路smad1/5/8和成骨关键转录因子RUNX2的变化,以及晚期成骨标志物骨钙素(OCN)的表达。结果 FGF2抑制了BMP9诱导的早期成骨指标ALP和晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素的表达,抑制了经典的BMPs-Smad信号通路,抑制了成骨关键的转录因子Runx2的表达。结论 FGF2可抑制BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化。

腹腔冲洗液中FGF2表达改变与子宫内膜异位症的关系

目的检测FGF2蛋白在子宫内膜异位症(EMs)患者及非内异症患者腹腔冲洗液中的表达,探讨其在EMs发生、发展中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测45例子宫内异症患者(EMs组)及40例非内异症患者(对照组)腹腔冲洗液中FGF2水平。结果 (1)在EMs组中,FGF2水平分别为(126.67±39.26)ng·L-1,均高于对照组的(50.31±27.33)ng·L-1,差异具有显著性(P<0.01);(2)在EMs组中,Ⅲ～Ⅳ期患者的FGF2水平为(118.75±45.81)ng·L-1,高于I～Ⅱ期患者的(90.43±22.05)ng·L-1(P<0.05)。结论腹腔冲洗液中FGF2增加可能与EMs发病及发展有关。

PTTG和FGF2表达与前列腺癌骨转移的关系研究

目的:探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的表达与前列腺癌(PCa)骨转移的关系。方法:37例PCa患者,分为无转移组和骨转移组,采用免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法,检测其癌组织中PTTG和FGF2蛋白的表达情况。结果:骨转移组PTTG和FGF2蛋白的表达程度均高于无转移组,两组比较有显著性差异。且PTTG蛋白的表达与FGF2蛋白相关。结论:PTTG、FGF2的蛋白表达可能在PCa的骨转移过程中发挥重要作用,且二者具有协同作用。

FGF2基因转染对人牙周膜细胞生物学性状的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(FibroblastGrowthFactor2,FGF2)基因转染对人牙周膜细胞(Periodontalligamentcells,PDLCs)生物学性状的影响。方法:将FGF2基因转入PDLCs,通过免疫组化SABC及免疫印记法检测其稳定表达,并检测转基因细胞增殖活力及碱性磷酸酶合成情况。结果:免疫细胞化学证实转染与未转染细胞均在胞浆内表达FGF2,但转染FGF2细胞较未转染组染色深,免疫印迹杂交结果显示转染前后均表达17KDFGF2,但转染后表达量增高。FGF2基因转染可增强细胞增殖能力,但碱性磷酸酶活性未见明显变化(P>0.05)。结论:FGF2基因能被转入PDLCs并得到稳定表达,转基因细胞增殖与合成明显增强,但转染FGF2基因不能促进细胞分化。

促红细胞生成素在大鼠肺缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)在肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的作用及其机制。方法:健康雄性成年SD大鼠40只,随机分成5组(n=8),即对照组、EPO单给药组(3000 U/kg)、LIRI模型组、LIRI模型+EPO预防组(3000 U/kg)(EPO预防组)、LIRI模型+EPO治疗组(3000 U/kg)(EPO治疗组)。RT-qPCR法测定Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA的表达;TUNEL法检测肺细胞凋亡情况;免疫组织化学法测定肺组织中FGF23的表达水平;Western blot检测FGF23、FGFR4、p-ERK1/2蛋白的表达水平;光镜下观察肺组织的病理变化。结果:与对照组比较,模型组Bax、caspase-3 mRNA表达上调(P<0.01),而Bcl-2、FGF23和FGFR4、p-ERK1/2 mRNA表达下降(P<0.01),肺组织损伤和细胞凋亡加重;EPO预防组和EPO治疗组与模型组比较,Bax、caspase-3 mRNA表达下降(P<0.01),而Bcl-2、FGF23和FGFR4、p-ERK1/2 mRNA表达上调(P<0.01),肺组织损伤和细胞凋亡减轻。结论:EPO能减轻LIRI,其机制可能通过FGF23/FGFR4/p-ERK1/2信号通路,上调凋亡抑制因子Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax、caspase-3的表达,改善其结构破坏和细胞凋亡。

FGF2基因转染人牙周膜细胞及其稳定表达和鉴定

目的探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrobbst growth factor,FGF2)基因在人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)获得稳定表达的可能性。方法提取重组真核表达栽体pcDNA3-FGF2利用细胞培养和细胞基因转染技术体外转染pcDNA3-FGF2基因至PDLCs；利用免疫组化SABC法和免疫印迹杂交技术检测细胞转染4周后FGF2基因的表达情况。结果免疫细胞化学证实转染与未转染细胞均在胞浆内表达FGF2，免疫印迹杂交结果显示转染前后均表达17KD FGF2，但转染后表达量增高。结论在脂质体的介导下。重组真核表达载体pcDNA3-FGF2能够转染PDLCs并获得稳定表达。

秦川肉牛FGF2基因多态性与其生长和肉质性状的关联分析

【目的】研究秦川肉牛FGF2基因的多态性及其与肉牛生长和肉质性状的关联性。【方法】选取18~24月龄的健康秦川肉牛384头,测定其生长和肉质性状指标,采集血样,采用DNA技术检测FGF2基因全部外显子中的单核苷酸突变位点,对突变位点进行基因型分型,研究其单核苷酸基因多态性(SNP),并以一般线性模型(GLM)分析该SNP位点与秦川肉牛生长和肉质性状的关联性。【结果】在第1、2外显子上未发现突变位点,在第3外显子上存在4个SNP突变位点:SV1(g.A54740>T),SV2(g.A54758>C),SV3(g.T56809>C)和SV4(g.C59443>T)。其中,SV1有AA、AT和TT 3种基因型,SV2有AA、AC和CC 3种基因型,SV3有TT、TC和CC 3种基因型,SV4有CC、CT和TT 3种基因型。相比其野生基因型,SV1位点突变会降低体斜长、体高、腰高、胸深、胸围、腰角宽、尻长和体质量性状(P<0.05);SV2、SV3和SV4位点突变会改善这些性状(P<0.05);SV1位点突变会降低坐骨端宽性状(P<0.05),但SV3和SV4位点突变会改善坐骨端宽性状(P<0.05);SV4位点突变会改善背膘厚性状(P<0.05);SV2和SV4位点突变会改善眼肌面积性状(P<0.05);SV1突变会改善肌间脂肪性状(P<0.05)。【结论】FGF2基因对秦川肉牛生长性状和肉质性状有一定影响,可作为秦川肉牛现代分子选育的候选参考基因。

饲养层FGF2表达量对猕猴胚胎干细胞自我更新及多能性的影响

用转基因和RNA干扰(RNAi)法建立5组不同成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF2)表达量的猕猴耳部皮肤成纤维细胞(MESF)系:过表达FGF2组(f1),过表达的阴性对照组(f2),FGF2RNA干扰组(f3),RNA干扰的阴性对照组(f4)和未作任何处理的对照组(f5)。5组MESF的FGF2表达量相对值为f1:f2:f3:f4:f5=4∶2∶1∶2∶2;c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1在f1中表达量上升,在f3中表达量下降;BMP4,TGF-β2在f1中表达量下降,在f3中表达量上升;表明内源FGF2能够作用于MESF的TGF-β信号通路,引起相关基因表达量的变化。用这些细胞作为饲养层长期培养(10代)猕猴胚胎干细胞(RhESC),结果在f1上培养的RhESC增殖速度都比对照组快,并且c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1,Oct-4,Nanog,Sox2表达量均上升,BMP4表达下调;在f3上培养的RhESC增殖较慢,BMP4表达上调,c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1,Oct-4,Nanog,Sox2表达下调。5组MESF上培养的RhESC形成的EB均表达各胚层早期标记基因(marker),说明RhESC的多能性没有受到影响,但表达量有差异,f1上RhESC形成的EB所有marker都低表达。结果表明饲养层的FGF2含量不仅影响自身相关基因的表达,还对RhESC的自我更新有一定的作用。

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的:探究microRNA-101(miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting(WB)法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果:miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞(均P<0.05),而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01),且使细胞中E-cadherin的表达增多(P<0.05)而Vimentin(P<0.05)、N-cadherin(P<0.01)和p-ERK1/2(P<0.05)的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.05),引起细胞中E-cadherin表达明显降低而Vimentin、N-cadherin和p-ERK1/2表达水平增高(均P<0.05)。采用WB法和双荧光素酶报告基因实验验证了FGF2是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01),以及减少细胞中E-cadherin的表达(P<0.01)而增加Vimentin(P<0.01)、N-cadherin(P<0.05)和p-ERK1/2(P<0.05)表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P<0.01),其E-cadherin的表达增多(P<0.01)而Vimentin(P<0.01)、N-cadherin(P<0.05)和p-ERK1/2表达水平下降(P<0.01)。结论:miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化(EMT)过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。

FGF2和VEGF对食管鳞癌、腺癌荷瘤裸鼠肿瘤组织结构血管、灌注血管及缺氧程度的影响分析

目的 探索FCG2及VEGF对食管癌结构血管和灌注血管的影响,阐明与食管癌快速生长、转移密切相关的血管生成调节机制。方法 本实验采用人食管癌细胞系TE-1(鳞状细胞癌),SEG-1和BIC-1(腺癌)及其荷瘤动物模型。利用体外细胞培养技术观察重组人FGF2、VEGF对三种细胞系生长增殖的影响,采用多探针RNA酶保护性分析方法检测FGF2和VEGFmRNA水平,采用免疫组织化学和免疫荧光方法观察食管癌组织结构血管、灌注血管密度及瘤内缺氧程度的影响。结果 ①体外细胞培养实验中,不同浓度FGF2(10ng,100ng)对人食管癌细胞系TE-1,SEG-1和BIG-1的增殖速度和生长曲线无影响。②FGF2和VEGRmRNA基础水平的定量检测显示食管鳞癌细胞系TE-1的FGF2为4.92,VEGF为57.57。食管腺癌细胞系SEG-1的FGF2、VEGF分别为49和53.62;BIC-1不表达FGF2,VEGF为17.04。③在TE-1、SEG-1、BIC-1三种食管癌荷瘤裸鼠模型中,FGF2、VFGF对食管癌结构血管(CD31)以及灌注血管(DIOC7)平均距离的影响分析显示:VEGF处理组结构血管和灌注血管密度较对照组显著增加(P<0.05),FGF2处理组结构血管和灌注血管密度在SEG-1模型中显著增加(P<0.05)。④在TE-1和BIC-1模型中,FGF2处理组EF5/Cy3染色的平均强度与对照组无明显差别,VEGF处理组EF5/Cy3染色的平均强度明显降低。

关中奶山羊FGF2基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】对关中奶山羊成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在山羊各组织中的表达差异,为后续探究该基因的功能奠定基础。【方法】以关中奶山羊乳腺cDNA为模板,采用RT-PCR技术扩增并克隆关中奶山羊FGF2基因完整CDS区序列,进行相似性比对、系统发育树构建及生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR方法检测FGF2基因在关中奶山羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、肺脏、乳腺和卵巢组织中的表达情况。【结果】关中奶山羊FGF2基因编码区长468 bp,可编码155个氨基酸,分子质量为17.26 ku,理论等电点为9.58,其中含量最高的是甘氨酸,占10.3%。相似性比对结果表明,关中奶山羊FGF2氨基酸序列与人、牛、马、兔、绵羊、虎鲸和野猪的相似性分别为98.7%、99.4%、100.0%、98.7%、99.4%、99.4%和62.6%。系统进化树显示,FGF2基因在不同物种间具有高度保守性,与马的亲缘关系最近。关中奶山羊FGF2蛋白不稳定指数为38.39,属于稳定亲水性蛋白质,不含跨膜结构和信号肽;FGF2蛋白二级结构含有α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲,分别占比10.32%、14.19%、30.97%、44.52%。蛋白质互作预测分析显示,FGF2蛋白与FGFR、KDR、FGF1、FGFR4、MET和FGFR1等与乳腺生长发育相关的蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR检测到关中奶山羊FGF2基因在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、肺脏、乳腺和卵巢中均有表达,在乳腺中表达水平最高,其次为卵巢,在背最长肌中的表达水平最低。【结论】关中奶山羊FGF2基因CDS区序列长468 bp,编码155个氨基酸,为亲水蛋白,二级结构以延伸链和无规则卷曲为主。FGF2基因在关中奶山羊泌乳高峰期的不同组织中均有表达。本试验结果为进一步探究FGF2基因在关中奶山羊乳腺发育中的作用及其具体功能提供了参考。