PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备

本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。

转FGF5s基因的陕北白绒山羊粪便菌群分析

为了对转FGF5s基因陕北白绒山羊的生物安全进行评价,试验以转FGF5s基因和野生型陕北白绒山羊为研究对象,采集其新鲜粪便样品,用灭菌生理盐水进行梯度稀释后分别接种LB固体培养基、胆硫乳琼脂培养基、肠球菌琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基和甘露醇盐琼脂培养基,37℃恒温过夜培养后分别对培养基上生长的所有需氧菌、沙门氏杆菌、肠球菌、大肠菌群和金黄色葡萄球菌进行菌落计数,并进行差异显著性检验。结果表明：微生物在5种培养基上形成不同的菌落形态,菌落计数之后对数据进行统计分析,结果差异不显著（P〉0.05）。说明转FGF5s基因与野生型陕北白绒山羊粪便中的需氧菌菌群结构间不存在显著差异。