METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化对宫颈癌细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨METTL14通过调控巨噬细胞分化抑制宫颈癌病理性发展及相关机制。方法检测宫颈癌病变样本METTL14 m RNA和蛋白,以及IL-6、iNOS、Arg-1和CD206表达变化。PMA诱导THP-1细胞转化为巨噬细胞,慢病毒过表达或抑制METTL14表达,检测IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化以及PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况。随后加入PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路激动剂和抑制剂,检测过表达或抑制METTL14后,巨噬细胞IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化,并取其上清制成条件培养基,孵育Hela细胞,检测细胞凋亡和增殖情况。结果1)宫颈癌病变组织中METTL14 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),巨噬细胞M1型标志物IL-6和iNOS表达明显降低(P<0.05),而M2型标志物Arg-1和CD206表达明显升高(P<0.05)。2)巨噬细胞过表达METTL14后,IL-6和iNOS表达明显升高(P<0.05),而Arg-1和CD206表达明显降低(P<0.05),M1/M2比例升高;抑制METTL14表达后,M1型标志物降低(P<0.05),M2型标志物升高(P<0.05),M1/M2比例降低。3)巨噬细胞中转染OE-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被抑制(P<0.05);加入PI3K/AKT激动剂后,M1型标志物降低而M2型标记物升高(P<0.05),M1/M2比例降低;OE-METTL14可逆转此趋势。Sh-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被激活(P<0.05),加入PI3K/AKT抑制剂后,M1型标志物升高而M2型标记物降低(P<0.05),M1/M2比例升高;Sh-METTL14可逆转此趋势。4)取转染OE-METTL14慢病毒后的巨噬细胞上清培养Hela细胞,可见细胞凋亡明显增多(P<0.05),增殖明显减少(P<0.05)。Sh-METTL14组的Hela细胞则表现出细胞凋亡减少(P<0.05),增殖增多(P<0.05)。结论METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化可能有促进宫颈癌细胞凋亡,抑制增殖的作用。

miR-491-5p靶向FGFR4调节GSK3β/β-catenin信号通路对小儿肝母细胞瘤增殖和迁移的影响

目的探讨miR-491-5p靶向FGFR4调节GSK3β/β-catenin信号通路对小儿肝母细胞瘤增殖和迁移的影响。方法qRT-PCR检测小儿肝母细胞瘤组织、瘤旁正常组织、正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4 mRNA的表达,Western blot检测FGFR4蛋白表达;荧光素酶活性分析实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系;mimic NC,miR-491-5p mimic、pcDNA3.1质粒和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染HuH-6细胞,qRT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达;CCK-8实验检测HuH-6细胞增殖能力的变化,细胞迁移实验分析HuH-6细胞迁移能力的变化;Western blot实验检测HuH-6细胞中GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的表达。结果小儿肝母细胞瘤组织和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p表达量降低,FGFR4表达量升高;荧光素酶活性分析实验表明miR-491-5p靶向调控FGFR4;qRT-PCR和Western blot实验表明miR-491-5p抑制FGFR4表达;CCK-8和细胞迁移实验表明,miR-491-5p mimic抑制肝母细胞瘤细胞HuH-6的增殖和迁移,而pcDNA3.1-FGFR4可逆转miR-491-5p mimic对HuH-6细胞增殖和迁移的抑制作用;Western blot实验显示,miR-491-5p mimic可抑制p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的表达,pcDNA3.1-FGFR4可逆转miR-491-5p mimic对p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的抑制作用。结论miR-491-5p负向调节FGFR4,抑制肝母细胞瘤细胞的增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活相关。

基于SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路研究右美托咪定对脓毒症模型大鼠脑损伤的保护机制

目的:通过右美托咪定(Dex)对脓毒症模型大鼠脑损伤中沉默信息调节因子1(SIRT1)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合酶激酶3β(GSK3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探究其对脑损伤的保护作用机制。方法:选取雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、CLP+Dex组(10μg/kg Dex)、CLP+Dex+Sirtinol组(10μg/kg Dex+2μL/100 g SIRT1抑制剂Sirtinol),每组20只。造模前2 h,CLP+Dex+Sirtinol组大鼠经侧脑室注射给予Sirtinol;各组大鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型(Sham组仅手术但不结扎穿孔)。造模结束后0、3、6 h,CLP+Dex组、CLP+Dex+Sirtinol组大鼠分别腹腔注射Dex(10μg/kg),Sham组和CLP组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。末次给药24 h后,检测大鼠脑组织含水量、伊文思蓝(EB)含量、大脑皮层组织细胞凋亡情况和脑组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,以及海马组织中SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,CLP组大鼠脑组织含水量、EB含量、大脑皮层组织凋亡细胞数及脑组织中IL-1β、TNF-α表达水平显著增加或升高(P<0.05);海马组织SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与CLP组比较,CLP+Dex组大鼠脑组织含水量、EB含量、大脑皮层组织凋亡细胞数及脑组织中IL-1β、TNF-α表达水平显著减少或降低(P<0.05);海马组织中SIRT1、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。而Sirtinol可显著逆转Dex的上述脑保护和因子调节作用(P<0.05)。结论:Dex对脓毒症模型大鼠具有脑保护作用,该作用可能是通过激活SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路而发挥抗炎、抗凋亡等作用,从而减轻脑水肿、保护血脑屏障并减轻脑损伤。

GSK3β/β-catenin信号通路在运动和氟西汀改善CUMS小鼠抑郁行为中的作用机制

目的探究游泳运动和氟西汀对CUMS小鼠抑郁行为及GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法采用雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,每组8只:Con组,即普通控制组;CUMS组,实验小鼠接受7周的慢性不可预见性温和应激;CUMS+Saline组,从应激的第4周开始腹腔注射生理盐水4周;CUMS+Flu组,从应激的第4周开始腹腔注射抗抑郁药物氟西汀(Fluoxetine,Flu)4周;CUMS+Swim组,从应激的第4周开始进行游泳训练4周。实验干预结束后,所有小鼠接受行为学检测。断头处死取海马组织,采用Western blotting技术检测相关基因的蛋白表达水平。结果 (1)行为学实验显示,与Con组相比,CUMS组糖水偏好显著降低(P<0.05),强迫游泳(FST)和悬尾实验(TST)不动时间显著增加(P<0.01),开场实验(OFT)探洞次数显著减少(P<0.05);与CUMS+Saline组相比,CUMS+Flu组糖水偏好显著增加(P<0.05),FST和TST不动时间显著减少(P<0.05),OFT探洞次数显著增加(P<0.01);与CUMS组相比,CUMS+Swim组糖水偏好无显著变化,FST(P<0.05)和TST(P<0.01)不动时间显著减少,OFT探洞次数显著增加(P<0.01)。(2)Western blotting实验显示,与Con相比,CUMS组海马组织中pGSK3β(Ser9)、β-catenin的蛋白水平显著降低(P<0.05);与CUMS+Saline相比,CUMS+Flu组海马组织中β-catenin的蛋白水平显著升高(P<0.05),GSK3β、pGSK3β(Ser9)、pGSK3β(Tyr216)的蛋白水平无显著变化;与CUMS组相比,CUMS+Swim组海马组织中GSK3β(P<0.01)、pGSK3β(Ser9,P<0.05)、β-catenin(P<0.05)的蛋白水平显著升高。结论运动和氟西汀均可缓解CUMS所致的小鼠抑郁行为;慢性应激诱导抑郁行为可能涉及GSK3β/β-catenin信号通路的功能紊乱;运动和氟西汀均提高小鼠对慢性应激的耐受性从而控制抑郁病理进程,二者发挥作用的分子机制有所不同,运动缓解抑郁行为可能涉及纠正海马组织中GSK3β/β-catenin信号通路紊乱,而氟西汀缓解抑郁行为可能是非GSK3β/β-catenin依赖性的。研究论证了慢性应激期的运动干预效果媲美于抗抑郁药物氟西汀,并提出了相应的分子行为学依据。深入探究不同抑郁病理期的运动干预模式及其潜在的分子机制,将为运动抗抑郁的转化研究提供新靶向。

锁阳多糖通过激活PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的从MC3T3-E1小鼠前成骨细胞中PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的角度,揭示锁阳多糖(cynomorium songaricum polysaccharide,CSP)的促成骨分化机制。方法使用含有不同浓度CSP的成骨诱导液培养MC3T3-E1细胞,在第1、3、5、7天采用MTT法检测细胞活力。随后分为Con组(0μg/m LCSP)、CSP组(100μg/m L CSP)及CSP+BEZ组(100μg/m L CSP及50μmol/L BEZ(PI3K特异性抑制剂));干预14 d后采用茜素红染色观察比较MC3T3-E1的成骨分化情况、Real-time PCR定量分析相关成骨分化m RNA,如Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素(Osteocalcin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的表达水平;并使用Western blot法检测Runx2、CollagenⅠ、Osteocalcin成骨相关蛋白;PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路蛋白的表达情况,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况。结果与Con组(0μg/m L)相比,CSP干预均可有效促进MC3T3-E1增殖,100μg/m L的效果更加明显。与Con组比较,CSP可有效促进MC3T3-E1细胞茜素红染色的阳性率,以及成骨相关的m RNA、蛋白表达水平(P<0.05),以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05),同时还可促进β-catenin入核;但是这些促进作用均可被BEZ逆转。结论CSP可能通过激活PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路,诱导MC3T3-E1细胞成骨分化。

慢性氧化应激激活GSK3β/β-catenin信号通路增强乳腺癌细胞MCF-7活性的机制研究

目的建立MCF-7乳腺癌细胞慢性氧化应激细胞模型,观测MCF-7乳腺癌细胞在慢性氧化应激下的增殖情况,探讨慢性应激状态对乳腺癌增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法 CCK-8法检测MCF-7分别在急性氧化应激和慢性氧化应激干预的情况下的增殖抑制率,通过划痕实验和transwell实验检测慢性氧化应激条件下MCF-7细胞迁移和侵袭的能力。通过ELISA法测定IL-6水平,检测慢性氧化应激模型条件下MCF-7的超氧化物歧化酶活性(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)。qPCR及Western blot检测GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白及RNA表达水平。结果与急性氧化应激比较,慢性氧化应激条件下,MCF-7的增殖能力增强,其SOD和T-AOC的能力也进一步增强。其迁移和侵袭的能力均强于野生型和急性氧化应激下的MCF-7。该结果和IL-6蛋白表达,GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白和RNA表达相一致。同时发现三黄煎剂能够抑制MCF-7慢性氧化应激细胞的增殖。结论慢性氧化应激状态能够促进MCF-7乳腺癌细胞增殖和转移,其机制可能与GSK3β/β-catenin信号通路激活和IL-6表达增加相关。

Wnt信号通路中β-catenin、GSK3β及Lef-1在卵巢癌中的表达及其意义

目的研究Wnt信号通路相关因子β-catenin、GSK3β及Lef-1在卵巢癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学En Vision法检测218例人卵巢组织(包括正常组织,卵巢良性腺瘤及腺癌组织标本)中β-catenin、GSK3β及Lef-1的表达情况。结果β-catenin、GSK3β及Lef-1在癌组织中的表达明显高于腺瘤及正常组织(P<0.05);β-catenin及Lef-1表达与淋巴结转移及FIGO分期有关(P<0.05),与肿瘤分级无关(P>0.05);GSK3β与肿瘤分级、淋巴结转移及FIGO分期有关(P<0.05);β-catenin、GSK3β及Lef-1三者在癌中的表达均与卵巢癌的类型无关(P>0.05)。β-catenin表达与GSK3β和Lef-1表达均呈正相关(P<0.05)。结论 Wnt信号通路中β-catenin、GSK3β及LEF-1在卵巢癌的发生发展过程中起了一定的作用,卵巢癌的进展可能和β-catenin分别与GSK3β及LEF-1共同作用促进细胞的增殖有关,三者高表达与卵巢癌的预后有关。

低频脉冲电磁场通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号途径促进成骨细胞矿化成熟

低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)可以促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calarial osteoblasts,ROB)的矿化成熟,但其具体机制尚不清楚。本实验主要研究PEMFs促进大鼠成骨细胞成熟矿化与PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的关系,以PEMFs促进成骨细胞成熟矿化的机制。首先,将成骨细胞经不同强度PEMFs处理后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,以探明PEMFs促进成骨分化的最佳磁场强度;接着,采用蛋白质印迹法检测PEMFs处理不同时间后细胞内PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、β-联蛋白的变化情况;最后,细胞经PI3K特异性阻断剂处理后,检测ALP活性变化、钙盐沉积情况、成骨性相关基因RUNX2、BMP2表达量,以及BMP2/Smad1/5/8信号途径的变化情况,同时也检测了该条信号途径下游蛋白质表达量及相关转录因子的核易位情况。结果发现,磁场强度为0.6 mT时,ALP活性最高;PEMFs处理成骨细胞不同时间后,PI3K、AKT和GSK3β总蛋白质无明显变化,但是p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β、β-联蛋白的表达量较对照组显著升高,同时β-联蛋白发生核易位;经过PEMFs处理的成骨细胞的ALP活性显著升高,成骨性相关基因表达量明显增加,钙盐沉积能力增强,BMP2/Smad1/5/8信号途径被激活;在加入PI3K特异性阻断剂后,PEMFs促进成骨细胞矿化成熟的能力消失,并且不再提高该条信号途径下游蛋白质的表达和相关转录因子的核转位。上述结果提示,0.6 mT PEMFs促进成骨分化的此过程中激活了PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路,若该条信号通路被抑制,则电磁场促成骨作用被抵消,表明低频脉冲电磁场促进成骨细胞矿化成熟依赖于PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号途径,这为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了理论基础。

珠子草素调控GSK3β/β-catenin通路对结肠癌大鼠肿瘤生长和免疫功能的影响

目的探讨珠子草素(Phy)调控糖原合成酶激酶(GSK)3β/β-catenin通路对结肠癌大鼠肿瘤生长和免疫功能的影响。方法通过颈部皮下注射1,2-二甲肼建立结肠癌大鼠模型;将造模后的大鼠随机分为造模组,Phy低(Phy-L)、中(Phy-M)、高剂量(Phy-H)组,Phy-H+氯化锂组,并以颈部皮下注射等体积生理盐水的10只大鼠为对照组,干预结束后,腹部主动脉取血,用于单核细胞数、淋巴细胞率及中性粒细胞率检测;取出瘤块、脾脏及胸腺称量,计算抑瘤率、脾脏及胸腺指数;分离结肠组织,分析其组织病理学变化及GSK3β、β-catenin、增殖蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1 mRNA及相应蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组结肠腺体紊乱,有炎性细胞浸润、大小不等的肿瘤结节出现,GSK3βmRNA及蛋白表达、脾脏指数、胸腺指数、淋巴细胞率显著降低,但β-catenin、CyclinD1 mRNA及蛋白表达、单核细胞数、中性粒细胞率显著增加(P<0.05);与模型组相比,Phy-L组、Phy-M组、Phy-H组病理损伤得到改善,GSK3βmRNA及蛋白表达、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数、淋巴细胞率显著增加,但β-catenin、CyclinD1 mRNA及蛋白表达、肿瘤质量、单核细胞数、中性粒细胞率显著降低(P<0.05);与Phy-H组相比,Phy-H+氯化锂组病理损伤加重,GSK3βmRNA及蛋白表达、脾脏指数、抑瘤率、胸腺指数、淋巴细胞率显著降低,但β-catenin、CyclinD1 mRNA及蛋白表达、单核细胞数、肿瘤质量、中性粒细胞率显著增加(P<0.05)。结论Phy可抑制结肠癌大鼠肿瘤生长,提高大鼠免疫功能,可能与激活GSK3β/β-catenin通路有关。

锂剂调控GSK3β介导的Wnt／β-catenin通路对骨骼系统的作用

锂剂治疗躁狂症及双向情感障碍已有100多年的历史，至今仍是最有效的药物之一，约有三分之二的患者经治疗后有效，并且是治疗急性双向情感障碍或防止其复发的唯一有效药物Ⅲ。锂剂在神经系统和血液系统中的作用已有广泛研究。在神经系统方面，锂剂能有效治疗双向情感障碍，可能与其能提高脑中神经营养因子水平、促进神经再生、提高神经元整合性以及防止神经元凋亡作用有关。在血液系统方面，锂剂可用于治疗放、化疗后，自身免疫性以及毒性作用导致的粒细胞减少症，且大部分病例疗效显著。锂剂也用于调节免疫系统，例如，锂剂常联合疫苗接种，局部使用治疗银屑病等，这与其能有力刺激骨髓干细胞，定向诱导成粒细胞同时减少淋巴细胞生成有关。

miR-491-5p靶向FGFR4调节肝母细胞瘤细胞增殖和迁移

目的探讨miR-491-5p靶向调节FGFR4对肝母细胞瘤增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法采用qRT-PCR检测15例小儿肝母细胞瘤组织及其癌旁正常组织,正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4mRNA的表达;Western blot检测FGFR4蛋白表达;TargetScan数据库预测miR-491-5p靶点;双荧光素酶报告基因实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系。将mimic NC、miR-491-5p mimic、pcDNA3.1和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染至HuH-6细胞后,采用q RT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot检测GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果小儿肝母细胞瘤组织和HuH-6细胞中miR-491-5p表达水平均低于癌旁正常组织及肝细胞LO2(P<0.05),而FGFR4表达水平高于癌旁正常组织及肝细胞LO2(P<0.05);TargetScan数据库预测显示miR-491-5p与FGFR4存在结合位点。与mimic NC组比较,过表达miR-491-5p可抑制FGFR4表达、HuH-6细胞增殖和迁移能力及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin及p-C-myc/C-myc比值(均P<0.05)。与mimic+Pc组比较,过表达FGFR4可逆转过表达miR-491-5p对HuH-6细胞增殖、迁移及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin和p-C-myc/C-myc比值的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-491-5p通过负向调控FGFR4抑制肝母细胞瘤细胞增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活有关。

片仔癀保护小鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障的分子机制研究

目的:探讨片仔癀对局灶性脑缺血再灌注小鼠血脑屏障(BBB)的保护作用及其分子机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组(120 mg/kg)、片仔癀低剂量组(370 mg/kg)、片仔癀高剂量组(740 mg/kg)和片仔癀(740 mg/kg)+LY294002(20 mg/kg)组,除假手术组以外,其余各组小鼠采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,假手术组不插入线栓。再灌注后2 h,各给药组分别灌胃给予相应药物(LY294002采用腹腔注射),假手术组与模型组同期灌胃等量生理盐水,各组均每日给药1次,连续3 d。末次给药后2 h,各组分别取8只小鼠进行神经功能缺陷评分,评分结束后,处死小鼠取脑,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑梗死情况并计算脑梗死率;各组分别取3只小鼠,处死取脑,苏木素-伊红(HE)染色,观察脑组织病理学改变;各组分别取6只小鼠,采用伊文思蓝(EB)法检测BBB通透性;各组分别取6只小鼠,分离缺血侧大脑皮层组织,其中3只小鼠提取总蛋白,采用Westernblot法检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合酶激酶-3β(p-GSK3β)、胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)的表达水平,另3只提取核蛋白用于检测β-连环蛋白(β-catenin)的核转位水平。结果:模型组小鼠的神经功能缺陷评分、脑梗死率均显著高于假手术组(P<0.01),丁苯酞组及片仔癀高剂量组小鼠上述指标均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),片仔癀低剂量组小鼠脑梗死率显著低于模型组(P<0.01),片仔癀+LY294002组上述指标与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),其中神经功能缺陷评分显著高于片仔癀高剂量组(P<0.05)。HE染色后脑组织病理变化提示,模型组小鼠缺血区脑组织水肿,神经元胞体变性;片仔癀高剂量组和丁苯酞组小鼠脑组织神经元变性坏死明显减轻;片仔癀+LY294002组小鼠脑组织病理改变较片仔癀高剂量组明显加重。模型组小鼠脑组织EB渗漏量显著高于假手术组(P<0.01),丁苯酞组、片仔癀高剂量组EB渗漏量显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),片仔癀+LY294002组EB渗漏量显著高于片仔癀高剂量组(P<0.01),且与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠缺血侧大脑皮层p-Akt、p-GSK3β、ZO-1、Claudin-5蛋白表达水平及β-catenin核转位水平均较假手术组显著降低(P<0.01),丁苯酞组及片仔癀低、高剂量组小鼠上述指标均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01),其中片仔癀高剂量组对上述指标的改善更为明显,片仔癀+LY294002组上述指标与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),且均显著低于片仔癀高剂量组(P<0.05,P<0.01)。结论:片仔癀对MCAO/R小鼠的BBB完整性具有保护作用,其机制可能与激活Akt/GSK3β/β-catenin信号通路,上调ZO-1和Claudin-5的表达有关。

成纤维细胞生长因子9在抑郁症及其运动干预调节中的作用

成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)是成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)家族成员之一,属于一种自分泌或旁分泌生长因子。在脑组织中,FGF9主要表达于海马和皮质区,具有促进细胞增殖和维持细胞存活的功能。研究发现,FGF家族在抑郁症患者的多个脑区出现表达紊乱,FGF9在抑郁行为中扮演着负调控角色,但其介导抑郁行为的分子机制尚不清楚。本文综述了FGF9及其家族成员在抑郁中的作用;围绕其受体(FGFR)信号在中枢神经系统中的功能特点,深入分析FGF9调节抑郁行为中的作用机制;结合运动抗抑郁的神经营养假说,提出经由FGFR/GSK3β/β-catenin通路的FGF信号,可能介导抑郁症的运动干预机制的假设。这些将为FGF9介导抑郁行为和运动抗抑郁的有关研究提供理论的基础和探索的思路。

GSK3β在病理性瘢痕中的表达和意义

目的 研究Wnt/β-catenin 通路中糖原合成酶激酶3β（GSK 3β）在病理性瘢痕中的表达情况,以确定GSK3β在病理性瘢痕中的作用.方法 利用免疫组化技术检测GSK 3β在30例瘢痕疙瘩（A组）,30例增生性瘢痕（B组）及20例正常皮肤（C组）中的表达,并进行统计学分析.结果 GSK 3β在A、B组中的表达与C组比较,其差异有统计学意义（P ＜0.05）,但A、B组之间的差异无统计学意义（P ＞0.05）.结论 GSK 3β是病理性瘢痕形成的重要机制之一,Wnt/β-catenin通路的激活在病理性瘢痕形成中起到重要作用.

肺癌A549细胞中PCDH8表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨原钙黏蛋白8(PCDH8)表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移和AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法体外培养A549细胞,采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(PCDH8转染组)与pcDNA3.1空质粒(阴性对照组)转染A549细胞,另设不做任何处理的空白对照组,采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting验证转染效率。采用MTT法、克隆形成实验、Transwell法和划痕实验检测细胞增殖、集落形成、侵袭和迁移能力。Western blotting检测各组中AKT、p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、β-catenin、GSK3β、p-GSK-3β(Ser9)蛋白的表达。结果A549细胞中PCDH8表达水平为0.34±0.10,显著低于BEAS-2B细胞的0.98±0.08;PCDH8转染组PCDH8基因和蛋白相对表达量为2.26±0.31和1.06±0.17,明显高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。24、48、72、96 h PCDH8转染组细胞增殖率分别为(62.07±4.25)%、(106.90±5.14)%、(159.87±7.46)%、(213.79±8.28)%,明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCDH8转染组A549细胞集落形成数目为(255±38)个、24 h愈合率为(31.89±7.62)%、24 h侵袭细胞数为(217±39)个,均低于空白对照组的和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCDH8转染组p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、β-catenin、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组。PCDH8与AKT具有相同的细胞定位。结论PCDH8在肺癌中低表达,上调PCDH8表达可通过抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的激活进而降低肺癌细胞增殖、成瘤、迁移、侵袭能力。

香参壳方对人胃癌细胞上皮间质转化及转移的影响

目的考察香参壳方调节人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化(EMT)及转移的作用机制。方法体外培养SGC-7901细胞,随后加入不同浓度的香参壳方含药血清进行干预。划痕实验及Transwell小室法观察SGC-7901细胞的迁移与侵袭能力,MTT法考察SGC-7901细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、p-GSK3β/GSK3β、β-Catenin表达水平。结果香参壳方可有效抑制SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力,抑制其增殖,同时下调细胞中N-cadherin、Vimentin、p-GSK3β/GSK3β及β-Catenin的表达,上调E-cadherin的表达。结论香参壳方主要通过介导GSK3β/β-Catenin信号通路抑制胃癌细胞的EMT,降低弱细胞迁移与侵袭能力,从而发挥其胃癌术后的辅助治疗作用。

茶多酚对糖尿病心肌病大鼠心功能的保护作用及其机制

目的观察茶多酚(green tea polyphenol,GTP)保护糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)大鼠心功能的作用机制。方法建立链脲佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠并随机分为正常对照组(NG,n=15)、糖尿病组(DM,n=12)、GTP组(n=12)、GTP+氯喹(CQ)组(n=11)、CQ组(n=12)。NG组和DM组灌胃蒸馏水,GTP组灌胃GTP[400mg/(kgd)]溶液,CQ组灌胃CQ溶液(50mg/kg),GTP+CQ组灌胃等量的CQ和GTP溶液。Western blot检测左心室心肌组织中β-catenin/TCF4/GSK-3β和MTOR通路相关蛋白的表达。结果与NG组相比,DM组中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和BECN1表达显著降低(P<0.05),且SQSTM1水平显著增加(P<0.05)。与DM组相比,GTP组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和BECN1蛋白表达水平显著增加(P<0.05),同时SQSTM1蛋白水平显著降低(P<0.05)。与NG组相比,DM组β-catenin、TCF4和MYC的蛋白表达均显著提高(P<0.05),且p-GSK3β/GSK3β和p-MTOR/MTOR的比值显著提高(P<0.05)。与DM组相比,GTP组的β-catenin、TCF4和MYC蛋白表达水平及p-GSK3β/GSK3β和p-MTOR/MTOR的比值显著降低(P<0.05)。结论 GTP可以通过调节与自噬相关的β-catenin/TCF4/GSK-3β和MTOR通路参与对DCM大鼠的心功能保护作用。