马链球菌兽疫亚种表面蛋白FIPP的免疫效力评价

【目的】评价马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp. zooepidemicus,SEZ)表面蛋白FIPP(纤维蛋白原和Ig结合蛋白前体)的免疫效力,为预防SEZ感染提供新的候选疫苗抗原。【方法】根据NCBI数据库公布的FIPP基因序列设计引物进行PCR扩增,将扩增片段克隆到原核表达载体pColdⅠ,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,FIPP蛋白通过IPTG诱导在大肠杆菌中表达及纯化,以SDS-PAGE进行鉴定。纯化后的重组蛋白FIPP(rFIPP)对BALB/c小鼠进行免疫,二免14 d后对小鼠进行免疫保护试验并采集血清;解剖感染SEZ小鼠的肝脏、脾脏和肺脏进行病理组织学观察。以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠血清中的特异性抗体IgG水平,以蛋白质印迹(Western blotting)方法检测重组蛋白的反应原性,通过全血杀菌试验检测血清的杀菌活性。【结果】通过SDS-PAGE电泳可观察到约96 k D的蛋白片段,与FIPP蛋白的理论分子量相符。重组蛋白rFIPP免疫小鼠后对SEZ攻击的保护率达70.0%。ELISA方法检测结果表明,重组蛋白rFIPP免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体免疫球蛋白G(IgG),且极显著高于阴性对照(P<0.01,下同),通过IgG亚型分析,发现IgG1的抗体水平显著高于IgG2a(P<0.05),说明重组蛋白rFIPP免疫后产生的抗体亚型以IgG1为主。全血杀菌试验结果表明,重组蛋白rFIPP超免血清对SEZ具有极显著杀灭作用。组织病理学观察结果显示,重组蛋白rFIPP免疫后能有效减弱小鼠各类器官的病理损伤。【结论】经表达纯化的重组蛋白rFIPP在小鼠感染SEZ模型中具有良好的免疫保护效力,可用作制备SEZ亚单位疫苗的有效候选抗原。