荧光原位杂交（FISH）技术与免疫组织化学（IHC）技术应用于乳腺癌患者Her2基因检测的评价

目的探讨采用荧光原住杂交（FISH）技术检测乳腺癌患者中的Her2基因与免疫组织化学（IHC）检测Her2基因的结果的一致性以及导致两者差异的可能原因；了解荆州地区乳腺癌患者中Her2基因的分布。方法以FISH方法，对55例免疫组织化学分别为（3＋），（2＋），（1＋）和阴性（-）的乳腺癌新鲜石蜡切片标本进行Her2基因的检测。结果55例标本中，有16例采用FISH方法检测出Her2基因的表达；12例Her2基因表达（3＋）的标本中11例检测出Her2基因；7例Her2基因表达（2＋）的标本中5例检测出Her2基因；10例Her2基因表达（1＋）的标本中未检测出Her2基因；26例Her2基因表达（-）的标本中未栓测出Her2基因。结论初步筛查Her2基因状态可以首选免疫组织化学方法，对于IHC（2＋）的标本，应该行FISH确诊。

早熟凝缩染色体(PCC)与荧光原位杂交(FISH)技术的结合

为便于对间期细胞染色体结构异常的识别,作者开展了对早熟凝缩染色体技术(PCC)与荧光原位杂交技术(FISH)二者相互结合起来的研究。作为模型,人外周血细胞在与诱导细胞——分裂期中国仓鼠孵巢细胞(CHO)融合后,形成了早熟凝缩的染色体。当使用人类全基因组DNA为探针做原位杂交时,仅见由人外周血细胞形成的PCC上被染上阳性荧光信号,CHO细胞染色体阴性。在使用人Y染色体特异性DNA探针作原位杂交时,结果不仅在男性外周上细胞核上,而且在一条由胞核演变的早熟凝缩染色体上,获得了特异性阳性荧光杂交信号。这一方法拓展了间期细胞遗传学的研究深度。

45S rDNA在不同倍性沙田柚染色体上的荧光原位杂交分析

应用荧光原位杂交技术进行45S rDNA在不同倍性沙田柚中期染色体上的定位研究。结果表明:不同材料的NOR位点表现出明显的多态性和杂合性,即二倍体具4个45S rDNA位点,四倍体单株t1和t2则分别具有10个和8个位点。位点在染色体上的位置包括短臂末端、着丝粒区域、着丝粒至短臂区域、着丝粒至长臂区域、长臂末端共5种不同类型。不同材料中包含的位置类型不完全相同。不同位置类型的位点数也不相同,以着丝粒及着丝粒至短臂区域的类型位点数最多,其次是短臂末端。同源四倍体和相应的二倍体相比,出现了DNA水平的变异。对用于荧光原位杂交的柑橘染色体制片方法和rDNA在染色体上的分布位置、同源四倍体和相应二倍体的遗传差异分析、重复序列的染色体原位杂交用于染色体识别和物种演化研究等进行了讨论。

荧光原位杂交技术解析发酵产氢细菌群落结构

应用荧光原位杂交(FISH)技术,研究了连续流搅拌槽式(CSTR)发酵制氢反应器中2种产氢发酵类型的菌群组成和发酵类型转化过程中的菌群种类和数量变化及其对产氢速率、生物量和发酵产物的影响.结果表明,梭菌属和肠杆菌科在决定产氢发酵类型方面有重要作用.以梭菌为优势种群的乙醇型发酵比以肠杆菌为优势种群的丁酸型发酵具有更佳的产氢能力.实验结果能够与生物发酵系统常规监测指标形成很好的印证.

乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用

目的研究荧光原位杂交(FISH)用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性。方法应用FISH技术和免疫组化(IHC)技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析。结果IHC检测CerbB-2(3+)/(2+)/(1+或0),其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%。24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例(P=0.0399)。ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例(P>0.05)。结论IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用。HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关。

免疫组织化学法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2状态一致性的对比研究

目的对比研究免疫组织化学法(IHC)与荧光原位杂交技术(FISH)检测乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)蛋白表达和基因状态的一致性,并评价其临床意义。方法采用IHC法及FISH法分别检测1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本的HER-2蛋白表达和HER-2基因状态,并进行对比分析。结果 1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本,用IHC检测HER-2蛋白表达阳性者373例,占36.1%(373/1 032);表达阴性者659例,占63.9%(659/1 032)。FISH检测HER-2基因扩增325例,占31.5%(325/1 032);基因非扩增707例,占68.5%(707/1 032)。373例HER-2蛋白为阳性的患者中,HER-2基因扩增293例,符合率为78.6%(293/373);659例HER-2蛋白为阴性的患者中,HER-2基因非扩增627例,符合率为95.1%(627/659)。2种方法检测结果比较一致性较好(Kappa=0.758 1,P<0.000 1)。结论 IHC检测乳腺癌HER-2蛋白与FISH检测HER-2基因结果一致性较高。

多色荧光原位杂交用于胎儿常见非整倍体的快速产前诊断

目的 探讨多色荧光原位杂交（multi-color fluorescence in situ hybridization,m-FISH） 技术用于快速诊断胎儿非整倍染色体的临床价值.方法 纳入符合产前遗传学诊断指征的孕妇126例,行羊膜腔穿刺获取羊水细胞,采用荧光标记的DNA探针对羊水细胞间期核DNA进行杂交,荧光显微镜观察、计数杂交信号类型,同时对每例标本行羊水细胞培养及染色体核型分析.结果 在126例羊水细胞样本中,FISH检出21-三体综合征胎儿4例、18-三体综合征1例、Turner综合征1例、46,XX核型67例、46,XY核型53例.FISH检测结果与羊水细胞核型分析的符合率为100%.结论 FISH结果判读直观,信号明晰,是快速、准确检测染色体数目异常的重要手段.

天然四倍体柑橘与二倍体5SrDNA荧光原位杂交分析

为探讨柑橘天然四倍体来源,以5SrDNA作为探针,运用荧光原位杂交技术比较柑橘属3个生物型的天然四倍体及其相应的二倍体的5SrDNA位点.结果表明,红江橙二倍体和化州橙二倍体的5SrDNA位点为2个,其天然四倍体均有4个位点;资阳香橙二倍体有1个5SrDNA位点,其天然四倍体有2个位点.供试天然四倍体柑橘的5SrDNA位点数目为二倍体的加倍,而在染色体上的位置与相应二倍体处于相同序号染色体的相同位置,只是信号亮度存在差异.5SrDNA位点数目和倍性有密切联系,随着倍性的增加有成倍增加的趋势,推测这些天然四倍体基因组的形成极有可能由二倍体直接加倍而来.

荧光原位杂交技术检测肺癌ROS1易位病例临床病理特点

目的总结ROS1(c-ros oncogene1)易位病例分子病理特点及治疗情况;探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在肺癌ROS1基因检测中的价值。方法采用荧光原位杂交方法检测613例肺癌患者ROS1基因。ROS1易位样本行手工ROS1免疫组化(IHC)、ALK Ventana全自动免疫组化及EGFR突变检测。结果采用ROS1 FISH法检出19例阳性病例,检出率为3.1%(19/613)。阳性细胞平均比例为60%,范围35%~78%。阳性病例显示两种信号模式,其中63.2%(12/19)为经典红绿分离,36.8%(7/19)为单独绿色。19例阳性病例ROS1蛋白表达为:1例(5%)0+,2例(11%)1+,7例(37%)2+,9例(47%)3+。阳性病例均无ALK基因易位,除1例同时具EGFR 19外显子突变外,其余病例均为EGFR野生型。ROS1易位患者年龄略小;女性、非吸烟患者比例较高;大多为晚期病人。组织学类型以实体、腺泡及乳头型腺癌为主。易位病例中,3例患者死亡,7例患者接受克唑替尼治疗。结论 ROS1易位更易发生在年轻、女性、不吸烟的腺癌患者中。FISH方法可有效地检测肺癌ROS1基因易位,对确诊ROS1阳性肺癌具有重要意义。

荧光原位杂交技术在膀胱癌诊断中的临床研究

目的:评价尿脱落细胞荧光原位杂交(FISH)检测在膀胱癌的诊断价值。方法:采用FISH检测68例血尿患者尿脱落细胞3、7、17号染色体和9号染色体上p16基因位点数目异常情况,以组织病理确诊为膀胱癌为金标准,评估FISH诊断的特异度和敏感度,并与尿细胞学检查结果做比较。结果:FISH诊断膀胱癌的总的敏感性高于尿脱落细胞学检查(分别为79.8%、24.4%,P<0.05),两者的特异性分别为93.4%、100%(P>0.05)。结论:FISH在诊断膀胱癌中敏感性、特异性高于尿细胞学检查,在早期膀胱癌诊断和膀胱癌术后复发的监测具有重要意义。

荧光原位杂交技术在胚胎植入前遗传学诊断中的应用

胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是在胚胎着床前即对其遗传物质进行分析,检查胚胎是否有遗传物质异常的诊断方法,需要结合显微操作技术、胚胎学、遗传学和分子生物学技术,其分子生物学检测方法主要为荧光原位杂交技术(fluorescent in sutu hybridization,FISH)和聚合酶链反应技术(polymerase chainreaction,PCR).其中,FISH技术由于其在诊断染色体数目、结构异常和性别鉴定方面的优势,在PGD中广泛应用.

基因组原位杂交技术在植物研究中的应用

基因组原位杂交是以亲本之一的总基因组DNA做探针,另一亲本的基因组DNA做封阻,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。在其发展的十几年里,已在植物的基因组研究中发挥了重要的作用。应用这一技术可对多倍体中基因组之间的亲缘关系、基因组组成及起源进行研究;对杂交种中染色体组的组成进行分析;对代换系、附加系和易位系进行有效的鉴定,并对其中的外源染色体或染色体片段的来源、大小、数目及发生位点进行检测和定位。此外,利用基因组原位杂交技术还有助于确定物种间的同源性;研究杂交种中来源不同的染色质在核中的分布;探索B染色体的起源、染色体间的配对、重组、交换等现象。随着基因组荧光原位杂交技术体系的不断发展、完善和改进,其应用范围不断拓展,在植物基因组研究领域中发挥了越来越重要的作用。

荧光原位杂交和免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌中HER-2基因状态的研究

目的比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学(IHC)两种方法检测乳腺浸润性导管癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增及与C-erb B-2蛋白表达结果的一致性。方法分别采用FISH和IHC法检测346例乳腺浸润性导管癌组织HER-2基因扩增和C-erb B-2蛋白表达,并对两种方法的结果进行统计学分析。结果 346例乳腺浸润性导管癌中,FISH检测HER-2基因扩增145例(41.9%),无扩增201例(58.1%)。IHC检测显示,C-erb B-2蛋白(-)7例,(+)30例,(++)227例,(+++)82例。按乳腺癌HER-2检测指南,(-)和(+)为阴性结果,(+++)为阳性结果,(++)为不确定病例。全组IHC检测C-erb B-2蛋白阳性表达率为23.7%(82/346)。IHC检测C-erb B-2蛋白(-)的7例患者经FISH检测无HER-2基因扩增,一致率为100.0%。IHC检测C-erb B-2蛋白(+)的30例经FISH检测25例无基因扩增,一致率为83.3%;227例(++)中有65例基因扩增,一致率为28.6%;82例(+++)中有基因扩增75例,一致率为91.5%。IHC和FISH检测HER-2状态的一致率为89.9%,具有高度一致性(Kappa值=0.768,P<0.001)。HER-2基因扩增与年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论 IHC和FISH法检测乳腺浸润性导管癌HER-2表达状态有高度一致性。IHC可以作为初步筛查乳腺浸润性导管癌HER-2基因状态的首选检测方法,对于IHC检测结果为(++)的标本建议采用FISH法进一步明确HER-2基因扩增状态。

鼠李糖乳杆菌Probio-M9的特异性荧光原位杂交探针设计及应用

宿主口服益生菌的定性和局部检测具有重要意义。本研究通过设计株水平特异性荧光原位杂交(FISH)探针来研究鼠李糖乳杆菌在宿主肠道中的定殖。根据鼠李糖乳杆菌Probio-M9和其它相关物种的基因组序列,分别设计了鼠李糖乳杆菌种水平特异性探针(Probe-16S)和鼠李糖杆菌Probio-M9菌株水平特异性探针(Probe-SP)。在使用15株鼠李糖乳杆菌菌株和15株其它益生菌验证这些特异性探针后,通过荧光原位杂交(FISH)验证鼠李糖乳杆菌Probio-M9菌株的特异性探针在体外和体内的适用性。结合荧光D-氨基酸(FDAA)探针,在大鼠的肠道中检测到鼠李糖乳杆菌Probio-M9的活细胞。本研究设计的FISH探针可从肠道菌群中特异性鉴定鼠李糖乳杆菌Probio-M9,该方法可与FDAA探针结合使用,以进一步探索该益生菌菌株在宿主肠道中的定位。

固体样品的荧光原位杂交方法

荧光原位杂交是一种新兴的分子细胞遗传学技术,广泛应用于各个学科,该文主要介绍了一种在环境微生物研究中可以广泛应用的对固体样品进行荧光原位杂交(FISH)的实验方法。

马铃薯转三价病毒YRX外壳蛋白基因片段株系的核型及荧光原位杂交分析

为了解外源三价外壳蛋白基因保守片段重组序列YRX(马铃薯X病毒、Y病毒和卷叶病毒)在转基因马铃薯染色体中的位置,分析其遗传稳定性,采用核型分析与荧光原位杂交技术对转基因马铃薯夏波蒂株系pHeYCPC326-XC-Sh进行染色体分析。结果表明:夏波蒂的染色体数目为48条,臂比范围为(1.37±0.23)^(2.28±0.14),核不对称属2B型,核型公式为2n=4x=7m+5sm,其中C组与J组含随体。发现外源基因YRX在染色体A、B、E、G、I组均存在,大多位于染色体短臂端部。

荧光原位杂交法检测乳腺癌HER-2表达与腋淋巴结转移相关性的研究

目的:探讨用荧光原位杂交法(FISH)检测乳腺癌HER-2基因的表达与腋淋巴结转移的相关性。方法:采用免疫组化方法检测乳腺癌组织中HER-2的表达,再用FISH进一步检测阳性病例中HER-2基因的扩增情况,比较两者结果的差异,并且分析HER-2的表达与腋淋巴结转移的相关性。结果:免疫组化(IHC)法检测HER-2阳性42例,FISH检测阳性9例,FISH法检测HER-2基因与HER-2蛋白过表达之间相关(P<0.05),并且IHC和FISH两种方法检测HER-2表达均与腋淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论:FISH可稳定检测HER-2基因的扩增,其表达与腋淋巴结转移相关。

基于荧光原位杂交技术的全自动病理染色系统结构设计

荧光原位杂交(FISH)技术是检测恶性肿瘤细胞核酸序列的常用方法,在癌症的诊疗领域有广泛应用。为实现FISH实验的全自动化,设计了一种全自动病理染色系统。该系统设置有多轴操纵臂、试剂加样器、载玻片、盖玻片夹具、辅助模块等。多轴操纵臂定位误差不大于±0.1 mm,提取及丢弃移液枪头准确率大于99.5%,抽取盖玻片成功率大于99%,微量试剂加样误差不大于0.6μL,大量试剂加样误差不大于0.5 mL,载玻片夹具控温误差不大于±1℃且无试剂泄漏。生物实验结果表明,该系统荧光染色效果良好,信号点清晰可见,荧光图像可判读率超过90%,具有较好的人工替代性。

基于FISH和GISH技术的芝麻栽培种和野生种染色体组特征比较分析

为揭示胡麻属物种进化特征,探究胡麻属基因组结构演变及物种进化,促进野生资源的开发利用,以芝麻栽培种豫芝11号和2n=26类型野生种S.alatum 3651为试验材料,采用荧光原位杂交(FISH)和基因组荧光原位杂交(GISH)技术对芝麻栽培种和野生种染色体组特征进行分析。结果表明,芝麻栽培种和野生种均为2n=2x=26类型;rDNA-FISH杂交结果显示,栽培种的13对染色体中,3对染色体(第7、8、9对染色体)的短臂端部携带45S rDNA特异信号,显示为随体特异染色体;2对染色体(第5、11对染色体)的短臂携带5S rDNA特异信号,5S rDNA与45S rDNA信号位于不同染色体上。野生种的13对染色体中,有2对染色体(第4、7对染色体)携带45S rDNA杂交信号,1对染色体(第4对染色体)携带5S rDNA特异信号,5S rDNA与45S rDNA信号位于同一染色体不同位置,表明栽培种与野生种的染色体组特征差异较大。GISH杂交结果显示,分别以栽培种和野生种的基因组DNA作探针与自身染色体杂交,每条染色体上携带不同强弱的杂交信号,而与对方染色体杂交,均表现出极少的杂交信号。芝麻栽培种和野生种具有相同的染色体数目,但染色体rDNA数量、分布及其GISH信号均存在明显差异,说明栽培种和野生种亲缘关系较远。

利用FISH和DGGE对产甲烷颗粒污泥中微生物种群的研究

利用FISH和DGGE技术对厌氧反应器内处于不同运行阶段的4个产甲烷颗粒污泥进行研究,考察其中真细菌和古细菌的种群结构,并对其中的优势古细菌进行系统发育分析.FISH结果表明,颗粒污泥中真细菌含量明显高于古细菌,真细菌主要分布在颗粒污泥外层,古细菌则主要分布在内层;DGGE结果表明,随着反应器COD负荷的增加以及运行时间的延长,真细菌种群结构相对较稳定,而古细菌种群结构则发生了较明显变化,其中占优势的古细菌种类逐渐减少;将有代表性的7个古细菌条带切胶回收并测序,结果显示,反应器运行后期占优势的菌种主要包括甲烷微粒菌(Methanocorpusculum)、甲烷杆菌(Methanobacterium)和甲烷髦毛菌(Methanosaeta)等.