APP、Fis1、KLRF1和PDCD7基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)、裂殖1同源物(Fis1)、杀伤细胞凝集素样受体亚家族F成员1(KLRF1)和细胞程序性死亡7(PDCD7) mRNA在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其预后意义。方法抽取34例AML及10例非恶性血液病患者骨髓,提取总RNA并逆转录成cDNA,SYBR Green I实时定量PCR法检测各基因 mRNA表达水平,采用2-△Ct公式计算基因 mRNA相对表达量。结果AML患者组PDCD7 mRNA表达水平均显著高于对照组(Z=-2.213,P=0.027)。除M1(1例)、M2a(2例)外的AML各亚型基因表达同对照组比较,APP mRNA在伴有t(8,21)染色体异常的M2表达显著高于对照组(Z=-2.197,P=0.028),而在M4b和M5b中的表达则显著低于对照组(Z=-2.368,P=0.018)。APP mRNA在AML亚型间表达有差异,M2显著高于M4和M5(Z=-2.430,P=0.015;Z=-3.175,P=0.001)。结论AML患者高表达PDCD7基因,单核细胞白血病患者低表达APP基因。

FIS1对急性髓细胞白血病患者预后的意义

目的:探讨FIS1基因在正常核型急性髓系白血病(AML)中的表达及临床意义。方法:用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术测定47例初诊的原发、正常核型AML患者骨髓单个核细胞中FIS1 mRNA表达,western blot检测5例难治性与6例非难治性AML患者FIS1蛋白表达,分析其与临床特征及治疗反应之间的关系。结果:FIS1 mRNA表达水平在首疗程NR的AML患者中显著高于首疗程CR的患者(P=0.002);难治性AML患者FIS1 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于非难治性患者(P=0.028,P=0.000)。高表达FIS1的AML患者3年、5年死亡率均显著升高(P=0.000,P=0.000),OS和RFS均显著缩短(P=0.018,P=0.045);Cox回归分析提示FIS1高表达是AML患者预后危险因素(HR=6.767,P=0.009)。结论:FIS1基因高表达与难治性AML及AML患者预后不良有关。

细粒棘球绦虫抗原Fis1T细胞表位肽缓解过敏性哮喘小鼠气道炎症的免疫学作用研究

目的探讨细粒棘球绦虫Fis1蛋白的T细胞表位肽(Eg.Fis183-102)对过敏性哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及免疫学作用机制。方法1)体内试验:将24只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为3组(每组8只),其中B组为对照组,C组为过敏性哮喘组(OVA),T组为干预组(OVA+Eg.Fis183-102)。采用ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE水平;采用HE,PAS,MASSON组织染色检查小鼠肺组织病理变化;采用流式细胞术分析肺脏和脾脏组织中嗜酸性粒细胞比例、Th1和Th2的分群及比例。2)体外试验:采用裂红法分离小鼠脾脏单个核细胞,每孔以1×106个细胞铺板,分为3组(每组3个复孔),其中B组为对照组,C组为刀豆蛋白刺激组(ConA),T组为干预组(ConA+Eg.Fis183-102),培养3 d后收集上清,采用ELISA法检测IFN-γ和IL-4水平。结果1)体内试验:与C组相比,T组小鼠肺组织的炎细胞浸润、胶原沉积等病理损伤有所改善,血清OVA特异性IgE水平、肺组织嗜酸性粒细胞比例、肺脏和脾脏Th2细胞比例均显著下降(均P<0.05),肺和脾Th1细胞比例显著上升(均P<0.05)。2)体外试验:与B组相比,C组小鼠脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平均显著上升(均P<0.05);与C组相比,T组脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ水平显著上升,IL-4水平显著下降(均P<0.01),与体内试验结果一致。结论Eg.Fis183-102可缓解过敏性哮喘小鼠肺组织炎症损伤,降低IgE的分泌,并可能通过纠正Th1/Th2免疫应答失衡抑制OVA诱导的过敏性哮喘小鼠的气道炎症。

CORM-2通过p38MAPK信号通路对脂多糖刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fis1的影响

目的探讨CORM-2通过p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对脂多糖（LPS）刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fisl的影响。方法将传代培养的大鼠肺泡巨噬细胞以2×105／mL密度接种于96孔板。培养24h后，采用随机数字表法将其分为4组：正常对照组（C组）、LPS组（L组）、CO释放剂CORM-2＋LPS组（LC组）、p38MAPK抑制剂SB203580＋CORM-2＋LPS组（LCS组）。细胞孵育24h时，应用试剂盒测定线粒体MDA含量及SOD活力，应用Westernblot测定HO-1、线粒体相关分裂蛋白Fisl和p38的表达。应用RT—PCR测定HO-1和FislmRNA含量的表达。结果与c组比较，L组MDA[2．43±0．12 vs．3．59±0．07]含量、HO-1[1．31±0．27 vs．1．65±0．41]、Fisl[1．27±0．23 vs．1．65±0．41]、p38[1．01±0．24 vs．1．36±0．17]表达水平升高，SOD[81．7±1．62 vs．54．7±1．62]活力降低（P〈0、05）；与L组比较，Lc组MDA[3．59±0．07 vs．3．08±0．52]含量、Fisl[2．01±0．35 vs．1．48±0．39]表达水平降低，SOD[54．7±1．62VS．67．4±1．32]活力、HO-1[1．65±0．41 vs．2．25±0．18]、p38[1．36±0．17 vs．1．78±0．23]表达水平升高（P〈0、05）；与LC组比较，LCS组MDA[3．08±0．52vs．4．16±0．19]含量、Fisl[1．48±0．39vs．1．96±0．31]表达水平升高，SOD[67．4±1．32vs．45．9±1．52]活力、HO-1[2．25±0．18 vs．1．78±0．19]、p38[1．78±0．23VS．1．12±0．29]表达水平降低（P〈0、05）。结论HO-1／CO抑制LPS刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fisl表达机制与p38MAPK信号通路有关。

钙对母鼠氟染毒后子代大鼠肾脏细胞线粒体损伤的影响

[目的]研究饲料钙对母鼠饮水型氟染毒后子代大鼠肾细胞线粒体损伤的影响。[方法]选用健康初断乳SD雌性大鼠100只,随机分为对照组、染氟组(100 mg/L Na F)、低钙组(0.063%CaCO_3)、低钙染氟组(100 mg/L Na F+0.063%CaCO_3)和高钙染氟组(100 mg/L Na F+7%CaCO_3);饲养3个月后,雌雄鼠合笼交配。取日龄14 d及28 d仔鼠雌雄各10只,以其肾脏细胞线粒体标志酶琥珀酸脱氢酶(SDHase)活性及脂质过氧化指标丙二醛(MDA)水平,肾脏细胞凋亡状况,线粒体分裂/融合蛋白Fis1、Drp1和Mfn2表达水平为观察指标。[结果]与染氟组相比,高钙染氟组SDHase活性升高(P<0.05),低钙染氟组SDHase活性降低(P<0.05)。与对照组相比,雌鼠各组肾脏线粒体MDA含量均升高(P<0.05)。与对照组相比,染氟各组仔鼠凋亡细胞增多;与染氟组相比,低钙染氟组凋亡细胞增多,而高钙染氟组凋亡细胞减少。与对照组相比,低钙染氟组14 d雄鼠的分裂蛋白Fis1表达升高(P<0.05);低钙染氟组和高钙染氟组28 d雄鼠的分裂蛋白Drp1升高(P<0.05)。[结论]氟中毒能够造成大鼠肾脏细胞线粒体内分裂/融合蛋白Fis1、Drp1和Mfn2表达异常,引起肾脏细胞线粒体损伤。高钙饲料摄入能降低线粒体内脂质过氧化反应,减轻高氟对子代肾脏细胞的毒性作用,而低钙饲料摄入会加剧高氟的毒性作用。