FK506结合蛋白样蛋白在疾病中的作用的研究进展

FK506结合蛋白样蛋白(FK506-binding protein like,FKBPL)是亲免素家族的一员,其功能十分广泛,可以调控类固醇受体的信号转导,抑制肿瘤干细胞及肿瘤细胞的生长,并且能够作为肿瘤预后的生物学标志物。最新研究发现,它的N端区域存在抗血管生成结构域,可在体内和体外发挥抗血管生成作用。此外,FKBPL还与炎症、眼部疾病、心理疾病等诸多问题相关。文章主要从FKBPL的结构和功能出发,对FKBPL的功能研究进展进行综述,并探讨其在临床应用中的前景。

以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用

目的发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型。方法通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化。基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系。对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选。结果成功构建重组表达菌株BL21(rosetta)/pET-30a/FKBP52。纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90%,并具有很好的PPIase活性。阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC50为12.035ng/m L。筛选得到121个抑制率大于80%的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素。对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1。结论本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选。

棉铃虫(Helicoverpa armigera)FK506结合蛋白基因的克隆、表达与纯化

为了深入了解FK506结合蛋白基因的作用和探索调控棉铃虫CYP6B6的表达机制,基于单酵母杂杂交结果采用RT-PCR的方法从棉铃虫的中肠cDNA中扩增得到了FK506结合蛋白基因,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21中用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达,通过镍柱离子亲和层析纯化目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blotting进行验证。结果表明,克隆得到的目的基因大小为327 bp,编码108个氨基酸残基,预测蛋白质分子量和等电点分别是11.78 kD和7.87。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框,且没有信号肽。重组质粒pET32a-FKBP在大肠杆菌BL21中获得表达,主要以可溶性形式存在,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,Western blotting检测发现纯化的目的蛋白大小正确且纯度高。

核酸免疫制备鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白的多克隆抗体

利用电注射基因导入法制备小鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白(FKBP12)的多克隆抗体,并通过Western blot验证抗体与抗原的特异性结合。构建重组质粒pc DNA3-FKBP12并测序验证序列的正确性,利用基因导入法将重组质粒pc DNA3-FKBP12注射到小鼠体内,免疫4次后用ELISA检测法确定抗体的效价,并对抗体的特异性结合进行Western blot以及免疫组化检测。结果表明,小鼠抗FK506结合蛋白血清的效价达到1∶25 600,Western blot结果显示此抗血清能与融合蛋白His-FKBP12结合,免疫组化结果表明在棉铃虫3龄幼虫不同组织中FKBP12均有表达。说明电注射基因导入法制备的小鼠抗FK506结合蛋白的抗体在滴度和特异性结合方面都达到预期要求。

FK506结合蛋白52的结构、生物学功能及其与女性生殖系统疾病关系的研究进展

FKBP52属于FK506结合蛋白(FKBPS)家族,该家族具有保守的肽基脯氨酰基顺反异构酶PPIase)域为特征。在FKBP52三个主要结构区中FK1区的FK506结合位点具有可调控靶蛋白的PPIse活性,而TRP区可为Hsp90提供结合位点,FK2区未发现功能。单个的FKBP52分子只能稳定的结合单个的甾体激素受体。FKBP52与甾体激素受体伴侣复合物联合,特别增强了雄性激素受体(AR)、孕激素受体(PR)和糖皮质激素受体(GR)的活性,是一种已知的AR、GR和PR活性调节剂。由于FKBP52对于甾体激素受体信号通路的调节作用,其与妊娠相关性疾病、子宫内膜异位症、乳腺癌的发生发展有关。

FK-506结合蛋白对钙释放通道的调控

细胞内自由钙作为一种重要的细胞信使广泛地参与细胞生理功能调控 .胞内钙库 (内质网系和肌浆网系 )对调节细胞内自由钙水平起着重要的作用 .钙库膜上的钙释放通道 (ryanodine受体和三磷酸肌醇受体 )受许多因素调控 ,其中之一就是新近研究得相当多的FK50 6结合蛋白 .免疫抑制剂FK50 6能特异地结合钙库上一种分子质量为 1 2ku左右的蛋白 ,这种FK50 6结合蛋白与钙释放通道形成一种紧密连接的复合体 ,在正常生理情况下对钙释放通道起着十分重要的调控作用 .

中国黑龙江地区汉族人群FK506结合蛋白5基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的:探讨中国黑龙江地区汉族人群FK506结合蛋白5(FKBP5)基因多态性与精神分裂症的关系。方法:采用SNaPshot测序法检测和分析49例汉族精神分裂症患者(患者组)和49名汉族健康对照者(对照组)的FKBP5基因rs3800373、rs1360780、rs9296158和rs9470080位点基因型和等位基因频率。结果:FKBP5 rs3800373位点基因型频率两组间差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,FKBP5基因rs3800373位点TT基因型携带者精神分裂症发生风险明显高于GT基因型携带者(95%CI:0.117~0.756,P=0.01)。结论:FKBP5基因rs3800373位点基因多态性可能与中国黑龙江地区汉族人群精神分裂症发病风险有关。

心脏移植后外周血FK506结合蛋白1A基因的表达

利用荧光差异显示PCR(DD PCR)技术检测心脏移植后外周血白细胞基因的表达。结果显示 :RPL2 3基因移植后有波动 ,排斥发生时表达增强 ;FK5 0 6结合蛋白 1A基因移植后表达较弱 ,排斥发生时明显增强。提示 :外周血DD PCR检测白细胞基因的表达可能对研究排斥反应机制及进行移植排斥反应诊断具有一定的意义。

FK506结合蛋白51(FKBP51)的研究进展

FK506结合蛋白51(FKBP51)是一种具有多种结构域,多种生物学功能的免疫大分子,在机体免疫、类固醇激素的调节、癌症的发生和治疗以及抑郁症中发挥着重要作用,同时在畜禽研究中发现该基因是免疫性状的重要候选基因。文章对FKBP51基因的结构、分布及功能等方面进行了综述。

FK506结合蛋白FKBP52对金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗的影响

为了明确东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis免疫相关FK506结合蛋白(FK506 binding protein,FKBP)的功能,本研究采用荧光定量PCR分析了FKBP52基因在成虫不同组织以及不同龄期中肠中的表达量;克隆并表达了FKBP52基因,纯化获得目的蛋白;测定了FKBP52蛋白对金龟子绿僵菌IMI330189侵染东亚飞蝗及东亚飞蝗体内保护酶酶活性的影响。研究结果发现FKBP52基因在成虫不同组织中均有表达,中肠中相对表达量最高;在不同龄期的中肠中,以卵期和成虫期的相对表达量较高。FKBP52基因全长1242 bp,编码蛋白分子量为46 kDa。生测及酶活力测定结果表明,金龟子绿僵菌IMI330189与FKBP52混合处理时,东亚飞蝗第10天累计死亡率显著提高到93.33%,东亚飞蝗体内的保护酶活力均显著降低。上述结果表明,FKBP52基因能够通过抑制东亚飞蝗体内保护酶活性,促进金龟子绿僵菌IMI330189的侵染。

FK506结合蛋白52在先兆流产患者外周血中的水平及对Th1/Th2影响的研究

目的:探讨FK506结合蛋白52(FKBP52)在先兆流产患者外周血清中的表达及对Th1/Th2的影响。方法:将60例先兆流产患者随机数字表法随机分为Ⅰ组和Ⅱ组各30例。Ⅰ组每天交替肌内注射绒毛膜促性腺激素2000 U与黄体酮20 mg,持续10 d;Ⅱ组肌内注射黄体酮20 mg,1次/d,持续2周。选择60例正常健康早孕妇女作为对照组,检测外周血FKBP52、IFN-γ和IL-4水平,并进行相关性分析。结果:Ⅰ、Ⅱ组FKBP52、IL-4水平低于对照组,Ⅰ、Ⅱ组IFN-γ水平高于对照组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ组FKBP52、IFN-γ和IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ、Ⅱ组治疗后FKBP52、IL-4水平均较治疗前升高,且I组升高幅度大于Ⅱ组,比较差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ组治疗后IFN-γ水平均较治疗前降低,且Ⅰ组降低幅度大于Ⅱ组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前:FKBP52和IFN-γ水平呈负相关(r=-0.516,P=0.000),FKBP52和IL-4水平呈正相关(r=0.602,P=0.000)。治疗后:FKBP52和IFN-γ水平呈负相关(r=-0.564,P=0.000),FKBP52和IL-4水平呈正相关(r=0.618,P=0.000)。结论:先兆流产患者外周血中FKBP52的表达下调,FKBP52的表达下调可促进Th1/Th2平衡向Th1转移;黄体酮联合绒毛膜促性腺激素治疗可以提高先兆流产患者外周血中FKBP52的水平,并促进Th1/Th2平衡向Th2转移。

FK506结合蛋白在肿瘤中的研究进展

目的随着肿瘤基础研究不断深入以及与之相关的基因检测技术的持续改进、提高,针对恶性肿瘤的分子靶向治疗得到广泛关注,并获得了一些满意的临床效果。近年来,越来越多的证据表明,FK-506结合蛋白(FK-506 binding protein,FKBP)在肿瘤的诊断、发生、预后及治疗监测中发挥重要作用,有可能成为肿瘤个体化靶向治疗的新靶点。本文就国内外有关FKBP家族蛋白核心成员的分子结构、基因表达水平和在肿瘤发生及发展中的功能作用、临床意义及相关分子机制研究进行回顾,以期对该蛋白家族有更全面、深入的了解,为肿瘤的治疗提供理论依据。

FK506结合蛋白51在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的 探讨FK506结合蛋白51（FKBP51）在脑胶质细胞瘤组织中的表达及其临床意义。方法 选取本院2013年1月～2015年1月的223例脑胶质瘤患者作为研究对象,选取同期来自于颅脑损伤手术患者的23例正常脑组织进行对照研究。采用免疫组织化学法检测FKBP51的表达水平,分析其表达水平与脑胶质瘤病理组织类型和病理分级的关系。结果 脑胶质瘤的FKBP51阳性率显著高于正常脑组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同病理类型脑胶质瘤组织的FKBP51阳性率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。恶性的胶质母细胞瘤FKBP51的表达水平显著高于良性的星形细胞瘤,差异有统计学意义（P〈0.05）。FKBP51的表达水平与脑胶质瘤分级呈正相关（r=0.30,P〈0.05）。结论 FKBP51表达与脑胶质瘤的病理类型和临床病理分级具有相关性,有可能作为脑胶质瘤标志物用于临床病理特征分析和预后判断。

微小RNA-490-3p靶向FK506相关蛋白14表达抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法2019年9月至2020年4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-490-3p组(转染miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染miR-490-3p mimics与空载体)和miR-490-3p+FKBP14组(共转染miR-490-3p mimics与FKBP14过表达载体),采用RT-PCR检测miR-490-3p表达,Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、上皮间质转化因子Twist转录因子(Twist)和FK506相关蛋白14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-490-3p和FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较,miR-490-3p组细胞中miR-490-3p表达水平明显升高(3.68±0.37比1.02±0.10,P<0.05),而侵袭细胞数(33.25±2.02比76.52±6.00,P<0.05)、迁移细胞数(45.56±3.38比97.85±6.45,P<0.05)及MMP-2、Twist和FKBP14蛋白的表达水平明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高;而miR-NC组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实FKBP14是miR-490-3p的潜在靶基因。与miR-490-3p+pcDNA组比较,miR-490-3p+FKBP14组MG63细胞侵袭数、迁移数及MMP-2、Twist、FKBP14蛋白的表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白的表达水平明显降低(均P<0.05)。结论miR-490-3p可通过靶向抑制FKBP14表达降低骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移能力,可作为骨肉瘤治疗的分子靶点。

FK506结合蛋白65在肝细胞肝癌组织间质细胞中的表达及临床意义

目的:探讨FK506结合蛋白65(FKBP65)在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达及其与肝癌临床病理特征和预后的关系。方法:应用免疫组化方法检测147例肝癌标本中FKBP65表达情况,分析FKBP65的表达水平与患者临床病理指标的相关性。采用Kaplan-Meier法对肝癌患者术后生存及无复发生存进行单因素分析;采用Cox回归风险比例模型对肝癌患者术后总生存及无复发生存进行多因素分析。结果:FKBP65在肝癌组织肿瘤细胞和间质细胞中均有表达。肝癌组织间质细胞中FKBP65的表达与肿瘤直径正相关(P=0.001)。单因素分析表明,肝癌组织间质细胞中FKBP65高表达组患者总生存率及无复发生存率明显低于低表达组(P=0.002,P=0.011)。多因素分析表明,FKBP65在肝癌组织间质细胞中高表达是肝癌患者术后总生存(HR=2.676,95%CI 1.463～4.859)和无复发生存(HR=1.731,95%CI 1.032～2.905)的独立危险因素。结论:FKBP65在肝癌组织间质细胞中高表达与肝癌不良预后相关。

FKBP14蛋白通过调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究FK506结合蛋白14(FKBP14)对宫颈癌(cervical cancer)细胞增殖和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测宫颈癌组织、人正常宫颈上皮细胞HUCEC,宫颈癌Hela、SiHa和Caski细胞中FKBP14 mRNA的水平,Western blot检测FKBP14、CyclinD1、Cleaved-caspase-3、IL-6和p-STAT3蛋白表达,MTT法和流式细胞术分别测定细胞增殖率和凋亡率。结果与癌旁组织(n=30)和HUCEC细胞比较,宫颈癌组织(n=30)、宫颈癌细胞Hela、SiHa和Caski中FKBP14 mRNA和蛋白含量均显著升高(P<0.05)。在Hela细胞中,抑制FKBP14表达可降低细胞增殖率和Cyclin D1、IL-6和p-STAT3蛋白含量,提高细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白含量;过表达FKBP14则提高细胞增殖率和Cyclin D1、IL-6和p-STAT3蛋白含量,降低细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白含量;JAK-STAT3信号通路抑制剂AG490(50μmol/L)可逆转过表达FKBP14对Hela细胞增殖、凋亡的影响;IL-6蛋白(100 ng/ml)可逆转抑制FKBP14对Hela细胞增殖凋亡的影响。结论FKBP14通过IL-6/STAT3通路调控Hela细胞增殖和凋亡。FKBP14可能是宫颈癌的分子靶点。

miR-32-5p和FKBP14基因转染对SPC-A1细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其靶向关系验证

目的观察miR-32-5p和FK506结合蛋白14(FKBP14)基因转染对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系SPC-A1增殖、迁移、侵袭能力的影响,并验证两者之间靶向关系。方法选取SPC-A1细胞,将细胞为A、B、C、D、E、F组,分别转染miR-32-5p+pcDNA-FKBP14、miR-32-5p+pcDNA、miR-32-5p、miR-con、pcDNA-FKBP14、pcDNA-con,采用MTT法检测细胞吸光度值,并计算细胞存活率;Transwell实验检测细胞迁移数、侵袭数,Western blotting法检测细胞CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量。取SPC-A1细胞,将细胞分为G、H、I、J组,分别转染FKBP14-WT+miR-con、FKBP14-WT+miR-32-5p、FKBP14-MUT+miR-con、FKBP14-MUT+miR-32-5p,采用荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。取SPC-A1细胞,将细胞分为K、L、M、N组,分别转染miR-32-5p、miR-con、anti-miR-32-5p、anti-miR-con,Western blotting法检测细胞中KBP14蛋白相对表达量。结果与B组比较,A组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均<0.05);与D组比较,C组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量减少(P均<0.05);与F组比较,E组SPC-A1细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均<0.05)。与G组比较,H组细胞荧光素酶活性减弱(P<0.05);与I组比较,J组细胞荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。与L组比较,K组FKBP14蛋白相对表达量减少(P<0.05);与N组比较,M组FKBP14蛋白相对表达量增加(P<0.05)。结论过表达miR-32-5p或敲减FKBP14后SPC-A1细胞存活率降低,迁移细胞数、侵袭细胞数减少,miR-32-5p与FKBP14存在靶向调控关系。

胃腺癌组织FKBP14表达变化及其与患者预后的关系

目的观察胃腺癌组织FK506相关蛋白14(FKBP14)蛋白表达变化,并探讨其临床意义。方法选择胃腺癌组织62例份为观察组,正常胃黏膜组织46例份为对照组。采用免疫组化SP法检测两组FKBP14蛋白表达,分析胃腺癌组织FKBP14蛋白表达与患者临床病理参数以及预后的关系。结果观察组、对照组FKBP14蛋白阳性表达率分别为62.9%(39/62)、26.1%(12/46),两组FKBP14蛋白阳性表达率比较P<0.05。胃腺癌组织FKBP14蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移相关(P均<0.05),与性别、年龄及分化程度无关(P均>0.05)。FKBP14阳性、阴性胃腺癌患者5年生存率分别为38.5%(15/39)、78.3%(18/23),二者比较P<0.05。FKBP14表达、TNM分期、淋巴结转移是影响胃腺癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论胃腺癌组织FKBP14蛋白表达阳性率升高。检测胃腺癌组织FKBP14蛋白有助于判断患者的病情和预后。

对硝基苯酚降解产物与FK506结合蛋白相互作用分子机制

对硝基苯酚(p-nitrophenol,p-NP)作为典型内分泌干扰物,其环境污染与人体健康问题一直是环境领域的研究热点.环境中对硝基苯酚降解产物(p-NP degradation products,p-NP-DPs)与FK506结合蛋白(FK506 binding protein,FKBP5)结合形成p-NP-DPs-FKBP5加合物是p-NP-DPs产生雌激素和抗雄激素活性的主要机制.然而,p-NP-DPs与FKBP5相互作用的分子水平机制尚未引起足够的重视.本文采用分子对接技术模拟计算p-NP-DPs与FKBP5相互作用的结合能和结合面积.结果表明,p-NP-DPs与FKBP5相互作用结合面积顺序为213Å^(2)(4-硝基邻苯二酚)>200Å^(2)(p-NP)>184Å^(2)(邻苯二酚)>175Å^(2)(对苯二酚)>173Å^(2)(苯酚)>171Å^(2)(对苯醌),结合能顺序为−3.69 kcal·mol^(−1)(4-硝基邻苯二酚)>−3.76 kcal·mol^(−1)(p-NP)>−3.81 kcal·mol^(−1)(对苯二酚/邻苯二酚)>−3.83 kcal·mol^(−1)(对苯醌)>−3.91 kcal·mol^(−1)(苯酚),高频氨基酸残基为Pro221、Gly224、Glu227、Ala228、Gly282、Lys283、Tyr284、Met285和Gln286,p-NP-DPs药效团主要包括氢键供体(—OH)、氢键受体(—NO_(2)和C=O)、芳香中心(苯环)和疏水中心(C原子).p-NP-DPs理化性质对p-NP-DPs与FKBP5相互作用强度的影响主要取决于分子量和拓扑极表面积(100%)、氢键受体数量(75%)、密度(50%)和闪点(25%).本研究对认识水环境中p-NP-DPs分子水平健康效应和环境风险具有重要科学意义.

膜蛋白FKBP38病理生理功能研究进展

FKBP38亦称FKBP8,在诸多方面均体现其为FK506结合蛋白家族的一个特殊成员,仅FKBP38具有对钙调蛋白的调节活性。FKBP38活化还可通过抑制抗凋亡Bcl-2参与凋亡信号传导。研究表明,除在程序性细胞死亡中的作用外,FKBP38还发挥对诸多差异显著的细胞过程的调控作用,而这些过程不完全依赖其FKBP结构域。FKBP38的生物学功能包括调节蛋白激酶mTOR、介导线粒体自噬、调节细胞缺氧反应以及丙型肝炎病毒复制等。因此,FKBP38的药理学靶向作用研究极可能是一种有效干预对FKBP38不同依赖性过程(如癌症或神经退行性疾病的程序性细胞死亡)的策略。