硒结合蛋白2的表达及与FKBP38蛋白的相互作用

目的:构建重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒并探讨SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白的相互作用。方法:首先以小鼠肝脏总RNA为模板,根据小鼠SELENBP2基因CDS序列设计的引物通过RT-PCR扩增SELENBP2蛋白编码序列,通过基因工程技术进行限制性核酸内切酶酶切、与pcDNA3.1-6×HIS载体连接并转化入JM108感受态大肠杆菌扩增,挑选阳性单克隆大肠杆菌并提取质粒后得到重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒。重组质粒经测序分析鉴定后,使用Lipofectamine 3000转染试剂转染至小鼠肝细胞--AML12细胞中培养30 h,采用Western blot法检测蛋白表达情况。使用AlphaFold-Multimer预测SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性及可能相互作用的结构域。最后,将重组质粒转染入过表达FKBP38蛋白的AML12细胞中,培养30 h后收集细胞蛋白样品,进行免疫共沉淀实验。结果:重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒测序结果显示插入的SELENBP2蛋白编码序列与GenBank中SELENBP2基因CDS序列相同,且转染重组质粒后,AML12细胞能有效表达SELENBP2-HIS融合蛋白。AlphaFold-Multimer结果显示SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性较高,且作用于FKBP38蛋白的TPR结构域。免疫沉淀实验结果显示,在AML12细胞中,SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白存在相互作用。结论:重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒构建成功并能在AML12细胞中正确表达,为进一步研究SENELBP2蛋白的功能奠定了基础。SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用,为SELENBP2蛋白的研究进一步拓宽了思路,为深入研究SELENBP2蛋白在肝脏中的生物学功能提供了新方向。

卵巢上皮性肿瘤中FKBP38蛋白的表达研究

目的:探讨卵巢上皮性肿瘤中FK506结合蛋白38(FK506-binding protein 38,FKBP38)蛋白的表达及潜在的临床意义。方法:采用免疫组化的方法检测20例正常输卵管组织,30例卵巢上皮性良性肿瘤,27例卵巢交界性肿瘤组织,130例卵巢上皮性癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)组织中FKBP38蛋白的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系。结果:FKBP38蛋白在卵巢上皮性癌中的表达明显低于正常输卵管组织、卵巢上皮性良性和交界性肿瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FKBP38蛋白表达在根据国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)标准定义的不同分期的卵巢上皮性癌组织中具有统计学差异(P<0.05)。FKBP38蛋白在卵巢高级别浆液性癌的表达比低级别浆液性癌中的表达显著性降低(P<0.05)。但把卵巢上皮性癌按照不同年龄及不同组织学分型分层后,FKBP38蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FKBP38蛋白表达的下调可能与卵巢上皮性癌的发生和分化密切相关,提示FKBP38蛋白作为卵巢恶性肿瘤诊断和治疗的潜在性生物靶点需进一步探索和研究。