FKBP5基因多态性与小儿支气管哮喘易感性及糖皮质激素疗效的关系研究

目的探讨FK506结合蛋白5(FK506-binding protein 5,FKBP5)基因多态性与小儿支气管哮喘易感性及糖皮质激素(glucocorticoid,GC)疗效的关系。方法选取2021-04/2023-04月作者医院收治的120例支气管哮喘患儿作为研究对象(哮喘组)。另外将同时期来作者医院进行体检的150例健康儿童作为健康组。根据GC疗效不同将支气管哮喘患儿分为良好组(n=92)和不良组(n=28)。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术鉴定FKBP5基因rs4713916位点基因分型。采用Hardy-Weinberg遗传平衡度检验对样本代表性进行评估。结果健康组和哮喘组FKBP5基因rs4713916位点基因型符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,样本具有代表性(P>0.05)。健康组FKBP5基因rs4713916位点TT(7.33%vs.18.33%)、TC(34.67%vs.37.50%)、CC(58.00%vs.44.17%)基因型频率和T(24.67%vs.37.08%)、C(75.33%vs.62.92%)等位基因频率与哮喘组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。良好组FKBP5基因rs4713916位点TT(7.61%vs.53.57%)、TC(40.22%vs.28.57%)、CC(52.17%vs.17.86%)基因型频率和T(27.72%vs.67.86%)、C(72.28%vs.32.14%)等位基因频率与不良组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。FKBP5基因rs4713916位点TT基因型患儿治疗前后第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、FEV1/FVC的差值低于TC、CC基因型患儿,且TC基因型低于CC基因型(P均<0.05)。结论FKBP5基因rs4713916位点多态性与小儿支气管哮喘易感风险和GC疗效有关,且携带TT基因型患儿对GC治疗的敏感性更差。

母亲消极教养、同伴侵害与FKBP5基因对青少年抑郁的影响

累积压力假说与匹配−不匹配假说均可解释远端和近端逆境对个体抑郁的影响,但鲜有研究考察遗传基因在其中的调节作用。采用问卷法和DNA分型技术,对970名青少年进行间隔3年的追踪调查。分别以母亲消极教养、同伴侵害为远端和近端压力指标,FKBP5基因多位点累加得分为遗传指标,考察三者对青少年抑郁的交互作用及性别差异。结果发现,在男青少年中,E×E×G显著。当累加得分较高、同伴侵害水平较高时,母亲消极教养显著负向预测抑郁,符合匹配−不匹配假说;累加得分较低时,E×E不显著,但倾向于以累积压力假说的方式发挥作用。女青少年中,E×E×G不显著。研究结果提示,在男青少年中,累积压力假说与匹配−不匹配假说均可阐明抑郁的发生机制,分别适用于携带不同FKBP5基因多位点累加得分的个体。

鸡FKBP5基因的克隆、生物信息学及组织表达谱分析

本研究旨在对鸡FK506结合蛋白5(FK506 binding protein 5,FKBP5)基因进行克隆和生物信息学分析,并检测其在鸡不同组织中的表达量。以鸡脾脏cDNA为模板,通过PCR方法扩增和克隆鸡FKBP5基因完整CDS区序列,并进行同源性比对及系统进化树构建;使用在线软件分析FKBP5蛋白的理化性质、疏水性、跨膜结构、信号肽、二级结构和三级结构;利用实时荧光定量PCR检测其在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity,VVD)组肉鸡和正常组肉鸡组织中的表达量,并绘制组织表达谱。结果显示,鸡FKBP5基因CDS区序列全长1350 bp,编码449个氨基酸;同源性比对和进化树分析表明,鸡FKBP5基因氨基酸序列与鹌鹑、鸭、壁虎、中华鳖、小鼠、人、猪、斑马鱼的同源性分别为98.4%、96.2%、85.8%、87.4%、81.1%、85.2%、86.1%和61.2%,与鹌鹑、鸭的亲缘关系最近,爬行类和哺乳类动物次之,与斑马鱼(鱼类)亲缘关系最远。鸡FKBP5蛋白分子质量为50.43 ku,理论等电点(pI)为5.94,半衰期为30 h,肽链N端为蛋氨酸(Met),不稳定系数为23.80,属于稳定蛋白;跨膜区和信号肽预测结果显示,FKBP5蛋白不属于跨膜蛋白和分泌型蛋白。结构域分析结果表明,该蛋白包括2个FKBP型肽基脯氨酰异构酶(FKBP-type peptidylprolyl isomerases)、3个四肽重复(TPR)序列,主要包含α-螺旋(46.77%)、延伸链(12.47%)和无规则卷曲(40.76%),且该蛋白与HSPA2、PPID、STIP1、HSP90AA1和HSP90AB1等互作蛋白具有很强的相关性。实时荧光定量PCR结果显示,FKBP5基因在鸡各组织中广泛表达,其中在软骨和法氏囊中表达量较高,在发病组肉鸡组织中的表达量均高于正常组肉鸡,且在心脏、腿肌、法氏囊、胸腺、软骨中表达量差异显著(P<0.05),在脾脏中表达量差异极显著(P<0.01)。本试验结果可为肉鸡骨骼疾病及腿部健康选育提供参考。

雄激素通过雄激素受体途径调控小鼠附睾Fkbp5基因的表达

目的初步研究小鼠附睾Fkbp5(FK506 binding protein 5)基因对雄激素的响应性以及相关的分子机制。方法建立小鼠去势以及雄激素补充模型。采用RT-PCR以及RT-qPCR,检测正常小鼠、去势小鼠以及去势后补充外源雄激素的小鼠附睾中Fkbp5基因的mRNA表达水平。搜索染色体免疫共沉淀-测序(chromatin immunoprecipitation-sequencing,ChIP-seq)数据建立的小鼠附睾全基因组雄激素受体(androgen receptor,AR)结合位点的数据库,寻找与Fkbp5基因相关联的AR结合位点。利用AR抗体进行染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP),采用ChIP-PCR以及ChIP-qPCR的方法,检测Fkbp5基因相关联的AR结合位点在体内与AR的结合情况。结果去势后,Fkbp5基因的表达显著降低(P<0.05);补加雄激素后,Fkbp5基因的表达又升至正常水平(P<0.05)。从小鼠附睾AR结合位点的数据库中鉴定到14个Fkbp5相关联的AR结合位点。ChIP-PCR结果显示,在正常生理状态下,这14个结合位点均与AR结合。ChIP-qPCR结果显示,去势后,这14个AR结合位点的富集倍数均显著下降(P<0.05);而补加雄激素后,这些AR结合位点的富集倍数又显著上升至生理水平(P<0.05)。结论 Fkbp5在小鼠附睾内的表达受雄激素的正调控,并且是AR的一个直接靶基因。该研究首次证实了Fkbp5的启动子以及上游增强子区域存在雄激素响应元件,为探究雄激素/AR对Fkbp5的调控机制提供了新的视角。

胃癌中FKBP5的表达及其与免疫浸润和预后相关性研究

目的探究FKBP5在为胃癌中的表达、预后意义及其与免疫浸润的关系。方法利用TIMER数据库分析FKBP5在多种肿瘤中的表达;在癌症基因组图谱(TCGA)胃癌数据集中比较FKBP5在胃癌与癌旁正常组织及不同病理亚组中的表达差异;TCGA和KMplotter数据库分析FKBP5与患者预后的关系;基因富集分析(GSEA)分析FKBP5高表达组富集信号通路;应用TIMER数据库分析FKBP5与免疫浸润水平的关系,并分析不同免疫细胞浸润对胃癌患者预后的影响;Pearson相关分析FKBP5与经典免疫相关基因的表达相关性。结果FKBP5在多种肿瘤组织中表达失调,在胃癌组织较癌旁正常组织表达下调;FKBP5表达水平随着T分期和病理分级的增高而升高;生存分析显示FKBP5 mRNA高表达的胃癌患者总生存率低于FKBP5低表达的胃癌患者(HR>1.50,P<0.05)。GSEA分析显示,FKBP5 mRNA高表达组胃癌样本在同种异体排斥、上皮间质转化、HEDGEHO信号、炎症反应、肌生成等信号通路富集(ES>1.50,P<0.05)。在胃癌组织中,FKBP5表达与CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞的浸润呈正相关(cor>0.35,P<0.05);巨噬细胞浸润水平较高的样本,患者的预后更差。FKBP5表达水平与大部分免疫相关基因明显正相关(cor>0.45,P<0.05)。结论在胃癌中,FKBP5基因高表达与肿瘤T分期、组织学分级、不良预后及CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞的浸润水平显著相关,可以作为预测胃癌患者预后的生物标志物和治疗靶点。