抗人FKBP52分子单克隆抗体的制备和鉴定

目的 研制抗人FKBP5 2单克隆抗体 (mAb) ,并分析其免疫生物学特性。方法采用纯化的人FKBP5 2蛋白免疫BALB c小鼠。用ELISA法鉴定mAb的特异性 ;用Westernblot鉴定制备的 9株mAb所识别的抗原相对分子质量 (Mr)及结合人FKBP5 2分子的功能区。结果共获得9株分泌抗人FKBP5 2mAb的杂交瘤细胞。抗人FKBP5 2mAb可识别相对Mr为 5 2 0 0 0在原核系统中表达的人FK BP5 2蛋白 ,也可识别Jurkat细胞浆中Mr为 5 2 0 0 0的天然FKBP5 2蛋白。两株mAb均可识别人FKBP5 2分子中的第2功能区。其余 7株mAb可识别人FKBP5 2分子中的第 3功能区。结论成功地制备了抗人FKBP5 2分子mAb。

人FKBP52的基因克隆、表达及活性研究

为获得具有生物学活性的hFKBP5 2 ,来筛选新型的促神经再生药物 .采用半巢式、桥联PCR及亲和层析方法 ,从人胎脑cDNA文库中成功扩增出hFKBP5 2基因 ,在 pET2 8a (+ )中实现了高效、可溶性的融合表达 ,表达量约 30 % .重组的蛋白质经亲和纯化至电泳纯 ,纯化后的hFKBP5 2显示出肽基脯氨基顺反异构酶活性 .表明原核表达的hFKBP5 2具有类似于其天然蛋白质的生物学活性 .

FKBP12和FKBP52在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的分析FKBP12和FKBP52在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,并探讨其与HCC临床病理因素的关系。方法应用免疫组化SP法检测FKBP12和FKBP52在60例HCC组织、60例癌旁组织、10例肝血管瘤组织和10例正常肝组织中的表达水平,并结合临床病理因素分析其临床意义。结果在HCC组织、癌旁组织、肝血管瘤组织和正常肝组织中FKBP12的阳性表达率分别为66.7%、30.0%、20.0%和40.0%,FKBP12在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织、肝血管瘤组织和正常肝组织中的表达(P均<0.05)。在HCC组织、癌旁组织、肝血管瘤组织和正常肝组织中FKBP52的阳性表达率分别为63.3%、26.7%、40.0%和20.0%,FKBP52在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织和正常肝组织中的表达(P均<0.05),与肝血管瘤组织中的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。FKBP12和KBP52在HCC组织中的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。FKBP12在HCC组织中的表达水平与患者年龄、性别、合并肝硬化和乙肝病毒感染无明显关系(P均>0.05),而与肿瘤直径、病理分级和血清中AFP的水平有关(P均<0.05)。FKBP52在HCC组织中的表达水平与患者年龄、性别、肿瘤直径、合并肝硬化和血清中AFP的水平无明显关系(P均>0.05),而与病理分级、乙肝病毒感染有关(P均<0.05)。结论 FKBP12和FKBP52的高表达与HCC的发生、发展密切相关。FKBP12可能参与HCC癌细胞的增殖以及分化过程,并且可能与HCC患者血清中AFP水平的升高有关;FKBP52可能参与HCC的分化过程,并且可能与乙肝病毒感染密切相关。

FKBP52在反复体外受精种植失败患者种植窗期子宫内膜的表达研究

目的探讨FKBP52在反复体外受精种植失败患者种植窗期子宫内膜的表达情况。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和免疫组织化学方法分别测定20例反复体外受精种植失败妇女(组1)种植窗期子宫内膜组织中FKBP52蛋白及其mRNA的表达,并与15例正常生育能力妇女卵泡晚期(组2)和种植窗期(组3)相比较。结果组1的FKBP52mRNA表达水平低于组2,组2低于组3,但差异均无统计学意义(P>0.05)。FKBP52蛋白表达于腺上皮的胞核及胞浆,组1在腺上皮的胞核表达明显,组2在腺上皮的胞浆表达明显,组3在腺上皮的胞核及胞浆均有明显表达;组1和组2的FKBP52蛋白表达量分别为(2 125.9±1 729.9)和(1 360.2±853.7),并显著低于组3(8 319.1±5 873.8)(P<0.05,P<0.01)。结论 FKBP52蛋白在种植窗期的表达和定位异常可能是反复体外受精种植失败患者子宫内膜容受性的影响因素。

抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建

目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。

FKBP52功能及与疾病联系的研究进展

FKBP52为FK506结合蛋白(FKBPs)家族的一个亚类,其包括FK1、FK2、TRP区在内的三个结构区。其中,FK1区的FK506结合位点具有可调控靶蛋白的PPIase活性,而TRP区可为Hsp90提供结合位点。FKBP52的主要功能在于对甾体激素受体信号通路的调节,如受体的结合、转运等,同时在调控神经元微管功能中也发挥重要作用。最近研究发现,FKBP52与多种癌症、生殖疾病及某些中枢神经系统相关疾病的发生存在一定联系。本文主要对FKBP52目前已知的生物学功能及与疾病的关联进行综述,同时对其应用前景进行展望,以期为FKBP52的进一步研究提供参考。

人源性抗人FKBP52 IgG的表达和纯化

目的将噬菌体抗体库中筛选到的抗52-k Da FK506结合蛋白(FKBP52)人源单链抗体(sc Fv)转换为完整人IgG并在真核细胞中表达。方法噬菌体抗体库获得的5株抗人FKBP52-sc Fv,PCR扩增其轻重链可变区(V_H/V_κ),利用同源重组技术将5对V_H、V_κ拼接至分别包含有人κ链及IgG1恒定区的真核表达载体p CMV/R-L、p CMV/R-H上,转染HEK293F细胞进行完整抗体表达,ELISA鉴定抗体活性,蛋白A柱分离纯化活性最高的抗体,SDS-PAGE、Western blot法鉴定纯化后抗人FKBP52-IgG。结果 PCR及测序结果证实正确构建得到5对抗人FKBP52真核表达载体,转染HEK293F细胞后经ELISA鉴定均有完整抗体表达,对活性最高的5号克隆进行抗体分离纯化,经SDS-PAGE及Western blot验证获得高纯度的特异性人源抗FKBP52-IgG。结论成功将原核表达的抗人FKBP52-sc Fv转换为真核表达的完整人IgG。

FKBP52对小鼠前列腺发育的影响

目的通过FKBP52基因敲除小鼠模型探索FKBP52在小鼠前列腺发育过程中的作用。方法分别对胚胎第17.5天、新生的和出生后3周的野生型和FKBP52基因敲除小鼠的前列腺进行切片HE染色,观察不同发育时期里野生型和FKBP52基因敲除小鼠前列腺发育的异同。结果 (1)小鼠前列腺发育的起始不依赖于FKBP52基因的参与;(2)随着胚胎的发育,FKBP52在雄鼠前列腺发育中的作用逐渐显现出来,即FKBP52的缺失会导致前列腺叶发育受阻,最终不能形成成熟的前列腺。结论 FKBP52在小鼠前列腺的发育过程中具有重要作用,它不参与前列腺的发育起始过程,但其缺失会导致前列腺发育受阻,即不能形成成熟的前列腺。

针刺对抑郁大鼠海马FKBPs/GR/BDNF信号通路相关因子表达的影响

目的通过观察针刺腧穴“解郁方”对慢性应激抑郁大鼠行为学及海马CA3区锥体细胞微观结构上的影响,检测大鼠海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、应激伴侣蛋白FKBP51和FKBP52蛋白表达的变化,探究腧穴“解郁方”干预抑郁症的作用机制。方法将40只SD雄性大鼠按照随机数字表分为空白组、模型组、针刺组和药物组,应用不可预知应激刺激来制备大鼠抑郁模型,分别于实验前后对各组大鼠进行各项行为学检测,运用免疫蛋白印迹法比较每一组大鼠海马区中GR、BDNF、FKBP51和FKBP52的总蛋白的含量的差异,通过切片HE染色观察各组大鼠海马CA3区锥体细胞微观形态学的改变。结果(1)模型大鼠体重增长明显变慢,存在极显著差异(P<0.05);而针刺组与药物组能够改善应激造成的体重增长减慢的情况,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)模型组大鼠水平与直立运动和糖水消耗量较前所测结果明显减少(P<0.05),说明造模成功。针刺和药物治疗对改善大鼠抑郁样行为有统计学意义(P<0.05)。(3)模型组大鼠海马FKBP51表达提高,而GR、BDNF、FKBP52的表达下降;针刺组和药物组与模型组相比,GR、BDNF、FKBP52蛋白表达显著提升,FKBP51的表达有所降低(P<0.05)。(4)镜下可以观察到模型组大鼠海马CA3区锥体细胞间隙明显增大,出现不同程度的损伤;针刺组锥体细胞整体形态要优于模型组和药物组,仅有少许细胞出现损伤。结论运用腧穴“解郁方”针刺治疗能够帮助大鼠提升生理机能并改善抑郁行为;其作用机制可能与升高海马FKBP52的蛋白表达,下调FKBP51的蛋白表达,提高GR、BDNF的蛋白活性,修复受损的海马神经元有关。

复发性流产病人绒毛组织中FK506结合蛋白52的表达及意义

目的探讨复发性流产(RSA)病人及正常早孕妇女绒毛组织中FK506结合蛋白52(FKBP52)基因和蛋白的表达。方法选取2012年2月至2013年6月广西医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的30例RSA妊娠妇女(复发性流产组)及同期正常早孕妇女30例(对照组),收集其新鲜绒毛组织,分别应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学方法检测两组绒毛组织中FKBP52基因和蛋白的表达。结果 FKBP52在两组妇女的绒毛组织中均有表达,但与对照组相比,复发性流产组凝胶成像系统半定量分析FKBP52 m RNA(1.484±0.198对1.109±0.292,P<0.05)及蛋白表达(91.8±5.3对68.2±8.4,P<0.01)均明显降低。结论 FKBP52的表达可能在胚胎着床和早期妊娠的维持中起重要作用,其表达降低可能与RSA的发病密切相关。