用~32P后标记法研究交链孢酚及菜油油烟凝聚物对FL细胞DNA加成作用

交链孢酚是河南林县污染粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢提取物，可能与食管癌的发病有关，菜油油烟凝聚物可能与非吸烟妇女的肺癌发生有关。人羊膜上皮细胞系ＦＬ细胞接触不同剂量的交链孢酚；及经β－萘磺酮诱导２４ｈ的ＦＬ细胞接触不同剂量的菜油油烟凝聚物，用＾３２Ｐ后标记法检测其加成物，分别可分离到１个和４个主要加成物斑块，均有明显剂量依赖性关系，提示该两种物质有明显的细胞遗传毒效应。

金属化合物诱发人羊膜FL细胞非程序性DNA合成的研究

以人羊膜ＦＬ细胞非程序性ＤＮＡ合成为观察指标，对６种金属化合物进行了遗传毒性检测，其中重铬酸钾、氯化镍、醋酸铅、硫酸锰和硫酸镉可诱发非程序性ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）增加，表明这些金属化合物在一定剂量时对人体遗传物质具有致突变作用。

低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究

目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像 ,找出在 MN-NG处理后表达有差异的蛋白斑点 ,用基质辅助的激光解吸 -飞行时间质谱 (MAL DI- TOF)鉴定。结果 :在 MNNG处理后有 6 0多个蛋白斑点出现质和量的变化 ,其中 18个蛋白斑点只能在 MNNG处理的细胞中检测到 ,13个蛋白斑点则在 MNNG处理后消失 ;同时检测到 30个蛋白斑点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点表达升高 ,14个点则表达降低。通过数据库的检索 ,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白。结论 :在低浓度烷化剂攻击后 ,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化。

FL细胞中细胞色素P450同工酶的诱导及其在诱变剂生物学检测系统中的应用

以芳烃羟化酶(AHH)、乙氧基异吩噁唑-O-去乙基酶(EROD)、乙氧基香豆素-O-去乙基酶(ECOD)及氨基比林-N-去甲基酶(APND)为标志酶、3-甲基胆蒽、β-萘黄酮、去甲肾上腺素及苯巴比安钠为诱导剂证明人羊膜FL细胞系有可诱导的细胞色素P450ⅠA及ⅡB基因的表达,有较宽的药物代谢酶谱。EROD及APND的最大诱导反应见于3-甲基胆蒽和去甲肾上腺毒复合诱导时。

茶多酚对FL细胞EROD活性及细胞CPYIA1mRNA水平影响的研究

茶多酚对ＦＬ细胞ＥＲＯＤ活性及细胞ＣＰＹＩＡ１ｍＲＮＡ水平影响的研究冯磊，余应年，陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学生物学实验室杭州３１００３１）茶多酚是茶叶提取物的主要成份。许多研究表明它具有抑制亚硝胺类和ＡＦＢ１等致癌物对动物的致癌作用。...

型煤焦油诱发人羊膜FL细胞非程序性DNA合成的研究

型煤焦油诱发人羊膜ＦＬ细胞非程序性ＤＮＡ合成的研究原福胜，武忠诚，邢权煤炭是我国当前居民生活能源的主体，在城市民用能源消费中占８０％以上，这种格局，到２０００年不会有大的变化［１］。近年来，许多大城市，随着＂无烟区＂的扩大，民用煤已由散煤发展到型煤。...

大气颗粒物诱导人羊膜FL细胞非程序性DNA合成的研究

本研究以诱导人羊膜ＦＬ细胞非程序性ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）为指标，对大气颗粒物提取液进行了致突变性试验。结果表明，大气颗粒物的提取液可诱发ＵＤＳ反映值明显增加（Ｐ＜０．０１），具有较强的致突变作用。

用穿梭质粒pWB1研究黄曲霉素B_1,苯并(α)芘在人FL细胞中的诱变性

作者以β－萘黄酮诱导ＦＬ细胞表达细胞色素Ｐ４５０同工酶系，利用穿梭质粒ｐＷＢ１研究了黄曲霉Ｂ１和苯并（α）芘在人新生儿羊膜上皮ＦＬ细胞中的诱变作用。结果：均以比自发突变频率（７．６１×１０－６）高两个数量级（１０－４）的频率，检出了黄曲霉Ｂ１和苯并（α）芘诱发的ＳｕｐＦ基因突变子，其中黄曲霉素Ｂ１表现了明显的剂量效应，从而为穿梭质粒ｐＷＢ１结合β－萘黄酮诱导ＦＬ细胞表达细胞色素Ｐ４５０同工酶系在ＦＬ细胞内检测间接致癌物的可行性提供了证据。

新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应

目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。

CYP2B6cDNA导入V79、FL和CHL细胞中稳定表达及其初步鉴定

ＣＹＰ２Ｂ６ｃＤＮＡ导入Ｖ７９、ＦＬ和ＣＨＬ细胞中稳定表达及其初步鉴定吴健敏，董海涛，余应年，朱丽君（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）细胞色素Ｐ４５０是代谢活化大多数前致突变物／致癌物的主要酶系，在建株细胞中这些基...

脂质过氧化反应混合物诱发人羊膜FL系细胞程序外DNA合成

大鼠肝微粒体依赖NADP的脂质过氧化反应混合物(LPRM)可诱发人羊膜FL系细胞程序外DNA合成(UDS)。当一定浓度的LPRM(0.7～2.4mg微粒体蛋白/ml)加入^(14)C—TdR预标记的FL细胞培基时,引起羟基尿素(HU)抗性的程序外~3H—TdR掺入,与对照组相比差异显著(P<0.05),并存在剂量—效应关系。由此可见,脂质过氧化反应混合物中含有诱变物,推测其在癌肿发病中可能有直接作用。

不同炉具的型煤焦油诱导人羊膜 FL 细胞非程序性 DNA 合成的研究

以人羊膜ＦＬ细胞非程序性ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）为观察指标，对３种炉具的型煤焦油进行了遗传毒性检测。结果表明，３种炉具焦油在有与无Ｓ９情况下均不同程度地诱发ＵＤＳ反映值增加，但它们诱发ＵＤＳ增加剂量和作用范围大小不同。同一种煤用不同炉具燃烧，对所产生的直接致遗传毒性物质和间接致遗传毒性物质的成分和强度有很大影响。

造血细胞生长因子FL变化在胚胎期造血中的临床意义

目的 检测胎盘绒毛组织及脐血中造血细胞生长因子酪氨酸激酶受体 3(Flt3)配体 (FL )开始出现的时间及其随胎龄增长的含量变化 ,探讨其在胚胎期造血中的意义。方法 分别取妊娠早期 (6～ 8周 )、妊娠中期(16～ 2 2周 )、妊娠晚期 (37～ 4 2周 )胎盘绒毛组织 2 g各 30份、脐血清 30份 ,采用酶联免疫吸附法测定上清液中的 FL 含量。结果 1早期妊娠开始 FL 已产生 ;其含量随着胎龄增加而逐渐增加 ,各胎龄组间比较有显著性差异(P<0 .0 1)。2 FL 在胎盘和脐动静脉血中的含量有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 FL 来源于胎盘 。

牛磺鹅去氧胆酸对FLS细胞中GR介导的HSP 90基因表达的影响

采用实时荧光定量PCR法分析了牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对佐剂性关节炎模型(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中由糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)介导的热休克蛋白90基因(heat shock protein 90 gene,HSP90)mRNA表达的影响。结果表明,TCDCA可以极显著性(P<0.01)下调FLS细胞内HSP 90 mRNA的表达,同时加入GR的特异性抑制剂RU486后可抑制TCDCA对HSP 90 mRNA的作用。由此证明了TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用的。

细胞因子FL与造血细胞的关系

FL是一种与造血调控密切相关的细胞因子 ,可协同其它造血因子促进原始干 (祖 )细胞的增殖与分化 ,在临床上有广阔的应用前景。

三丁基锡对正常人胚胎羊膜细胞凋亡的诱导作用

为了探讨三丁基锡(TBT,tributyltin)对正常人羊膜细胞FL(humanamnioticcells)凋亡的诱导作用,进行了流式细胞仪PIAnnexinⅤ双染色检测TBT对FL细胞凋亡的诱导作用,并采用荧光染料FITC标记的特异性的caspase3的抑制剂检测活细胞中caspase3的酶活性.实验结果表明,0、1、2、3、4μmol·L-1浓度的三丁基锡作用于FL细胞2h后,细胞凋亡率和细胞中caspase3酶活性都明显升高,且有良好的剂量效应关系.表明三丁基锡在一定浓度和暴露时间下能够诱导FL细胞的凋亡,而且在此过程中,caspase3起重要作用.

细胞DNA低甲基化是否为化学致癌启动过程的必经途径?

利用限制性内切酶分析技术研究化学致癌物对人羊膜FL细胞新合成DNA甲基化水平的影响,发现弱遗传毒性致癌物5-杂氮胞苷和L-乙硫氨酸可抑制HpaⅡ识别位点的甲基化,但是强诱变剂/致癌剂MNNG和黄曲霉素B_1对同一顺序DNA的甲基化却没有作用。所以抑制哺乳类DNA的胞嘧啶甲基化是部分而非全部致癌剂的特殊致癌启动机制。

化学致癌物暴露后哺乳动物细胞内及培养上清中核型dUTP焦磷酸酶的表达分析

目的:研究不同化学致癌物暴露后核型dUTP焦磷酸酶(DUT-N)在哺乳动物细胞内及培养上清中的表达情况。方法:分别用N-亚硝胺类烷化剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和多环芳烃类致癌物苯并[a]芘在体内的终致癌物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)处理人羊膜上皮FL细胞、人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞。采用SDS-PAGE和免疫印迹法检测细胞培养上清中DUT-N蛋白的分泌及细胞内该蛋白的表达情况。结果:低浓度MNNG(0.25μmol/L)和BPDE(5nmol/L)暴露后都可引起DUT-N出现在FL细胞的培养上清中,而对HeLa细胞均无此影响;两者对HepG2细胞的影响不同,前者使DUT-N在细胞外出现,而后者却没有改变。同时,尽管MNNG与BPDE都可引起FL细胞胞外DUT-N的出现,但MNNG暴露后胞内DUT-N的表达dUTP下调,而BPDE暴露后却dUTP上调。结论:化学致癌物暴露后核型dUTP焦磷酸酶在细胞培养上清中出现的现象不具有化合物的特异性,但对特定细胞系(如FL细胞)可能存在化学致癌剂或DNA损伤剂的共性。同时,不同致癌物引起DUT-N出现的细胞反应可能是不同的。