利用SNP分型技术鉴别油菜FLC1与FLC3基因的A、C组基因型

甘蓝型油菜是由白菜型油菜(A组基因型)与甘蓝(C组基因型)杂交后自然加倍的异源四倍体芸薹属植物。其中含有A组与C组两种基因型的染色体,而FLC1与FLC3是A、C组中共同拥有的FLC基因。通过序列比对,分别寻找出A、C组基因中FLC1与FLC3基因的特异性SNP位点,并设计了3对SNP特异性引物对。采用特异性引物延伸法,分别对来自白菜型油菜、甘蓝以及甘蓝型油菜的不同材料进行检测。利用这3对特异性SNP引物对,成功地对油菜中A、C组的FLC1与FLC3基因进行了有效的分型,为研究甘蓝型油菜中A、C组来源的FLC1与FLC3表达奠定了基础。

青花菜FLC1基因多态性分析与克隆

采用11对与十字花科春化和开花相关的分子标记，对青花菜不同熟性品系基因组DNA进行PCR扩增分析发现，FLC1基因存在多态性。进一步的分析表明该多态性与品系间的熟性性状相关性不大。通过RACE技术克隆两个熟性差异较大的青花菜FLC1基因，并进行了序列对比表明，两个青花菜FLC1基因之间存在单个基因的差异，但根据此设计的引物未能发现其与熟性性状之间的相关性。

大白菜开花相关基因FLC1的BAC克隆筛选及分析

采用改良的混合池构建方法构建大白菜BAC文库一级混合池和二级混合池,利用开花相关基因FLC1特异引物对其进行PCR筛选。通过三步PCR扩增、114个PCR反应,筛选了19200个克隆,获得了2个FLC1单克隆。克隆测序结果表明,其扩增产物的序列与大白菜FLC1的相似性达到99%,证实此克隆为含FLC1基因的BAC克隆。

青萝卜晚抽薹性状回交转育及FLC2第1内含子PCR扩增检测

FLC2基因作为影响成花的关键枢纽基因,在十字花科植物成花转变过程中具有重要作用。为了培育适于早春栽培的晚抽薹青萝卜新品种,在充分考虑FLC2基因对抽薹开花作用的基础上,以晚抽薹基因型白玉春萝卜为供体,通过回交转育的方法将晚抽薹性状转移到潍县青萝卜中,并在转育过程中对FLC2扩增多态性进行了研究,以探索晚抽薹植株FLC2的特征,并开发其对早春品种选育的作用。结果表明:FLC2第1内含子在晚抽薹供体中具有长约1 628 bp的插入突变,该基因型对晚抽薹作用较大,纯合的插入突变对晚抽薹作用大于杂合型。通过对该插入突变的PCR扩增可知,不同春化时期对插入突变内含子扩增的影响不同,短期春化主要影响野生型FLC2第1内含子的扩增,较长时间的春化主要影响插入突变内含子的扩增,而在抽薹开花期2种基因型的扩增基本不受影响,扩增效率高。通过改进引物,可以提高扩增效率,但不能消除春化对FLC2第1内含子扩增的影响,苗期未经春化植株不及抽薹开花期检测效果好。萝卜晚抽薹回交转育可以连续进行,每次转育只要获得杂合基因型即可传递晚抽薹性状,最后的自交后代,通过花期对插入突变内含子的PCR检测可以准确鉴定植株是否为纯合突变型晚抽薹植株,获得遗传稳定的晚抽薹基因型,从而可防止后代晚抽薹性状的分离。