天马颗粒通过FLI-1/Klotho通路对结肠癌细胞HCT116增殖抑制的作用机制研究

目的研究天马颗粒通过FLI-1/Klotho途径对结肠癌细胞(HCT116)增殖抑制的作用机制。方法将HCT116细胞分为blank组、shRNA组、shTMKL组、TMKL组。blank组为空白对照,shRNA组为HCT116细胞瞬时转染FLI-1 shRNA,shTMKL组为shRNA组基础上加入天马颗粒血清干预,TMKL组为天马颗粒血清干预HCT116细胞。各组细胞培育24 h后,进行后续实验检测。qPCR检测各组细胞FLI-1 mRNA和Klotho mRNA表达;Western blot法检测各组细胞FLI-1蛋白和Klotho蛋白相对表达;流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡,并计算S期细胞比值(S-phase fraction,SPF);CCK-8法检测各组细胞增殖。结果与blank组相比,shRNA组、shTMKL组FLI-1、Klotho蛋白及mRNA表达量降低(P<0.05),TMKL组FLI-1、Klotho蛋白及mRNA表达量升高(P<0.05);与shRNA组相比,shTMKL组FLI-1、Klotho蛋白及mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05),TMKL组FLI-1、Klotho蛋白及mRNA表达量升高(P<0.05);与shTMKL组相比,TMKL组FLI-1、Klotho蛋白及mRNA表达量升高(P<0.05)。与blank组相比,shRNA组HCT116细胞增殖能力增强(P<0.05)、SPF值升高(P<0.05)、凋亡率下降(P<0.05),shTMKL组、TMKL组HCT116细胞增殖能力受到抑制(P<0.05)、SPF值降低(P<0.05)、凋亡率升高(P<0.05);与shRNA组相比,shTMKL组、TMKL组HCT116细胞增殖能力受到抑制(P<0.05)、SPF值降低(P<0.05)、凋亡率升高(P<0.05);与shTMKL组相比,TMKL组HCT116细胞增殖能力受到抑制(P<0.05)、SPF值降低(P<0.05)、凋亡率升高(P<0.05)。结论天马颗粒可通过FLI-1基因调控Klotho蛋白表达,进而抑制HCT116细胞增殖、诱导凋亡。

转录因子FLI-1通过上调Klotho基因改善心肌细胞肥大

目的探讨转录因子FLI-1通过Klotho介导的IGF-1R/Gi/PLC途径对心肌细胞肥大的影响。方法将大鼠心肌细胞(H9c2)分为对照组、模型组、模型+NC Vector组、模型+pcDNA-FLI-1组、模型+NC Vector+NC siRNA组、模型+NC Vector+Klotho siRNA组、模型+pcDNA-FLI-1+NC siRNA组和模型+pcDNA-FLI-1+Klotho siRNA组等共8组。通过用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)处理细胞,建立心肌细胞肥大模型,细胞分别转染pcDNA-FLI-1和Klotho siRNA。采用流式细胞术观测细胞凋亡,鬼笔环肽染色观测细胞肥大面积;采用Western blot检测细胞凋亡、肥大及IGF-1R/Gi/PLC途径相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著增加(P<0.05),表明建模成功;与模型+NC Vector组比较,模型+pcDNA-FLI-1组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著降低(P<0.05)。与模型+NC Vector+NC siRNA组相比,模型+NC Vector+Klotho siRNA组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著增加(P<0.05);与模型+pcDNA-FLI-1+NC siRNA组相比,模型+pcDNA-FLI-1+Klotho siRNA组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著降低(P<0.05)。结论FLI-1能够通过上调Klotho抑制IGF-1R/Gi/PLC途径,减轻心肌细胞凋亡及心肌细胞肥大面积。