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N-乙酰半胱氨酸上调细胞FLICE抑制蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及其机制研究 被引量:3
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作者 樊恒 乐健伟 +4 位作者 孙敏 陈国栋 朱永定 叶继辉 朱建华 《中华危重症医学杂志(电子版)》 CAS CSCD 2018年第4期250-255,共6页
目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)上调细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的作用。方法将30只雄性BALB/c小鼠分为假手术组、脓毒症组和NAC组,每组各10只。采用盲肠结扎穿孔术法制备脓毒症小鼠模型,假手术组除不结扎穿刺... 目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)上调细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的作用。方法将30只雄性BALB/c小鼠分为假手术组、脓毒症组和NAC组,每组各10只。采用盲肠结扎穿孔术法制备脓毒症小鼠模型,假手术组除不结扎穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,NAC组小鼠术后15 min尾静脉注射NAC 100 mg/kg。造模成功后24 h取小鼠肾脏,光镜下观察肾脏组织病理变化;采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测c-FLIP mRNA表达;采用Western-blotting法检测c-FLIP蛋白表达;复制上述实验观察96 h内小鼠的生存情况。结果与假手术组相比,脓毒症组小鼠肾小球萎缩、肾小管上皮细胞变形、肾小管腔内可见大量肾细胞间质和碎片,而NAC组小鼠肾脏组织病变明显减轻。三组间肾脏组织病理学损伤评分、cFLIP mRNA及蛋白表达比较,差异均有统计学意义(F=101.400、31.720、20.330,P均<0.05)。进一步两两比较发现,CLP组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较假手术组显著升高(P <0.001),NAC组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较CLP组显著降低(P <0.001)。与假手术组相比,脓毒症组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均明显下降(P均<0.05),NAC组c-FLIP的蛋白表达有所降低(P <0.05);与脓毒症组相比,NAC组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均显著上升(P均<0.05)。KaplanMeier生存曲线结果显示,三组小鼠生存情况比较,差异有统计学意义(χ2=8.806,P=0.012)。进一步两两比较发现,脓毒症组及NAC组小鼠的存活数量均较假手术组显著降低(P均<0.017),而NAC组小鼠存活数量较脓毒症组明显升高(P <0.017)。结论 NAC通过上调c-FLIP表达对脓毒症小鼠的急性肾损伤具有显著的保护作用。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肾损伤 N-乙酰半胱氨酸 细胞flice抑制蛋白 小鼠
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滇南小耳猪正常胆道和胆道瘢痕来源成纤维细胞核转录因子κB和凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白的表达
2
作者 胡平海 杨慧 李立 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第41期7677-7680,共4页
背景:胆道瘢痕形成存在细胞的增殖和凋亡的平衡被破坏,尤其是成纤维细胞大量增殖并过度分泌胶原等基质成分。目的:对比核转录因子κB及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白在胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞系中的表达情况... 背景:胆道瘢痕形成存在细胞的增殖和凋亡的平衡被破坏,尤其是成纤维细胞大量增殖并过度分泌胶原等基质成分。目的:对比核转录因子κB及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白在胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞系中的表达情况。方法:8只滇南小耳猪随机等分为胆道损伤修复组和正常对照组,分别通过建立胆道损伤修复模型和不损伤胆道方法培养胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞。结果与结论:与正常胆道来源的成纤维细胞相比,胆道瘢痕来源的成纤维细胞中核转录因子κB及凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白表达的范围更广,表达更强。提示胆道损伤后核转录因子κB激活增加,并导致caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白过表达,从而导致胆道成纤维细胞凋亡减少致胆道瘢痕的形成。 展开更多
关键词 核转录因子ΚB caspase-8同源结构flice抑制蛋白 胆管 成纤维细胞 滇南小耳猪 组织构建 组织工程
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细胞型FLICE样抑制蛋白、T-box转录因子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义 被引量:1
3
作者 张颖奇 李华 +2 位作者 徐波 满一 刘微丽 《中国医药导报》 CAS 2015年第9期25-28,33,共5页
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞型FLICE样抑制蛋白(c FLIP)及T-box转录因子(TBX2)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化检测OSCC 57例、口腔黏膜上皮异常增生组织(DOM)38例及正常黏膜组织(NOM)30例中c FLIP、TBX2蛋白表达情况。... 目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞型FLICE样抑制蛋白(c FLIP)及T-box转录因子(TBX2)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化检测OSCC 57例、口腔黏膜上皮异常增生组织(DOM)38例及正常黏膜组织(NOM)30例中c FLIP、TBX2蛋白表达情况。运用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测OSCC、DOM和NOM中的c FLIP m RNA和TBX2 m RNA表达水平。结果在OSCC、DOM及NOM中,c FLIP的阳性表达率分别为91.23%、84.21%和10.00%;TBX2的阳性表达率分别为87.72%、81.85%和26.67%。c FLIP及TBX2的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。OSCC中c FLIP m RNA及TBX2 m RNA的表达水平明显高于DOM及NOM。c FLIP m RNA及TBX2m RNA的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示c FLIP及TBX2的表达呈正相关(r=0.768,P<0.05)。结论 c FLIP及TBX2在OSCC中呈高表达,两者可能在OSCC的发生、发展中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 细胞型flice抑制蛋白 T-box转录因子 免疫组化 逆转录多聚酶链反应
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老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白、细胞FLICE样抑制蛋白表达水平与临床病理特征及预后的关系 被引量:1
4
作者 饶兴友 霍奇 +2 位作者 余俊 洪波 杨玉坤 《中国性科学》 2022年第5期41-44,共4页
目的研究老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、细胞FLICE样抑制蛋白(cFLIP)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年6月至2019年6月庐江县人民医院收治的93例行前列腺癌根治术的老年患者作为研究对象。分别留取... 目的研究老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、细胞FLICE样抑制蛋白(cFLIP)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年6月至2019年6月庐江县人民医院收治的93例行前列腺癌根治术的老年患者作为研究对象。分别留取其的肿瘤组织、癌旁组织及正常前列腺组织标本,采用免疫组织化学法检测3种组织中Bcl-2、cFLIP蛋白表达水平,结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线对患者24个月的生存情况进行比较。结果肿瘤组织中Bcl-2、cFLIP阳性表达率分别为73.12%和68.82%,与癌旁组织和正常前列腺组织比较,差异具有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织Bcl-2、cFLIP阳性率与患者年龄、术前前列腺特异抗原水平无相关性(P>0.05),但与患者Gleason评分、肿瘤TNM分期,以及淋巴结转移、骨转移相关(P<0.05);前列腺癌组织Bcl-2及cFLIP蛋白阳性表达患者24个月生存率明显低于阴性表达患者(P<0.05)。结论Bcl-2、cFLIP蛋白在老年前列腺癌患者组织中高表达,且与患者临床病理特征和预后相关,可能作为老年前列腺癌的治疗靶点。 展开更多
关键词 老年前列腺癌 B淋巴细胞瘤-2蛋白 细胞flice抑制蛋白 预后
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抑制Akt活化对人结肠癌细胞c-FLIP基因表达的作用 被引量:2
5
作者 周晓东 陈红霞 +5 位作者 吕农华 朱萱 徐萍 陈幼祥 于红刚 于皆平 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第5期513-517,共5页
目的:探讨结肠癌细胞中抑制蛋白激酶B(PKB/Akt)的活化对c-FLIP基因表达的调控作用.方法:取对数生长期的HT-29细胞系,分别采用10、20和40nmol/L的Akt活化特异性抑制剂wortmannin对其进行干预,运用MTT法检测不同干预时间点的细胞增殖抑制... 目的:探讨结肠癌细胞中抑制蛋白激酶B(PKB/Akt)的活化对c-FLIP基因表达的调控作用.方法:取对数生长期的HT-29细胞系,分别采用10、20和40nmol/L的Akt活化特异性抑制剂wortmannin对其进行干预,运用MTT法检测不同干预时间点的细胞增殖抑制情况.采用40nmol/L的wortmannin干预HT-29细胞0,3,6,12,24h后,采用Westernblot检测磷酸化Akt和c-FLIP蛋白表达水平,逆转录PCR检测c-FLIP基因的转录水平.结果:三个浓度的wortmannin都对HT-29细胞的生长具有抑制作用,随着浓度、时间的递增,其抑制效应逐渐增强(P<0.01或0.05),而对照组未见明显变化(P>0.05).随着wortmannin的干预时间延长,磷酸化Akt蛋白的表达水平明显降低,同时c-FLIP蛋白的表达水平也随之下降,24h后二者表达水平分别下降了82%和91%.wortmannin干预HT-29细胞3h后,与对照组相比其c-FLIPmRNA表达水平已明显下降到40%,24h后其表达水平下降到25%.结论:Akt活化的特异性抑制剂wortmannin可抑制体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长,结肠癌中可能存在Akt/c-FLIP信号通路调节c-FLIP基因的表达. 展开更多
关键词 大肠癌 flice抑制蛋白 蛋白激酶B 基因表达
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去甲斑蝥素对U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响
6
作者 潘小涛 刘学成 +3 位作者 姚晶 何南 贾楠 赵良中 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期108-109,共2页
为了观察去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,试验将5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素与U937细胞共同培养48 h,采用MTT法测定细胞活性,应用免疫组织化学法检测细胞中细胞型FLICE抑制蛋白(cFLIP)、存活蛋白(survivin... 为了观察去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,试验将5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素与U937细胞共同培养48 h,采用MTT法测定细胞活性,应用免疫组织化学法检测细胞中细胞型FLICE抑制蛋白(cFLIP)、存活蛋白(survivin)以及胱天蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果表明:与阴性对照组比较,5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素组细胞活性下降(P<0.05或0.01);去甲斑蝥素显著抑制cFLIP和存活蛋白的阳性表达,促进胱天蛋白酶-3的阳性表达(P<0.05或0.01)。推测去甲斑蝥素可能通过下调cFLIP和存活蛋白的表达,上调胱天蛋白酶-3的表达诱导U937细胞凋亡。 展开更多
关键词 去甲斑蝥素(NCTD) U937细胞 细胞型flice抑制蛋白(cFLIP) 存活蛋白(survivin) 胱天 蛋白酶-3(caspase-3)
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KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
7
作者 马新廷 郝婷婷 +1 位作者 朱小飞 卢春 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2012年第1期1-8,共8页
目的:制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用... 目的:制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用于天然病毒vFLIP蛋白表达的检测。方法:对vFLIP蛋白抗原表位进行预测分析,设计并合成3条多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗vFLIP的多抗;以pCDH-vFLIP质粒为模板扩增vFLIP片段,插入到真核表达载体pEF-MCS-Flag-IRES/Puro中,构建pEF-vFLIP表达载体,利用脂质体将其转染HEK293T细胞,并在其中表达vFLIP。采用ELISA、蛋白质印迹法鉴定vFLIP多克隆抗体的效价及特异性,将该抗体用于天然病毒vFLIP的检测。结果:经限制性内切酶鉴定和核酸序列测定证实成功构建了重组质粒pEF-vFLIP,Flag抗体可以特异性识别该质粒在HEK293T和EA.hy926细胞内表达的vFLIP-flag融合蛋白。进一步的ELISA结果显示,制备的兔抗vFLIP多克隆抗体效价为1∶11 000以上。该抗体不但与HEK293T和EA.hy926细胞内表达的重组vFLIP-flag融合蛋白反应,而且能够特异性识别PEL细胞中天然的病毒vFLIP蛋白。结论:构建了含vFLIP基因的重组真核表达载体;采用人工合成肽作为半抗原制备的抗KSHV vFLIP多抗,可以成功地检测重组vFLIP蛋白和天然病毒蛋白。 展开更多
关键词 病毒flice抑制蛋白 合成肽 多克隆抗体 卡波济肉瘤相关疱疹病毒
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Expression of cellular FLICE-inhibitory protein and its association with p53 mutation in colon cancer 被引量:7
8
作者 Xiao-DongZhou Jie-PingYu +2 位作者 Hong-XiaChen Hong-GangYu He-ShengLuo 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第16期2482-2485,共4页
AIM: To investigate the expression of cellular FLICE (Fas associated death domain-like IL-lbeta-converting enzyme)-inhibitory protein (c-FLIP) and its association with p53 mutation in colon cancer. METHODS: Immunohist... AIM: To investigate the expression of cellular FLICE (Fas associated death domain-like IL-lbeta-converting enzyme)-inhibitory protein (c-FLIP) and its association with p53 mutation in colon cancer. METHODS: Immunohistochemical staining of c-FLIP and mutant p53 by using specific antibodies was performed by the standard streptavidin-peroxidase technique for 45 colon cancer tissue samples with matched normal tissues. Semi-quantitative reverse transcriptional (RT)-PCR was used to measure c-FLIP mRNA levels, t-test statistical method was used in data analyses. RESULTS: c-FLIP mRNA was expressed in all colon cancer tissues and its level (0.63±0.12) was significantly higher than that in normal tissues (0.38±0.10, P<0.01). Immuno-histochemically, c-FLIP protein was also expressed in all colon cancers (45/45) and 71.1% (32/45) showed an intense immunostaining, in contrast, 93.3% (42/45) of normal colonic mucosa showed positive staining and none of them immunostained intensely. The quantity of c-FLIP protein was significantly higher in cancer tissues than in normal mucosa (7.04±1.20 vs 5.21±0.86, P<0.01). Positive staining of mutant p53 protein was found in 60% (27/45) colon cancers. c-FLIP mRNA level was decreased in p53 positive group compared with p53 negative cancer tissues (0.59±0.13 vs0.69±0.14, P<0.01), but c-FLIP protein had a significantly higher level in p53 positive cancer tissues than in negative ones (7.57±1.30 vs6.25±1.27, P<0.01). CONCLUSION: c-FLIP is specially overexpressed in colon cancers and it might contribute to carcinogenesis of normal colonic mucosa. p53 may exert transcriptional upregulation effects on c-FLI P gene and more potent effects on promoting the degradation of c-FLIP protein. 展开更多
关键词 Cellular flice P53 Colon cancer
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cFLIP基因在子宫内膜腺癌组织中的表达 被引量:9
9
作者 陈红霞 刘元姣 +1 位作者 黎辉 王则胜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期254-258,共5页
背景与目的:细胞FLICE抑制蛋白(cellularFLICEinhibitoryprotein,cFLIP)是一种新发现的凋亡抑制因子,研究表明它在多种肿瘤中表达增高,对肿瘤的发生发展起重要作用。本研究检测cFLIP蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理特征和增... 背景与目的:细胞FLICE抑制蛋白(cellularFLICEinhibitoryprotein,cFLIP)是一种新发现的凋亡抑制因子,研究表明它在多种肿瘤中表达增高,对肿瘤的发生发展起重要作用。本研究检测cFLIP蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理特征和增殖细胞核抗原标记指数(proliferatingcellnuclearantigen-labelingindex,PCNA-LI)的关系,初步探讨cFLIP在子宫内膜腺癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学法检测cFLIP蛋白在42例子宫内膜腺癌、20例正常增生期子宫内膜和40例子宫内膜增殖症组织(其中伴和不伴不典型增生分别为10和30例)中的表达水平及子宫内膜腺癌中的PCNA-LI。结果:cFLIP蛋白在增生期子宫内膜、子宫内膜增殖症及子宫内膜腺癌中表达的阳性率分别为(55.0±11.4)%、(72.5±7.1)%和(83.3±5.8)%,经免疫组化染色半定量分析显示,cFLIP蛋白在子宫内膜腺癌中的表达水平显著高于增生期子宫内膜(P<0.01)和子宫内膜增殖症组织(P<0.05),而在后两种组织中其表达无统计学差异。子宫内膜腺癌cFLIP表达-、+、++、+++的各组中,PCNA标记指数分别为(12.01±2.07)%、(20.26±6.99)%、(27.10±3.01)%、(41.65±10.16)%,其与cFLIP表达水平密切相关(r=0.7471,P<0.01)。不同临床分期。 展开更多
关键词 cFLIP基因 子宫内膜腺癌 基因表达 CFLIP 细胞flice抑制蛋白 肿瘤
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大骨节病死亡受体途径调节因子表达的组织学改变 被引量:3
10
作者 武世勋 郭雄 +3 位作者 刘江涛 张增铁 Bannel S.Dennis 张银刚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1851-1854,共4页
目的观察大骨节病软骨组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)和细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达的变化,明确其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法将依据大骨节病和骨关节病诊断标准收集的软骨分为大骨节病组(KBD)、骨关节病组(OA)和正常对照... 目的观察大骨节病软骨组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)和细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达的变化,明确其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法将依据大骨节病和骨关节病诊断标准收集的软骨分为大骨节病组(KBD)、骨关节病组(OA)和正常对照组。采用免疫组化染色法检测3组关节软骨的死亡受体调节因子FADD和c-FLIP表达变化,并在显微镜下计数和比较3组关节软骨不同层间阳性表达率的显著性差异。结果(1)KBD和OA组软骨[分别为(28.68±2.19)%和(35.40±2.34)%]中层FADD表达显著较正常组增高(F=16.245,P=0.000),而在表、深层3组间均无显著差异(P=0.206,P=0.761);(2)FADD在KBD软骨中表达以中层最高,为(28.68±5.38)%,其次为深层的(17.94±8.38)%;(3)KBD和OA软骨表层FLIP表达均显著低于正常组(F=5.929,P=0.018),而中层和深层与正常组间均无显著差异。结论 KBD软骨中层FADD显著上调,而软骨表层FLIP表达显著下调,表明死亡受体途径及其调节因子在大骨节病软骨损伤中具有重要作用。 展开更多
关键词 大骨节病 死亡受体途径 FAS相关死亡结构域蛋白 flice抑制蛋白 免疫组化
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细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤 被引量:1
11
作者 刘滴 吴辉 +6 位作者 杨俊 杨简 丁家望 张静 李云曌 周刚 张栋 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期349-355,共7页
目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径,探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R... 目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径,探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion,I/R)模型,使用CCK-8检测各组心肌细胞活力,使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化,使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络,使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中,cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调,而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显地减轻心肌细胞H/R损伤、降低H/R诱导的细胞坏死率并缩小I/R导致的心肌梗死面积。STRING数据库结果显示cFLIP与RIPK1和RIPK3存在直接蛋白相互作用,在心肌细胞H/R损伤模型和心肌组织I/R模型中过表达cFLIP均可显著抑制了RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平。结论过表达cFLIP可显著抑制RIPK1/RIPK3/MLKL介导程序性坏死发生,从而减轻心肌细胞损伤并缩小心肌梗死面积。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 心肌缺血再灌注损伤 程序性坏死 细胞flice抑制蛋白
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cFLIP在大肠癌组织中的表达及意义 被引量:3
12
作者 高文超 孙延平 +4 位作者 阮灿平 徐昕昀 张军初 倪灿荣 王强 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第3期218-222,共5页
目的检测细胞型FLICE抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,初步探讨cFLIP在大肠癌发生、发展中的意义。方法用免疫组织化学法检测长型cFLIP(cFLIPL)在43例大肠... 目的检测细胞型FLICE抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,初步探讨cFLIP在大肠癌发生、发展中的意义。方法用免疫组织化学法检测长型cFLIP(cFLIPL)在43例大肠癌及配对的正常大肠黏膜组织中的表达,根据染色细胞的比例,计算每张切片的“平均积分”,比较cFLIPL在大肠癌及配对正常黏膜组织中表达的差异,以及在大肠癌不同病理特征情况下cFLIPL表达的差异。结果cFLIPL不同程度地表达于正常大肠黏膜及腺癌组织中。cFLIPL主要表达于正常大肠黏膜及大肠癌细胞的细胞质,阳性细胞呈弥漫性分布。正常黏膜的cFLIPL表达积分范围为0-2.95分,平均积分(1.55±0.86)分;4.7%(2/43)未染色,为阴性表达(积分为0),20.9%(9/43)呈现较弱染色,为弱阳性表达(0〈积分≤1),74.4%(32/43)为阳性表达(积分范围为1.00-2.95)。cFLIPL在所有大肠腺癌组织中表达,积分范围为0.80-4.00分,平均积分(3.06±0.75)分,62.8%(27/43)的肿瘤呈cFLIPL强阳性表达(积分〉3分),34.9%(15/43)的肿瘤呈阳性表达(1〈积分≤3),只有1例为弱阳性(积分为0.80分)。72.1%(31/43)的腺癌呈cFLIPL高表达,25.6%(11/43)的腺癌呈cFLIPL正常表达,2.3%(1/43)的腺癌呈cFLIPL低表达。大肠癌cFLIPL的表达水平明显高于配对的正常黏膜组织,差异有统计学意义(P〈0.01)。但肝癌组织中cFLIPL的表达水平与Dukes分期、肿瘤分期、大体类型、组织学分型、淋巴结转移及肝转移均无关(P〉0.05)。结论cFLIPL在大肠癌组织中比在正常大肠黏膜中更强烈表达,这可能是在大肠癌恶性转化与进展过程中肿瘤细胞逃避凋亡的体内机理之一。 展开更多
关键词 细胞型flice抑制蛋白 flice 大肠癌 免疫组织化学技术
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KSHV vFLIP在血管内皮细胞中的表达及其功能验证 被引量:1
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作者 金镠洋 严沁 卢春 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2014年第1期6-11,17,共7页
目的:构建含卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)基因的重组慢病毒表达载体,获得稳定表达vFLIP的人脐静脉内皮细胞株(human umbi... 目的:构建含卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)基因的重组慢病毒表达载体,获得稳定表达vFLIP的人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并检测vFLIP在HUVECs中活化NF-κB信号通路的能力。方法:以真核表达质粒pEF-vFLIP为模板扩增vFLIP基因,插入至慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green中构建重组质粒pHAGE-vFLIP。利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293 T细胞,收集过滤后的培养上清获得慢病毒悬液。利用梯度稀释法测定病毒滴度后,以一定感染复数的慢病毒感染HUVECs,通过蛋白质印迹法检测vFLIP的表达。经绿色荧光蛋白(GFP)流式分选以及蛋白质印迹法验证获得稳定表达vFLIP的HUVECs。最后,通过虫荧光素酶报告实验检测NF-κB的活性,免疫荧光染色检测NF-κB亚基p65的细胞定位,蛋白质印迹法检测IκBα蛋白的表达来评价稳定表达vFLIP蛋白的HUVECs功能。结果:核酸序列测定证实含vFLIP基因的慢病毒表达载体已构建成功。重组慢病毒感染HUVECs后可检测到vFLIP的表达。通过流式分选获得了稳定表达vFLIP的HUVECs细胞,并且能通过抑制IκBα的降解,阻碍p65入核来活化NF-κB,从而激活经典NF-κB信号通路。结论:成功包装了含KSHV vFLIP基因的重组慢病毒,并获得具有激活NF-κB信号通路功能、稳定表达vFLIP的HUVECs株。 展开更多
关键词 慢病毒 卡波氏肉瘤 病毒flice抑制蛋白 人脐静脉内皮细胞 核因子-ΚB
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cFLIP和caspase-8在犬胆道良性损伤修复过程中的表达 被引量:3
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作者 李可洲 骆乐 +2 位作者 姚豫桐 张晓 闫洪涛 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第8期773-778,共6页
目的:观察凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白(FLICE-like inhibitory protein,c-FLIP)及其下游凋亡因子caspase-8在胆道损伤愈合良性狭窄形成过程中的表达和定位.方法:建立胆管损伤后良性狭窄犬模型,利用采用免疫组织化学SABC法分别对15例犬... 目的:观察凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白(FLICE-like inhibitory protein,c-FLIP)及其下游凋亡因子caspase-8在胆道损伤愈合良性狭窄形成过程中的表达和定位.方法:建立胆管损伤后良性狭窄犬模型,利用采用免疫组织化学SABC法分别对15例犬胆道损伤后2、3、4、5、6mo及其配对的15例假手术组的吻合口组织中c-FLIP及caspase-8表达和定位进行分析,根据染色细胞的比例,计算每张切片的平均吸光度值,分别比较cFLIP及caspase-8在实验组及其配对的假手术组胆道吻合口组织表达的差异,及两组内不同时相之间c-FLIP及caspase-8在吻合口组织表达的差异.结果:c-FLIP蛋白于实验组内各时间点均呈阳性表达,定位于间质细胞,以成纤维细胞胞质最明显,各时间点内实验组与对照组比较有显著性差异(22.33±3.40vs3.41±0.69,21.01±5.43vs3.28±0.95,18.93±2.54vs3.11±1.01,18.88±3.40vs3.35±0.74,17.23±3.53vs3.19±0.91,均P<0.05),而各时间点之间无显著性差异(P>0.05).caspase-8于实验组各时相均呈现弱表达,定位以腺上皮居多,间质组织表达相对较弱,与配对之对照组比较均差异显著(3.20±0.86vs11.66±2.80,3.42±1.17vs10.16±3.08,3.65±0.90vs10.03±1.93,3.91±0.71vs10.90±4.02,4.01±0.88vs11.23±2.73,P<0.05),而各时间点之间亦无显著性差异(P>0.05).c-FLIP与caspase-8蛋白表达成负相关(r=-0.94,P<0.05).结论:cFLIP可能通过抑制caspase-8的激活在胆道良性狭窄形成过程中发挥了其抗凋亡的作用. 展开更多
关键词 胆道 免疫组织化学 凋亡 flice抑制蛋白 半胱氨酸特异性蛋白酶8
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抗凋亡蛋白cFLIP在山羊妊娠黄体中的表达 被引量:1
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作者 王延莉 娄安钢 +1 位作者 金花子 金海国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1622-1627,1634,共7页
为研究山羊妊娠黄体中抗凋亡蛋白,即细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-Like inhibitory protein,cFLIP)的表达,分析探讨cFLIP在维持山羊正常妊娠黄体中的作用。试验收集山羊不同妊娠阶段(19,31,92,142 d)的黄体组织,分别采用RT-PCR、... 为研究山羊妊娠黄体中抗凋亡蛋白,即细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-Like inhibitory protein,cFLIP)的表达,分析探讨cFLIP在维持山羊正常妊娠黄体中的作用。试验收集山羊不同妊娠阶段(19,31,92,142 d)的黄体组织,分别采用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学分析等方法,以确定cFLIP免疫定位,检测cFLIP mRNA及其蛋白在山羊不同妊娠阶段黄体中的表达水平;分别以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA和β-肌动蛋白(β-actin)作为内在对照。结果显示,cFLIP短链(cFLIP_S)和cFLIP长链(cFLIP_L)的mRNA及cFLIP_S蛋白在妊娠期各阶段的表达水平无显著性差异(P>0.05),而妊娠31d的cFLIP_L蛋白的表达水平却显著低于其他妊娠组(P<0.05);免疫染色结果显示,cFLIP蛋白的阳性反应在山羊妊娠不同阶段的黄体中均有高度表达;在妊娠19,92,142 d的黄体中均有观察到PCNA阳性,在妊娠31 d发现PCNA阳性较微弱;并且在所有妊娠组黄体中,几乎观察不到细胞凋亡(TUNEL阳性)。因此,推测cFLIP作为一种生存因子,参与维持山羊正常妊娠,其在妊娠黄体组织中的高水平表达可能在维持山羊正常妊娠中发挥抗凋亡作用。 展开更多
关键词 山羊 细胞flice抑制蛋白(cFLIP) 细胞凋亡 黄体 妊娠期
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重组变构型人TRAIL对肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制探讨
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作者 葛洋 严冬 +2 位作者 安广宇 陈文明 邓海腾 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期774-781,共8页
目的 :观察重组变构型人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant mutant human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,rmh TRAIL)对人肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用,验证与此凋亡相关的差异蛋白质表达谱。方法... 目的 :观察重组变构型人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant mutant human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,rmh TRAIL)对人肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用,验证与此凋亡相关的差异蛋白质表达谱。方法 :A549细胞经rmh TRAIL处理后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,FCM法检测细胞周期及细胞凋亡变化。采用液相色谱串联质谱(liquid chromatograph-tandem mass spectrometer,LC-MS/MS)鉴定技术对rmh TRAIL作用前后A549细胞的蛋白质组学进行对比分析,寻找差异表达明显的凋亡相关蛋白,然后用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证相关基因的表达水平。结果 :不同质量浓度的rmh TRAIL处理A549细胞24 h后,细胞增殖抑制率均显著提高(P值均<0.05),半数抑制浓度为(9.5±3.9)×105 ng/m L。5×105 ng/m L rmh TRAIL处理24 h可诱导A549细胞凋亡,早期凋亡率明显升高(P<0.01)。rmh TRAIL对细胞周期无明显影响。rmh TRAIL作用后,A549细胞中肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B,TNFRSF10B)和TNFRSF10D表达水平分别下调至21.3%和31.8%,细胞FLICE抑制蛋白(cellular FLICEinhibitory protein,c-FLIP)表达水平上调至2.867倍。实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果证实,用药后作为TNFRSF成员之一的小分子死亡受体5(death receptor-5,DR5)的m RNA和蛋白表达均明显下调(P值均<0.05),而c-FLIP m RNA和蛋白表达则明显上调(P值均<0.05)。结论 :rmh TRAIL可诱导A549细胞凋亡,其原因可能与DR5表达下调及c-FLIP表达上调有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺 细胞凋亡 TNF相关凋亡诱导配体 受体 肿瘤坏死因子 细胞flice抑制蛋白 死亡受体5
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卡波西肉瘤相关疱疹病毒编码vFLIP基因真核表达载体的构建
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作者 郑嵘炅 万学峰 +6 位作者 潘珂君 买买提艾力.吾不力 黄琳琳 马锐 揭方荣 张跃新 鲁晓擘 《中国病毒病杂志》 CAS 2017年第5期350-353,共4页
目的构建卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)真核表达载体,并转染入293T细胞中进行表达鉴定。方法据GenBank中KSHV编码vFLIP基因... 目的构建卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)真核表达载体,并转染入293T细胞中进行表达鉴定。方法据GenBank中KSHV编码vFLIP基因核苷酸序列人工化学合成"vFLIP"的碱基序列,在5′端下添加XhoI酶切位点,3′端添加BamHI酶切位点,合成的碱基序列经酶切克隆进真核载体GV144,经双酶切和测序验证,成功构建G-vFLIP真核表达载体,将该质粒转染293T细胞,通过转染后细胞内荧光蛋白的表达和实时荧光定量PCR鉴定转染后KSHV-vFLIP在胞内的表达。结果通过对构建质粒限制性内切酶产物进行基因测序证实成功构建了携带vFLIP基因的真核表达载体G-vFLIP,G-vFLIP真核表达载体转染293T细胞,24h后在荧光显微镜可观察到细胞表达绿色荧光,提取细胞总RNA进行逆转录,293T细胞中G-vFLIP组vFLIP mRNA的表达水平是GV144组的9 355 080.705倍(P<0.05)。结论成功构建了KSHV-vFLIP真核表达载体,转染后在293T细胞中初步获得表达。 展开更多
关键词 卡波西肉瘤 卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV) 病毒flice抑制蛋白(vFLIP) 真核表达载体
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核因子-κB在滇南小耳猪胆道损伤修复模型中表达的研究
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作者 胡平海 李立 《中国实用外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第S1期26-28,共3页
目的分析核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白(cFLIP)在胆道瘢痕中的表达情况。方法建立滇南小耳猪胆道损伤修复模型并建立对照组。用免疫组化分析NF-κB及cFLIP的表达范围及强度。结果和... 目的分析核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白(cFLIP)在胆道瘢痕中的表达情况。方法建立滇南小耳猪胆道损伤修复模型并建立对照组。用免疫组化分析NF-κB及cFLIP的表达范围及强度。结果和对照组相比,胆道瘢痕组织中NF-κB及cFLIP表达的范围更广,强度更强,更多的集中于成纤维细胞中,且两者表现出正相关关系。结论胆道损伤后NF-κB激活增加并导致cFLIP蛋白过表达,可能导致胆道成纤维细胞凋亡减少,从而导致胆道瘢痕的形成。 展开更多
关键词 细胞核因子(NF-κB) caspase-8同源结构flice抑制蛋白(cFLIP) 胆管成纤维细胞
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胆管损伤后良性狭窄形成过程中c-FLIP的表达及意义 被引量:2
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作者 骆乐 李可洲 +4 位作者 姚豫桐 闫洪涛 骆助林 荣成 张晓 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2010年第3期253-257,共5页
目的观察凋亡抑制因子人类细胞同源FLICE样抑制蛋白(cellular homolog FLICE-like inhibitoryprotein,c-FLIP)在胆管良性狭窄形成过程中的表达和定位情况,并探讨其意义。方法利用原位杂交法分别对15只犬(实验组)胆管损伤后2、3、4、5、... 目的观察凋亡抑制因子人类细胞同源FLICE样抑制蛋白(cellular homolog FLICE-like inhibitoryprotein,c-FLIP)在胆管良性狭窄形成过程中的表达和定位情况,并探讨其意义。方法利用原位杂交法分别对15只犬(实验组)胆管损伤后2、3、4、5、6个月及其配对的15只假手术组犬的吻合口组织中c-FLIP表达和定位情况进行分析,计算每张切片的平均积分光密度值,分别比较c-FLIP在实验组及其配对的假手术组的胆道吻合口间质组织与腺体组织中表达的差异。结果实验组各时相的间质组织中c-FLIP均呈强阳性表达,以纤维细胞胞浆表达为主,而腺体组织很少表达或几乎无表达;在相应时相的间质组织中的表达明显强于在腺体组织中的表达(P<0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P>0.05)。假手术组各时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP均呈弱阳性表达;在相应时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP表达差异无统计学意义(P>0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P>0.05)。c-FLIP在实验组间质组织中的表达明显强于相应时相的假手术组(P<0.05);而c-FLIP在腺体组织中的表达2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论胆管损伤后,吻合口间质组织内的c-FLIP呈持续表达状态,由此所造成的细胞凋亡持续受阻效应可能与胆管良性狭窄的形成关系密切。 展开更多
关键词 胆管良性狭窄 人类细胞同源flice抑制蛋白 间质组织 腺体组织 凋亡 表达
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