原发性肾透明细胞癌中转移相关基因CD99、FKBP5和FLJ13576的表达

目的:探讨肿瘤转移相关分子CD99、FKBP5、FLJ13576在原发性肾透明细胞癌中的表达。方法:应用半定量RT-PCR技术研究肿瘤转移相关分子CD99、FKBP5、FLJ13576在肾透明细胞癌组织和癌旁组织中的差异性表达。结果:CD99、FKBP5、FLJ13576在原发性肾透明细胞癌组织中的表达率分别为72%、60%和48%,而对应癌旁组织中的表达率分别为28%、24%和16%,表达水平也明显不同。肾透明细胞癌组织中CD99、FKBP5和FLJ13576 3种基因的表达水平均显著高于癌周组织(P<0.05)。结论:肿瘤转移相关分子CD99、FKBP5、FLJ13576在肾透明细胞癌原发组织中的表达明显上调,可能与肾细胞癌发生、发展密切相关,有望成为检测肾细胞癌的新的生物学标志。

过表达FLJ22349促进人胚胎肾细胞HEK293及乳腺癌细胞MCF-7的生长

目的:人假想蛋白FLJ22349基因位于染色体22q13.2上,编码一个229个氨基酸的蛋白。表达谱分析发现多种肿瘤组织中有FLJ22349的表达,预测该基因可能与肿瘤的发生发展有密切关系。本研究旨在用生物信息学方法分析FLJ22349的结构和功能,并初步研究FLJ22349在HEK293及乳腺癌细胞中的作用。方法:运用各种生物信息学数据库初步分析FLJ22349的结构和功能。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析FLJ22349基因在小鼠正常组织,人癌症细胞株及HEK293中的表达情况。将载有FLJ22349的基因的质粒转染入HEK293,MCF-7,MDA-MB231中,观察该基因的亚细胞定位。MTT检测细胞的生长变化。结果:FLJ22349基因在人类、猩猩、恒河猴、褐家鼠、小鼠和狗中有很高的同源性,但与其它已知的基因无同源性。小鼠正常组织中有FLJ22349表达;乳腺癌细胞株MDA-MB231,肝癌细胞株Bel-7402也有表达;主要定位于细胞核;转染FLJ22349的HEK293,MCF-7细胞株生长曲线显示促进细胞生长(P<0.05)。FLJ22349转染120h后,MTT实验观察到HEK293,MCF-7细胞的增殖率分别为299%,456%;而对照组分别为233%,272%。结论:FLJ22349基因过表达促进HEK293和MCF-7细胞的生长。

RNAi非特异效应的干扰素反应探讨

背景与目的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项针对转录后特异序列基因沉默的技术,可用于调控基因表达和研究基因功能。但该技术引发的非特异效应也越来越受到重视。其中,干扰素反应为RNAi非特异效应的主要类型之一。本文拟探讨在RNA干扰实验中干扰素反应的检测。方法在A549人肺癌细胞株中应用基因转染技术研究5个不同的FLJ20420 siRNA对FLJ20420基因沉默情况;应用real-time PCR和基因芯片技术相结合,分别检测经2个不同FLJ20420-siRNA干扰后A549细胞中干扰素激活基因(ISGs)表达谱的变化情况。结果①在A549细胞中,5个不同的FLJ20420-siRNA可不同程度地对目的基因起到沉默作用,其中FLJ20420-siRNA-1和FLJ20420-siRNA-4两个的沉默效果最佳,分别为80%和90%;②应用real-timePCR检测与干扰素反应激活相关的16个主要标志性基因发现,A549-FLJ-siRNA-1细胞中有14个基因的表达明显上调;而A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有2个基因的表达变化差异具有显著性,提示在A549-FLJ-siRNA-1细胞中发生了RNAi的非特异性效应;③基因芯片分析发现在A549-FLJ-siRNA-1细胞中有51个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),而在A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有6个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),从而证实了A549-FLJ-siRNA-1细胞中存在RNAi的非特异性效应干扰素反应。结论在进行RNAi实验时,siRNA不仅能针对目的基因产生沉默效果,也可同时诱发干扰素反应。应用real-time PCR对于主要的干扰素激活基因(ISGs)的mRNA表达变化的检测将有助于发现RNAi非特异效应干扰素反应。

人类新基因flj20174的克隆、亚细胞定位、表达谱及功能初探

目的:研究人类系统性RNA i相关基因flj20174的克隆表达、亚细胞定位和表达谱,以及功能的初步探索。方法:利用生物信息学方法分析、预测flj20174基因的表达谱和功能;采用RT-PCR技术,从健康人外周血单个核细胞cDNA中,扩增获得flj20174可能的全长编码区,并将其亚克隆于pEGFP-N1载体;利用Northern杂交鉴定其转录本;利用半定量PCR确定flj20174在免疫组织和免疫细胞中的表达谱;通过脂质体转染入HeLa细胞,观察融合蛋白的亚细胞定位和过表达对细胞状态的影响。结果与结论:获得了2 484 bp的全长编码区,测序后发现与NCB I公布的Ak00018的序列完全一致;Northern杂交证实其转录本约为4 669 bp;证实该基因属于低丰度基因,在免疫细胞中有相对较高的表达,并在B细胞和T细胞激活后表达量下降;与EGFP融合表达后可见该蛋白主要分布于内膜系统,而且过表达该融合蛋白可以引起细胞的死亡,推测此过程可能与机体的免疫防御相关。

DOG1与胃肠道间质瘤关系的研究进展

FLJ10261(TEME16A)是新近发现的与胃肠道间质瘤(GISTs)关系密切的一个基因,由该基因编码的蛋白质DOG1,特异性表达于GISTs中,免疫组化及原位杂交证实,其阳性表达较KIT和PDGFRA更弥漫、更具有特异性,因此可能作为胃肠道间质瘤治疗的另一个靶点。笔者对DOG1与GISTs关系的研究进展进行综述。