龙眼FLO/LFY同源基因cDNA片段的克隆

根据不同植物FLO LFY同源基因3′端保守序列,设计简并引物,运用RT＿PCR技术在龙眼花芽总RNA中扩增得到长度为408bp的cDNA片段,命名为lonFLO。序列分析表明,该片段与金鱼草FLO、苹果AFL2、AFL1、拟南芥LFY有较高的核苷酸同源性,分别达98 8%,81 6%,81 1%和76 2%。

马尾松FLO/LFY基因的克隆及其功能分析

FLO/LFY及其同源基因是控制花分生组织形成和开花时间的基因之一。本研究通过反转录PCR克隆技术和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从马尾松中分离得到了PmLFY和PmNLY两条FLO/LFY基因的cDNA序列。两条序列均包含完整的编码区与"5'端"和3'非翻译区,长度分别为1 555 bp和1 236 bp,对应的编码氨基酸长度是411 aa和310 aa。序列分析发现PmLFY和PmNLY两个蛋白均属FLO/LFY蛋白;分别有13和11个丝氨酸激酶位点。对PmLFY和PmNLY两个蛋白与其他物种的FLO/LFY蛋白构建进化树,发现PmLFY蛋白与辐射松最为接近,与加勒比松、挪威云杉等较为接近,属同一分支;PmNLY蛋白只存在于裸子植物之间,与辐射松,华山松等松科关系较近,但与PmLFY分化较明显;裸子植物之间LFY-like与NLY-like分化十分明显,裸子植物的NLY蛋白与被子植物的FLO/LFY更为接近。通过组织特异性分析发现,PmLFY和PmNLY主要集中在冬芽中表达,且在侧芽的表达量高于顶芽,分别相对于顶芽表达量的1.8和1.3倍。研究结果为进一步分析马尾松FLO/LFY的功能和开花作用机制奠定了基础。

水龙骨目部分植物FLO/LFY同源基因内含子与系统进化分析

为了探讨水龙骨目FLO/LFY同源基因的分子遗传与进化关系。本研究通过PCR技术获得水龙骨目(Polypodiales)13科14种蕨类植物FLO/LFY同源基因全长DNA序列。与肾蕨(Nephrolepis auriculata)和荚果蕨(Matteuccia struthiopteris)LFY同源基因DNA全长序列相结合,对水龙骨目FLO/LFY同源基因序列进行比较分析。结果表明:每个FLO/LFY同源基因DNA全长序列均含3外显子和2内含子,其第一内含子和第二内含子长短不同,差异明显。与其他蕨类植物中的FLO/LFY同源基因的同源性较高(72.13%~95.20%)。此外,用FLO/LFY同源基因的氨基酸序列、第一内含子序列和第二内含子序列构建蕨类植物的系统进化树。结果表明:由FLO/LFY同源基因第一内含子序列构建的系统进化树能正确反映水龙骨目科间的系统进化关系,与传统形态学的分类系统和分子系统学的分类系统较一致,更适合蕨类植物FLO/LFY同源基因系统进化树的构建。