RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine TM 2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P<0.05 )。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

水牛浮舰蛋白2基因克隆及序列分析

试验旨在克隆水牛浮舰蛋白2(Flotillin 2,FLOT2)基因并对其进行生物信息学分析,为揭示该基因在水牛发育繁殖中的作用奠定基础。本研究通过PCR扩增获得了FLOT2基因全长并进行克隆测序,结合生物信息学分析方法,预测及分析其蛋白质结构。结果表明,水牛FLOT2基因编码区长1 287bp,编码428个氨基酸,3′UTR区长277bp。多重序列比较分析显示,水牛FLOT2基因核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、小鼠、马、猫和人相应序列的相似性分别为98%、98%、97%、90%、93%、92%和92%,系统进化树分析结果表明,FLOT2基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。对FLOT2蛋白质的分析表明,该蛋白呈弱酸性,无信号肽,细胞亚定位于细胞质中,存在SPFH_flotillin和SPFH_hflk等结构域。microRNA预测结果表明,bta-miR-2438、bta-miR-2379和bta-miR-1777a可能是其3′UTR潜在靶标。研究结果为今后阐明FLOT2基因在水牛繁殖性能中的功能,尤其是在配子及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了基础。

慢病毒介导的 FLOT 2基因沉默影响结肠癌细胞生物学功能的影响及机制

目的构建干扰FLOT2表达的慢病毒载体,探讨抑制FLOT2表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法通过qRT-PCR检测结直肠癌组织及人结肠癌LoVo、SW480及HT29细胞FLOT2的表达水平,Western blot检测结肠癌细胞FLOT2表达。将含FLOT2 siRNA的慢病毒载体转染结肠癌LoVo细胞和SW480细胞。采用qRT-PCR及Western blot检测转染后的细胞FLOT2表达。MTT法、流式细胞术、Transwell小室、Western blot分别检测细胞增殖能力、凋亡率、侵袭迁移能力及PCNA、cleaved caspase3、E-cadherin和Vimentin蛋白水平。结果结直肠癌组织FLOT2 mRNA表达水平明显高于癌旁组织,三个结肠癌细胞FLOT2 mRNA及蛋白水平均明显高于在正常结肠上皮细胞NCM460(P<0.05)。LoVo细胞和SW480细胞转染FLOT2 siRNA慢病毒载体后,FLOT2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低,且可明显降低细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡,下调PCNA和Vimentin表达,上调cleaved caspase3和E-cadherin(P<0.05)。结论抑制FLOT2表达可明显降低结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡,其机制可能与调节PCNA、cleaved caspase3、E-cadherin和Vimentin表达有关。