黄芪中新型FLT3受体相互作用凝集素的生物学活性分析

目的：从黄芪中提取、纯化Fms样酪氨酸激酶3（FLT3）受体相互作用凝集素（FRIL）,分析鉴定其生物学活性。方法：采用亲和层析方法纯化黄芪水浸粗提物,用BCA蛋白测定法测定FRIL含量,糖抑制红细胞凝集实验鉴定FRIL与糖结合的生化特性;培养Raji细胞,分为对照组和20及40mg·L^-1FRIL组;培养FLT3受体高表达细胞株HL-60细胞,分别设置对照组和2.5、5.0、10.0、20.0、40.0mg·L^-1 FRIL组;流式细胞术和MTT法分别检测FRIL对Raji细胞和HL-60细胞的增殖作用。结果：从黄芪中分离得到含有4个亚基的凝集素FRIL达到27mg;FRIL主要与α-D-甘露糖有很高的亲和性,证实FRIL能与糖专一性结合具有凝集素活性;40mg·L^-1 FRIL组Raji细胞凋亡率明显低于20 mg·L^-1 FRIL组（P〈0.01）;与对照组比较,5.0-40.0mg·L^-1FRIL组HL-60细胞体外增殖活性增加（P〈0.05）。结论：成功从黄芪中分离得到具有凝集素活性的FRIL蛋白,对表达FLT3受体的细胞具有刺激增殖作用。

黄秋葵果胶与半乳糖凝集素-3相互作用的研究

采用DEAE-纤维素柱层析对黄秋葵果胶进行分离纯化,得到不同结构特征的果胶组分,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化HPLC法和HPGPC对分离纯化的果胶组分进行单糖组成分析和分子量分布进行分析,采用半乳糖凝集素-3诱导的红细胞凝集实验和竞争性荧光酶联免疫法研究不同结构特征的黄秋葵果胶组分抑制半乳糖凝集素-3活性的情况。结果表明,黄秋葵果胶经DEAE-纤维素柱层析分级后得到AEP-1和AEP-2 2个产物,均主要由鼠李糖、半乳糖醛酸和半乳糖构成,分子量分别约为380和130 k Da;半乳糖凝集素-3诱导的红细胞凝集实验和竞争性荧光酶联免疫法的实验结果均表明,AEP-2具有较强的抑制半乳糖凝集素-3的活性,初步阐释了黄秋葵抗肿瘤活性的机理,将促进黄秋葵深度开发利用。

凝集素修饰的Fe_2O_3@Au纳米粒子与SW620细胞的相互作用研究

首先采用共沉淀法及交互盐酸羟胺还原法制备Fe_2O_3@Au核壳结构纳米粒子,利用凝集素修饰纳米粒子(Lectin-Fe_2O_3@Au NP),然后通过动态光散射(DLS)/聚丙烯酰胺凝胶电泳/磁滞回曲线进行表征。利用MTT法测纳米粒子的细胞毒性,将不同浓度的Lectin-Fe_2O_3@Au与结直肠癌SW620细胞相互作用,普鲁士蓝进行染色,使用紫外可见光谱法(UV-Vis)和光学显微镜进行观察。结果表明凝集素修饰的纳米粒子在细胞培养基中能够稳定存在,当纳米粒子浓度为0.72 n M时,结直肠癌SW620细胞的存活率仍高于90%,其作用强度依次为蓖麻凝集素(RCA)-Fe_2O_3@Au>麦胚凝集素(WGA)-Fe_2O_3@Au>伴刀豆素(Con A)-Fe_2O_3@Au,经过普鲁士蓝染色的细胞可以观察到RCA-Fe_2O_3@Au纳米粒子的存在,表明凝集素RCA具有作为修饰纳米粒子与结直肠癌SW620细胞靶向识别的潜力。

半乳糖凝集素3在乳腺癌中的表达及与人表皮生长因子受体2的关系

目的:研究半乳糖凝集素3(Galectin-3)在乳腺浸润性导管癌中的表达情况,探讨其与乳腺癌临床病理参数及人表皮生长因子受体2(Her-2)之间的关系。方法:收集70例乳腺浸润性导管癌组织,采用免疫组织化学法检测标本中Galectin-3、Her-2表达水平,对于Her-2 2+的组织进行荧光原位杂交检测。分析Galectin-3的表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、组织学分级、临床分期及Her-2的关系。结果:在不同年龄及肿瘤大小的乳腺癌组织中Galectin-3阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。淋巴结阳性组Galectin-3的阳性率高于淋巴结阴性组(P<0.05);在不同组织分化程度及临床分期间Galectin-3的阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中Galectin-3阳性率高于Her-2阳性率(P<0.05)。结论:Galectin-3在乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移过程中发挥重要作用。检测乳腺癌组织中Galectin-3表达情况,有助于对肿瘤恶性程度及预后的判断,可能成为指导临床治疗的靶向指标之一。

半乳糖凝集素-3和盘状结构域受体1在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3和盘状结构域受体(DDR)1在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测67例食管鳞癌组织中Galectin-3和DDR1蛋白表达,并分析二者与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果正常食管组织中Galectin-3和DDR1蛋白表达率分别为13.43%(9/67)和16.42%(11/67),食管鳞癌组织中Galectin-3和DDR1蛋白表达率分别为76.12%(51/67)和73.13%(49/67),Galectin-3和DDR1在食管鳞癌组织中的表达均显著高于正常食管组织(P<0.05),二者表达呈正相关(r=0.486,P=0.001)。Galectin-3和DDR1蛋白表达均与食管鳞癌的TNM分期,分化程度,浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中Galectin-3和DDR1蛋白呈高表达,与食管鳞癌的发生、发展及生物学行为密切相关。

基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21(DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。

酒精性心肌病大鼠模型中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达与细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3表达关系研究

目的:分析酒精性心肌病(ACM)大鼠模型中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达情况及与细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3表达量变化的相关性。方法:选用2周龄的健康雄性SD大鼠9只,随机分为三组:(1)正常对照组(Blank组);(2)酒精性心肌病组(ACM组);(3)酒精性心肌病+shRNA干预组(ACM+shRNA组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分别在基因及蛋白水平检测LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量并采用Pearson检验分析其相关性。结果:与Blank组相比,ACM组心肌组织中LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量显著增加(P<0.01);与ACM组比较,ACM+shRNA组心肌组织中LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量明显减少(均P<0.01);相关性分析提示LOX-1的表达量与Bax、Cleaved caspase-3的表达量呈正相关(r=0.323、0.370,均P<0.05)。结论:酒精性心肌病大鼠模型心肌组织中LOX-1的表达量升高,且与Bax、Cleaved caspase-3的表达量呈正相关;LOX-1可能通过上调Bax、Cleaved caspase-3的表达参与酒精诱导心肌细胞凋亡的过程。

可溶性ST2和半乳糖凝集素-3水平与室间隔心肌切除术后肥厚型梗阻性心肌病患者预后的相关性分析

目的:探讨可溶性ST2(s ST2)和半乳糖凝集素-3(Gal-3)水平与室间隔心肌切除术后肥厚型梗阻性心肌病(HOCM)患者临床预后的相关性。方法:纳入2011-03至2016-02期间在中国医学科学院阜外医院行改良Morrow手术的HOCM患者200例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血浆s ST2与Gal-3水平。根据血浆s ST2水平进行三分位数分组:低s ST2组(<9.05 ng/ml)、中s ST2组(9.05~16.74 ng/ml)及高s ST2组(>16.74 ng/ml);根据血浆Gal-3水平进行三分位数分组:低Gal-3组(<6.19 ng/ml)、中Gal-3组(6.19~8.22 ng/ml)、高Gal-3组(>8.22 ng/ml)。另外收集了42例无心脏疾病的志愿者血液样本作为正常对照,并按照性别和年龄匹配了42例HOCM患者,比较两者血浆中sS T2与Gal-3水平的差异。使用Cox回归模型评估血浆sS T2和Gal-3水平对主要终点事件(全因死亡或心血管住院)的预测价值。结果:ELISA分析结果表明,与正常对照者相比,HOCM患者的血浆s ST2和Gal-3水平显著升高(P均<0.01)。中位随访26个月时,Kaplan-Meier生存分析显示,血浆s ST2及Gal-3不同水平组的复合终点事件发生率均无明显差异(log-rank P分别为0.06和0.68)。Cox回归分析表明,血浆sS T2和Gal-3水平都不能独立预测终点事件(P均>0.05),而年龄是复合终点事件的独立危险因素(HR=1.06,95%CI:1.02~1.11,P<0.01)。结论:尽管HOCM患者的血浆sS T2与Gal-3水平升高,但血浆sS T2和Gal-3水平与心肌切除术后HOCM患者临床预后无关。年龄增长是室间隔心肌切除术后HOCM患者全因死亡及心血管事件住院的复合终点事件的独立预测因子。

新的豆类凝集素FRIL及其体外维持造血干/祖细胞特性的作用机制

凝集素是一类蛋白质或糖蛋白。自然界中 ,很多植物可产生凝集素。植物凝集素在分子间的识别过程中起着重要作用。本文主要就新近发现的豆类凝集素FRIL的生物学特性及体外维持造血干

半乳糖凝集素3对肺癌细胞生物学行为和免疫相关因子的影响及可能机制

目的探讨半乳糖凝集素3(Gal-3)对肺癌细胞生物学行为及免疫相关因子的影响,并基于Notch信号通路分析其可能的作用机制。方法将A549细胞分为4组:对照组、Gal-3组、LY450139组、Gal-3+LY450139组。对照组转染阴性对照质粒,Gal-3组转染Gal-3过表达质粒,LY450139组给予终浓度为20 nmol/L的Notch信号通路抑制剂LY450139处理,Gal-3+LY450139组给予转染Gal-3过表达质粒和终浓度为20 nmol/L的LY450139处理。采用Western blot检测4组A549细胞Gal-3和Notch受体1(NOTCH1)蛋白表达水平。采用CCK-8法检测4组A549细胞增殖活力。采用流式细胞术检测4组A549细胞凋亡率。采用Transwell法检测4组A549细胞侵袭能力。采用实时荧光定量PCR法检测白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达水平。结果Gal-3组细胞的Gal-3和NOTCH1蛋白表达水平、增殖活力、侵袭能力、IL-6和TGF-β1 mRNA表达水平高于对照组,而凋亡率低于对照组(均P<0.05);LY450139组细胞的NOTCH1蛋白表达水平、增殖活力、侵袭能力、IL-6和TGF-β1 mRNA水平低于对照组,而凋亡率高于对照组(均P<0.05);Gal-3+LY450139组细胞的NOTCH1蛋白水平、增殖活力、侵袭能力、IL-6和TGF-β1 mRNA水平低于Gal-3组,但高于LY450139组,而凋亡率高于Gal-3组,但低于LY450139组(均P<0.05)。结论Gal-3可通过调控Notch信号通路来增强肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并促进免疫相关因子IL-6和TGF-β1的表达。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1通过糖原合成酶激酶-3β/信号转导和转录激活因子3通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

目的 探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)通过糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的相关机制。方法 分离、培养及鉴定CFs,构建LOX-1 RNAi慢病毒载体(LV-LOX-1)及慢病毒空载体(LV-Con)并感染CFs。将细胞分为正常对照(NC)组、25 mmol/L葡萄糖的高糖(HG)组、高渗(HPG)组、LV-LOX-1组和LV-Con组,LV-LOX-1及LV-Con感染CFs后加入HG培养24h,记为HG+LV-LOX-1组和HG+LV-Con组,分别使用10μmol/LSB216763和10μmol/L STATTIC处理HG+LV-LOX-1、HG+LV-Con组24h,记为HG+LV-LOX-1+SB216763组、HG+LV-Con+SB216763组、HG+LV-LOX-1+STATTIC组和HG+LV-Con+STATTIC组。CCK-8法检测CFs活力,q RT-PCR和Western blot法检测LOX-1、I型胶原(COL-I)、硫氧还蛋白5(TXNDC5)、GSK-3β、STAT3、p-GSK-3β、p-STAT3 mRNA和蛋白表达。结果 获得LV-LOX-1感染的CFs,荧光显微镜下呈绿色。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组LOX-1、COL-I、TXNDC5m RNA表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组COL-I、TXNDC5 mRNA表达降低(P<0.05)。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),LOX-1、p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LOX-1、GSK-3β、STAT3、TXNDC5、COL-I参与高糖诱导的CFs纤维化,LOX-1通过GSK-3β/STAT3通路促进TXNDC5和COL-I表达,抑制LOX-1可抑制高糖诱导的CFs纤维化。

超声心动图联合血清β_(1)-ARAb、Galectin-3及Apelin诊断肥厚型心肌病的临床价值

目的:分析超声心动图联合血清β_(1)-肾上腺素能受体抗体(β_(1)-ARAb)、重组人半乳糖凝集素3(Galectin-3)及爱帕琳肽(Apelin)诊断肥厚型心肌病(HCM)的临床价值。方法:选取2019年7月—2022年6月我院收治的HCM病人50例作为观察组,选取同期于我院体检且无室壁增厚及其他心脏疾病病人50例作为对照组。两组均行超声检查,并检测血清β_(1)-ARAb、Galectin-3及Apelin。观察两组左射血分数(LVEF)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)及每搏输出量(SV)等心功能指标;血清β_(1)-ARAb、Galectin-3及Apelin水平;观察组病人左室壁肥厚分度情况;观察组左室壁不同厚度病人心功能指标及血清β_(1)-ARAb、Galectin-3、Apelin水平。分析观察组心功能指标及血清β_(1)-ARAb、Galectin-3、Apelin水平与左室壁厚度的相关性。结果:观察组LVEF、LVESV、LVEDV、SV及血清Apelin水平均低于对照组,血清β_(1)-ARAb、Galectin-3高于对照组(P<0.05)。观察组左室壁轻度肥厚病人10例(20.00%),中度肥厚病人32例(64.00%),重度肥厚病人8例(16.00%)。观察组不同左室壁肥厚病人LVEF、LVESV、LVEDV、SV及血清β_(1)-ARAb、Galectin-3、Apelin水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度肥厚组LVEF、LVESV、LVEDV、SV及血清Apelin水平均高于中度肥厚组、重度肥厚组,血清β_(1)-ARAb、Galectin-3水平均低于中度肥厚组、重度肥厚组(P<0.05)。中度肥厚组LVEF、LVESV、LVEDV、SV及血清Apelin水平均高于重度肥厚组,血清β_(1)-ARAb、Galectin-3水平均低于重度肥厚组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清β_(1)-ARAb、Galectin-3水平与左室壁肥厚分度呈正相关,LVEF、LVESV、LVEDV、SV及血清Apelin水平与左室壁肥厚分度呈负相关(P<0.05)。结论:超声心动图联合血清β_(1)-ARAb、Galectin-3及Apelin对HCM的诊断有较高的临床价值。

藏红花素对膝关节骨性关节炎大鼠的治疗作用及TXNIP/NLRP3信号通路的影响

目的探究藏红花素对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠的治疗作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号通路的影响。方法构建KOA大鼠模型,48只大鼠建模成功随机分为模型组,藏红花素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,硫酸氨基葡萄糖(170 mg/kg)组,每组12只。另取12只作为假手术组(实验过程中仅打开关节腔不做其他处理)。各组给予对应药物灌胃28 d,1次/d。酶联免疫吸附试验检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠软骨组织病理学变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测大鼠软骨组织中MDA、SOD水平;荧光定量-聚合酶链反应(PCR)法检测软骨组织中TXNIP、NLRP3信使RNA(mRNA)水平;Western印迹检测软骨组织中TXNIP、NLRP3蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组软骨组织表面不光滑且滑膜增生,软骨细胞紊乱且减少,同时有大量炎性细胞浸润,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,藏红花素低、高剂量组软骨组织病理变化依次改善,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织SOD水平显著升高(P<0.05);硫酸氨基葡萄糖组和藏红花素高剂量组软骨组织病理变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论藏红花素可减轻KOA大鼠软骨损伤,改善炎症和氧化应激反应,其机制可能与抑制TXNIP/NLRP3信号通路相关。

FGF23、Gal-3、Toll样受体4在慢性心力衰竭患者中的表达及意义

目的研究人成纤维细胞生长因子23(FGF23)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Toll样受体4(TLR-4)在慢性心力衰竭患者中的表达及临床意义。方法选取收治的慢性心力衰竭患者80例作为慢性心力衰竭组,另外选取同期行健康体检的健康志愿者80例作为健康对照组。抽取所有研究对象清晨空腹肘部静脉血3mL,分离上层血清,另外清晨空腹肘部静脉血3mL,提取单核细胞。采用酶联免疫吸附试验法检测两组研究对象血清FGF23、Gal-3表达水平采用NAVIOS流式细胞仪检测两组研究对象外周血单核细胞中TLR-4蛋白表达量,并作慢性心力衰竭预后随访。结果FGF23、Gal-3、TLR-4在慢性心力衰竭组中的表达高于健康对照组(P<0.05)。FGF23、Gal-3、TLR-4在NYHA心功能分级为Ⅲ级、Ⅳ级慢性心力衰竭患者中的表达高于Ⅰ级/Ⅱ级(P<0.05);FGF23、Gal-3、TLR-4在NYHA心功能分级Ⅳ级慢性心力衰竭患者中的表达高于Ⅲ级(P<0.05)。FGF23、Gal-3、TLR-4在预后再次入院慢性心力衰竭患者中的表达高于预后未再次入院患者(P<0.05)。FGF23、Gal-3、TLR-4预后死亡慢性心力衰竭患者中的表达高于预后存活患者(P<0.05)。FGF23、Gal-3、TLR-4之间采用Pearson相关性分析,FGF23与Gal-3之间呈正相关(r=0.280,P=0.012);FGF23与TLR-4之间呈正相关(r=0.291,P=0.009);Gal-3与TLR-4之间呈正相关(r=0.401,P=0.000)。结论FGF23、Gal-3、TLR-4在慢性心力衰竭中异常高表达,与患者心功能分级相关,共同参与慢性心力衰竭的发生,为临床上慢性心力衰竭的诊治提供参考。

紫草素上调RIP1和RIP3表达诱导量引发肺腺癌A549细胞程序性坏死的机制

目的探讨紫草素诱导肺腺癌A549细胞死亡的作用机制。方法使用紫草素及人肺腺癌A549细胞系;通过MTT法来检测细胞活性;Annexin V/PI双染色法来检验细胞的死亡方式;应用Western印迹来检验程序性坏死相关蛋白水平变化;使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针来检测细胞内活性氧簇(ROS)水平变化。结果紫草素诱导肺腺癌A549细胞死亡与紫草素作用浓度相关;Annexin V/碘化丙啶(PI)双染色法表明紫草素作用后的肺腺癌A549细胞形态以坏死为主;紫草素处理后的肺腺癌A549细胞中受体相互作用蛋白酶(RIP)1和RIP3的水平升高(P<0.001);但使用Nec-1和GSK后,紫草素对于肺腺癌A549细胞的杀伤作用均有所缓解(P<0.001);DCHF-DA探针表明经紫草素处理后的A549细胞中ROS水平显著增高(P<0.001),而用Nec-1、GSK及抗氧化抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,ROS水平降低(P<0.001)。结论紫草素诱使RIP1和RIP3的增高导致肺腺癌A549细胞程序性坏死。这为肺腺癌A549的治疗提供了新的理论支持。

芹菜素对细胞色素酶3A4的转录调节及紫杉醇结肠癌LS174T细胞毒性的影响

目的考察芹菜素对细胞色素P450酶3A4(CYP3A4)基因的转录激活和转录诱导作用,对其与化疗药物紫杉醇联合用药中的药物相互作用进行评价。方法在人结肠癌LS174T细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验考察芹菜素对人孕烷X受体(PXR)介导的CYP3A4的启动子激活作用;半定量和荧光定量PCR方法评价芹菜素对CYP3A4 mRNA的诱导作用;细胞生长抑制实验观察芹菜素对紫杉醇结肠癌细胞毒性的干预作用。结果芹菜素1、10和25μmol/L可剂量依赖性地通过激活PXR而诱导CYP3A4启动子,剂量依赖性地上调CYP3A4 mRNA表达,芹菜素25μmol/L能够显著增强紫杉醇的结肠癌细胞毒性。结论芹菜素可能会诱发潜在的药物相互作用,增强药物毒性,其对药物相互作用的影响与PXR调控途径无关。

C型凝集素9家族A成员的研究进展

C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。

FLT4调控羊驼黑色素细胞中黑色素生成

血管内皮素生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3/FLT4)与黑色素瘤细胞的生长有关,其可能对毛色及黑色素生成有一定的调控作用。为探讨FLT4基因对羊驼毛色及黑色素生成的影响,本文采用免疫组织化学、qRT-PCR、Western印迹对FLT4在不同毛色羊驼皮肤毛囊中的表达进行了研究。结果显示,FLT4在不同毛色毛囊中外根鞘及毛乳头阳性表达不同,且棕色皮肤比白色皮肤阳性信号强;FLT4 mRNA在棕色羊驼皮肤的表达量明显高于白色羊驼皮肤(P<0.01);FLT4蛋白在棕色皮肤中的表达量明显高于白色皮肤(P<0.01);为进一步研究FLT4对黑色素生成的影响;通过对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度的FLT4蛋白(0,1,10,50,100 ng/m L),与对照组相比,添加FLT4蛋白后酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸相关蛋白-1(TYRP1)、受体酪氨酸激酶c-KIT、小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA和蛋白质表达明显增加,10 ng/m L组表达量最高(P<0.01);黑色素含量测定结果表明,不同浓度的FLT4蛋白处理的羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素含量比对照组明显升高,添加FLT4蛋白10 ng/m L表达量最高(P<0.01)。由此可知,FLT4可以通过调节毛色相关基因的表达进而引起黑色素细胞中黑色素含量的变化。

半乳糖凝集素-受体相互作用对感染伯氏疟原虫小鼠小肠病理的调节

目的探讨半乳糖凝集素与其受体相互作用对伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠小肠组织病理的调节。方法对昆明小鼠采用腹腔注射105个感染伯氏疟原虫的红细胞建立动物模型。对部分对照小鼠和感染伯氏疟原虫的小鼠经腹腔注射300 mmol/Lα-乳糖溶液,每日2次,达到竟争性封闭半乳糖凝集素的目的。采用H&E染色观察小鼠小肠组织病理变化,实时荧光定量PCR检测小肠M1型巨噬细胞极化标记物[诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和趋化因子受体2(CCR2)]以及M2型巨噬细胞极化标记物[几丁质酶3样蛋白1(YM1)和抵抗素样分子α(Fizz1)]的mRNA表达水平。采用SPSS 19.0对数据进行Student t检验分析。结果在感染后第8天,伯氏疟原虫单感染组小鼠和伯氏疟原虫感染+α-乳糖组小鼠小肠组织均出现明显病理损伤,小肠组织中M1型巨噬细胞极化标记物iNOS的mRNA表达水平与正常对照组相比显著增加,差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);单感染组和感染+α-乳糖组小鼠小肠组织中CCR2的mRNA表达水平与正常对照组相比也显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与伯氏疟原虫单感染组小鼠感染后第8天相比,伯氏疟原虫感染+α-乳糖组小鼠小肠组织的病理损伤更加严重,小肠组织中iNOS和CCR2的mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阻断半乳糖凝集素-受体相互作用可能通过促进小肠组织巨噬细胞M1极化,加重伯氏疟原虫红细胞内期感染小鼠的小肠组织病理,提示半乳糖凝集素与其受体之间的相互作用对控制伯氏疟原虫感染引起的肠道病理损伤具有重要作用。