Fluoro-Jade B法显示神经毒物红藻氨酸和MPTP致小鼠基底神经核损伤引起神经元的变性死亡

目的探讨应用Fluoro-JadeB(FJB)染色法检测基底神经核神经元变性死亡的方法。方法制备纹状体定位注射红藻氨酸(KA)损伤大鼠模型、腹腔注射MPTP损伤小鼠模型、以及培养纹状体神经元KA损伤细胞模型,用FJB荧光染色显示和分析变性死亡的神经元。结果FJB染色可清晰地显示KA和MPTP致大、小鼠损伤引起的变性神经元胞体和部分突起。在脑组织切片上,KA模型纹状体内、MPTP模型黑质致密部内分布许多FJB染色阳性的变性神经元,而对照组动物未见变性神经元。在培养纹状体神经元体系内,FJB也能清楚地显示KA损伤后变性的神经元。单位面积内计数FJB阳性神经元占培养纹状体神经元总数的比率(均值±标准差),KA损伤组为(8·42±1·09)%,较对照组(3·42±0·45)%明显增多(P<0·01)。结论FJB方法快速、简便、经济、可靠。可以用于脑组织切片和培养细胞显示变性神经元,能成功检测出KA和MPTP损伤后基底神经核的变性神经元。

Fluoro-JadeC染色方法显示神经毒物MPTP和红藻氨酸致小鼠中脑黑质神经元的变性死亡

为探讨Fluoro-JadeC荧光染色检测神经毒物MPTP和红藻氨酸(KA)损伤致中脑黑质神经元变性死亡的方法,本研究采用小鼠腹腔注射MPTP或黑质定位注射KA制备黑质损伤模型,然后进行Fluoro-JadeC染色标记和计数分析黑质内变性死亡神经元。结果显示:Fluoro-JadeC(FJC)染色可清晰地显示MPTP或KA致小鼠黑质损伤后出现的变性神经元,包括变性神经元的细胞胞体和突起。在中脑组织切片上,MPTP模型与KA模型黑质致密部内有许多FJC染色阳性的变性神经元,而对照组动物黑质内未见FJC染色阳性的变性神经元分布。本研究结果表明:FJC方法能够很好地显示MPTP和KA动物模型黑质内神经元的变性死亡,具备很高的对比度和分辨率,是一种特异性标记黑质变性神经元树突、轴突和胞体的优良染色方法。

Fluoro-Jade B染色与TUNEL比较检测乙醇诱导神经细胞凋亡

目的:建立利用Fluoro-Jade B(FJ-B)染色检测乙醇诱导PC12细胞及小鼠海马脑片上神经细胞凋亡的方法并与TUNEL比较.方法:利用不同浓度的乙醇分别诱导PC12细胞和小鼠海马脑片上神经细胞凋亡,用FJ-B染色检测神经细胞凋亡,同时用TUNEL检测进行比较,从凋亡率、单位面积阳性细胞数的统计结果分析、实验过程等方面评价2种方法的优缺点.结果:2种方法检测结果显示乙醇处理组与对照组相比差异有统计学意义,2种方法相同组间对比分析差异无统计学意义.结论:FJ-B染色与TUNEL在检测乙醇对神经细胞凋亡影响的结果无差异;且FJ-B染色更适合在脑片上检测神经细胞的凋亡.

Fluoro-Jade C染色在小鼠匹罗卡品癫痫模型中的应用

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色技术在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测神经元变性,以了解FJC应用价值及其细胞死亡模式。方法雄性昆明小鼠6只:对照组3只;匹罗卡品处理组3只。处理组小鼠在癫痫持续状态后12 h处死,在海马水平切制冠状切片,先行FJC染色,用荧光显微镜观察;之后在切片上行FJC与Hoechst双标。结果处理组,FJC阳性细胞清晰显示,呈神经元形态,对照组未见。双标资料显示FJC(100%)与Hoechst33342双标记。结论小鼠匹罗卡品癫痫模型成功应用FJC染色技术探测了神经元变性,证实此技术在探测神经元变性方面敏感、可靠且简单,并显示此模型中FJC阳性细胞也许主要是凋亡性的。

Fluoro-Jade B染色与蛋白免疫荧光多标的染色方法

目的寻找一种Fluoro-Jade B(FJB)染色结合目的蛋白免疫荧光多标的合适方法。方法通过电凝法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),诱导皮层缺血半暗带神经元变性。实验分为FJB染色结合蛋白免疫荧光组以及目的蛋白免疫荧光结合FJB染色组。大鼠MCAO后5d断头取脑,脑组织冰冻切片后,按上述两种染色顺序染色,观察两组实验双标的效果。结果 FJB染色结合目的蛋白免疫荧光组中,FJB和蛋白免疫荧光阳性细胞形态清楚,免疫双标效果良好;而蛋白免疫荧光结合FJB染色组,虽然FJB阳性细胞较为清晰,但与之免疫双标的蛋白免疫荧光阳性细胞不清楚,背景模糊,效果不佳。结论在两种免疫双标的方法中,先行FJB染色后再做目的蛋白免疫荧光染色,不会影响蛋白免疫荧光的染色效果,有利于后续实验的进行和观察。

Fluoro-Jade C揭示小鼠匹罗卡品模型中杏仁核神经变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测杏仁核结构中神经元的变性情况,以了解杏仁核结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠6只(对照组3只,匹罗卡品处理组3只)。在癫痫持续状态后12 h处死处理组小鼠。在杏仁核水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在杏仁核中的整体分布情况。结果在处理组,FJC染色的脑切片上可以很清楚地看到呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。杏仁核出现大量FJC阳性细胞,而对照组未见。结论该研究在小鼠匹罗卡品癫痫模型中运用FJC染色技术显示杏仁核中发生了大量神经元变性,有利于更好地理解颞叶癫痫中中枢神经系统所发生的病理变化和自发反复发作的癫痫机制。

应用Fluoro-Jade C评价小鼠匹罗卡品模型中岛皮质神经变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测岛皮质结构中神经元的变性情况,以了解岛皮质结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠6只随机分为对照组3只和匹罗卡品处理组3只。对照组给予阿托品、生理盐水腹腔注射;匹罗卡品处理组给予阿托品、匹罗卡品腹腔注射。在癫痫持续状态后3 d通过经心灌注固定处死匹罗卡品处理组小鼠。对照组小鼠处死时间及方法同匹罗卡品处理组。在岛皮质水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在岛皮质中的分布情况。结果匹罗卡品处理组FJC染色的脑切片上可清楚看到岛皮质出现亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。而对照组未见此显示。结论 FJC染色技术在小鼠匹罗卡品癫痫模型中显示岛皮质发生了神经元变性,有利于更好地理解颞叶癫痫中所发生的病理变化和癫痫反复发作的发生机制。

应用Fluoro-Jade C评价匹罗卡品模型中新大脑皮质神经变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测新大脑皮质结构中神经元的变性情况。方法雄性昆明种小鼠10只(对照组5只,匹罗卡品处理组5只)。对照组给予阿托品、生理盐水腹腔注射;匹罗卡品处理组给予阿托品、匹罗卡品腹腔注射诱发癫痫持续状态。在癫痫持续状态后12 h,通过经心灌注固定处死匹罗卡品处理组小鼠。对照组小鼠处死时间及方法同匹罗卡品处理组。在各新大脑皮质水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下,观察FJC阳性细胞的形态和在新大脑皮质中的整体分布情况。结果在匹罗卡品处理组,许多新大脑皮质出现呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,而对照组未见。结论在小鼠匹罗卡品癫痫模型中,运用FJC染色技术在新大脑皮质中显示发生了大量神经元变性,有利于更好地理解颞叶癫痫的长期病理变化和自发反复发作的癫痫机制。

应用Fluoro-Jade C评价小鼠匹罗卡品模型中纹状体神经变性

目的:应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测纹状体结构中神经元的变性情况,以了解纹状体结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理神经基础。方法:雄性昆明小鼠10只(对照组5只,模型组5只)。在癫痫持续状态后3 d处死模型组小鼠。在纹状体水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在纹状体(尾状壳核)中的整体分布情况。结果:在模型组,FJC染色的脑切片上清楚显示FJC阳性变性细胞呈亮黄绿色,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。在纹状体(尾状壳核)内背侧1/3和尾侧部分出现许多FJC阳性细胞。结论:本研究运用FJC染色技术在小鼠匹罗卡品癫痫模型中显示纹状体中发生了神经元变性,提示纹状体可能在慢性颞叶癫痫的发生机制中起重要作用。

Fluoro-Jade C揭示匹罗卡品模型中梨状皮质神经元变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中检测梨状皮质结构中神经元的变性情况,以了解梨状皮质结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠10只(对照组5只,匹罗卡品处理组5只)。处理组在癫痫持续状态后3d处死处理组小鼠。在梨状皮质水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在梨状皮质中的整体分布情况。结果在处理组,FJC染色的脑切片上可以很清楚地看到呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。在梨状皮质和梨状内核内出现大量FJC阳性细胞,而对照组未见。结论在小鼠匹罗卡品癫痫模型中运用FJC染色技术显示梨状皮质内发生了大量神经元变性,此研究有利于更好地理解颞叶癫痫中中枢神经系统所发生的长期病理变化和自发反复发作的癫痫机制。

硬脑膜修复生物膜的大鼠原位脑植入局部神经毒性评价方法

目的采用大鼠原位脑植入模型评价硬脑膜修复生物膜的局部神经毒性,旨在建立脑部原位植入局部神经毒性评价方法。方法选择硬脑膜修复生物膜为研究对象,以上市同类产品为对照品,经大鼠原位脑植入,获取包含颅骨、硬脑膜、植入材料及其周围大脑组织的标本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Fluoro-Jade C(FJC)特殊染色与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光考察植入物周围脑组织的局部组织学反应、神经元降解退行性变与星形胶质细胞增生来综合评价植入物的潜在神经毒性风险。结果植入4周、13周、26周后,与对照品相比,供试品的局部组织学反应均为无刺激反应;FJC染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的神经元降解程度与对照组相比不存在显著性差异;GFAP染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的星形胶质细胞增生程度与对照组相比不存在显著性差异。结论可以采用HE染色、FJC特殊染色与GFAP免疫荧光染色联合评价硬脑膜修复生物膜经大鼠原位脑植入后的局部神经毒性。

西洛他唑对脑缺血后神经元损伤的保护作用

目的:观察西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤的剂量依赖性保护作用。方法:以大脑中动脉阻塞诱导小鼠持续性局灶性脑缺血。缺血前30min腹腔注射西洛他唑(3～30mg/kg)和普鲁司特(0.1mg/kg)。观察药物对缺血后神经元形态、密度的影响。结果:脑缺血损伤后,神经元密度降低,变性神经元密度增加。西洛他唑(3～10mg/kg)和普鲁司特能明显增加缺血侧存活神经元密度,减少变性神经元密度。结论:西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤有保护作用。

当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血后脑源性促红细胞生成素的影响

目的:观察当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用及对脑源性促红细胞生成素(erythropoie-tin,EPO)表达的影响。方法:将动物随机分为假手术组、模型组和给药组,采用改良线栓法建立大鼠永久性局灶性脑缺血模型,按缺血时间每组分为4h、1d和7d亚组,给药组灌胃当归补血汤。在缺血相应时间后取材,行甲苯胺蓝染色,观察组织病理变化;行TTC染色,计算脑梗死体积百分比;行Fluoro-Jade B(FJB)染色,计算半暗带阳性细胞数;行EPO免疫荧光染色,计算半暗带阳性细胞数。结果:与模型组相比,当归补血汤可以减轻缺血脑组织的病理改变,降低缺血7d亚组脑梗死体积百分比(P<0.05),减少缺血1d、7d亚组半暗带FJB阳性细胞数(P<0.05,P<0.01);给药组缺血1d、7d亚组半暗带EPO阳性细胞数明显多于模型组(P<0.01)。结论:当归补血汤对永久性局灶性脑缺血大鼠具有一定的保护作用,可能与增强脑缺血后脑源性EPO表达有关。

核因子-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用。方法将26只正常雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NS组,n=6)、毛果芸香碱诱导癫痫组(SE组,n=10)和PDTC干预组(PDTC组,n=10)。SE组一次性腹腔注射毛果芸香碱诱导大鼠癫痫发作;PDTC干预组分别于造模前24h、20min、SE发作后24 h腹腔注射PDTC 100mg.kg-1;NS组给予等量生理盐水。于造模成功后48h处死各组大鼠,采用Nissl染色和Fluoro-Jade C(FJC)染色法分别检测并比较各组大鼠梨状皮层存活神经细胞情况和退行性神经元数目。结果 Nissl染色结果显示,SE组大鼠梨状皮层大量神经细胞丢失,胞体结构完整性遭到破坏。FJG染色结果显示,SE组FJC阳性细胞数目明显增多;经PDTC干预后可明显改善梨状皮层神经损伤,FJC阳性细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDTC对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层损伤具有明显的保护性作用。

Lactacystin诱导黑质神经元变性死亡的帕金森病大鼠模型方法

目的:探讨脑内定位注射蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导大鼠黑质神经元变性及运动症状的帕金森病大鼠模型方法。方法:成年雄性SD大鼠16只随机分为Lactacystin组和对照组,将Lactacystin 8μg(溶于0.8μl生理盐水)定位注入左侧内侧前脑束,对照组注射等量生理盐水。于1、3、5周时间点观察其运动行为,处死动物后进行中脑酪氨酸羟化酶和Fluoro-Jade C染色,显示分析黑质多巴胺神经元生存和变性死亡。结果:Lactacys-tin组黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性神经元急剧减少,伴有大量Fluoro-Jade C阳性的变性神经元出现。Lactacystin组动物出现自发活动减少、运动缓慢、震颤和自发旋转,并呈逐渐加重的运动行为改变。结论:Lactacystin能够高效诱导黑质多巴胺神经元变性和运动障碍的大鼠模型,是研究帕金森病发病机制和神经保护的优良方法。

小鼠匹罗卡品癫癇模型中嗅球神经变性的FJC染色评价

目的探测小鼠匹罗卡品癫癇模型中嗅球结构中神经元变性情况,了解嗅球结构在慢性颞叶癫癇发生中的病理变化及癫癇反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠6只(对照组3只,匹罗卡品处理组3只)。在癫癇持续状态后12 h处死处理组小鼠。在嗅球水平切制冠状切片,行Fluoro-Jade C(FJC)染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在嗅球中的整体分布情况。结果在处理组,FJC染色的脑切片上清楚显示呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示,嗅球出现大量FJC阳性细胞。结论嗅球结构中神经元变性,可能是慢性颞叶癫癇病理变化和癫癇反复发作的神经基础。

喹硫平对小鼠脑缺血致神经元损伤及其机制的实验研究

目的研究喹硫平对小鼠脑缺血致神经元损伤的保护作用及机制。方法雄性ICR小鼠给予喹硫平10mg/kg腹腔注射14d预处理,然后闭塞双侧的颈总动脉。实验共分为4个组:假手术组、缺血组、药物对照组及药物保护组。采用Fluoro-Jade B染色观察脑缺血后海马齿状回区神经元损伤情况;采用Western blot方法检测MDA、BDNF和Bcl-xL/Bax蛋白的表达。结果缺血组与假手术组比较Fluoro-Jade B染色阳性细胞数量明显增加(P<0.01);药物保护组与缺血组比较Fluoro-Jade B染色阳性细胞数量明显减少(P<0.01)。缺血组与假手术组比较Bcl-xL/Bax比值减少(P<0.05);药物保护组与缺血组比较Bcl-xL/Bax比值增加(P<0.05)。缺血组与假手术组比较BDNF蛋白表达量减少(P<0.05);药物保护组与缺血组比较BDNF蛋白表达量增加(P<0.05)。缺血组与假手术组比较MDA蛋白表达量增加(P<0.05);药物保护组与缺血组比较MDA蛋白表达量减少(P<0.05)。结论喹硫平能够减轻小鼠脑缺血所致的神经元损伤,其机制可能与减少MDA的表达、增加Bcl-xL/Bax的比值、增加BDNF的表达有关。

光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型

背景:实验性缺血性脑卒中动物模型是研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具,光化学栓塞法制作缺血性脑卒中动物模型操作简便,稳定性好,重复性高,可有针对性的控制梗死灶的位置以及大小,是研究缺血性脑卒中病理机制的良好选择。目的:建立光化学栓塞法缺血性脑卒中动物模型,对比不同性别小鼠缺血性脑卒中后梗死体积以及行为学表现的异同。方法:62只昆明小鼠依据检测内容分为病理学检测6只、梗死体积测试16只和行为学测试40只。其中病理学检测小鼠分为假手术组和模型组,各3只;梗死体积测试小鼠分为雌性模型组和雄性模型组,各8只;行为学测试小鼠分为雌性模型组、雌性假手术组、雄性模型组和雄性假手术组,各10只。模型组(含雌性模型组和雄性模型组)小鼠采用光化学栓塞法制备局部缺血性卒中模型,假手术组(含雌性假手术组和雄性假手术组)小鼠不注射孟加拉玫瑰红染料。结果与结论:尼氏染色显示模型组小鼠梗死中心出现神经元变性坏死,空泡样病理改变,Fluoro-Jade C染色可见模型组小鼠梗死中心中出现变性神经元,且雌性小鼠脑梗死体积显著小于雄性小鼠,模型组小鼠行为运动功能受损程度显著大于假手术组小鼠,其中雌性小鼠运动功能受损程度小于雄性小鼠。表明光化学栓塞法可以成功建立缺血性脑卒中动物模型,且相同条件下缺血性脑卒中对于雄性造成的神经功能损伤更为严重。

乙醇对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞分化的影响

目的:观察神经细胞微管相关蛋白2(microtubeasso ciated protein-2,MAP2)、孤儿核受体1(nuclear receptor-related factor 1,NURR1)、拓扑异构酶Ⅱβ(DNA topoisomereⅡβ,TopoⅡβ)在乙醇毒性作用下的表达变化,探讨MAP2、NURR1、TopoⅡβ与乙醇导致的神经细胞分化异常的相关关系。方法:取新生鼠(出生24 h内),75%酒精消毒,断头取脑,分离皮层神经细胞接种于培养板,给予剂量75 mmol/L的乙醇培养3 d、5 d、7 d后,采用免疫荧光观察MAP2、NURR1、TopoⅡβ的表达变化;Fluoro-Jade B荧光染色观察神经细胞变性坏死情况。结果:随乙醇染毒时间的延长,原代培养的神经细胞分布较正常对照组稀疏,MAP2的表达发生了变化,以7 d组变化最明显,突起变细变短,阳性表达减弱;NURR1及TopoⅡβ的表达也随乙醇染毒时间的延长,阳性细胞数目及阳性信号表达的强度均呈下降趋势,以7 d最为显著。NURR1阳性细胞计数为(9.6±3.5)与正常对照组的(45.2±3.96)有显著差异(P<0.05)。TopoⅡβ(55.8±3.77)与正常对照组的(86.2±4.82)有明显差异(P<0.05);Fluoro-Jade B荧光标记显示在乙醇染毒5 d组及7 d组均可见阳性细胞。结论:MAP2、NURR1、TopoⅡβ可能参与了乙醇导致的神经细胞分化异常,改变了细胞骨架稳定,最终导致了部分神经细胞的变性坏死。

脑出血后迟发性神经元变性的发生及铁离子的作用

目的:观察大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后迟发性神经元变性的发生,小胶质细胞和核因子-kappa B(NF-κB)的激活,探讨铁离子在该过程中的作用。方法:建立大鼠脑出血模型及海马FeCl2模型,在不同时间点处死,观察神经元变性(fluoro-jade C staining,FJC染色)、小胶质细胞的激活,以及NF-κB(免疫组化染色)的表达和分布情况。结果:在2组模型中,术后14 d均发现FJC染色阳性的变性神经元。术后1 d在注射侧血肿周围及海马区,即可清晰地观察到激活的小胶质细胞和NF-κB阳性细胞,且至少持续存在14 d,而非注射侧几乎无FJC阳性细胞、激活的小胶质细胞和NF-κB阳性细胞。结论:大鼠脑出血后存在迟发性神经元变性现象,小胶质细胞的激活及NF-κB的表达可能参与了这一过程,而铁离子的潴留可能是导致这一过程的重要原因之一。