铁代谢相关基因FLVCR1对肝细胞癌的预后影响及与免疫细胞浸润的相关性研究

目的 基于多个数据库探索猫白血病病毒C亚群受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor 1,FLVCR1)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达、预后及与免疫细胞浸润的相关性。方法 利用UALCAN、GEPIA2、仙桃学术平台分析FLVCR1在HCC患者中的表达情况;利用GEPIA、GSCA分析FLVCR1与临床分期的关系;Linkedomics寻找与FLVCR1相关的基因,进一步进行GO、KEGG富集分析;利用TIMER数据库分析FLVCR1与免疫细胞浸润的相关性;Kaplan Meier plotter探索免疫细胞浸润高低对预后的影响;在GSCA分析FLVCR1与药物敏感性的相关性。结果 FLVCR1在HCC患者中高表达;FLVCR1表达与临床分期呈正相关;与FLVCR1正相关的基因主要富集在有机酸分解代谢等过程,与FLVCR1负相关的基因主要富集在染色体分离等过程;FLVCR1表达水平与四种免疫细胞包括CD4^(+)记忆T细胞、CD8^(+)T细胞、髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)、调节性T细胞(regulatory cells, Tregs)的浸润水平呈正相关且P<0.05;Kaplan Meier plotter数据库结果说明四种免疫细胞浸润与HCC患者不良预后相关;FLVCR1的表达与Dasatinib药物敏感性正相关,与Navitoclax负相关。结论 FLVCR1对HCC患者的不良预后与免疫细胞浸润密切相关。

lncRNA FLVCR1-AS1靶向miR-381-3p对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的探讨长链非编码RNA FLVCR1-AS1(lncRNA FLVCR1-AS1)调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法取正常结肠上皮细胞FHC及CRC细胞SW480、DLD-1、HCT116,采用qRT-PCR法检测细胞中的FLVCR1-AS1与miR-381-3p。将FLVCR1-AS1表达最高的CRC细胞随机分为7组:NC组不处理,si-FLVCR1-AS1组、si-con组分别转染FLVCR1-AS1小干扰RNA及乱序无意义序列,miR-381-3p组、miR-con组分别转染miR-381-3p模拟物(mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-con),si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组分别共转染si-FLVCR1-AS1与miR-381-3p特异性寡核苷酸抑制剂及其阴性对照;采用MTT法测算细胞存活率,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-Caspase-3)。先用Starbase对FLVCR1-AS1和miR-381-3p结合进行预测,再以双荧光素酶报告基因检测FLVCR1-AS1与miR-381-3p的相互作用。结果与FHC比较,SW480、DLD-1、HCT116中FLVCR1-AS1表达水平均升高而miR-381-3p表达水平均降低(P均<0.05),其中SW480的FLVCR1-AS1表达最高。与NC组、si-con组、miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);miR-381-3p组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);NC组、si-con组、miR-con组两两比较,差异均无统计学意义;与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组细胞存活率升高、细胞凋亡率降低,细胞中Cyclin D1蛋白表达量升高、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量低(P均<0.05)。Starbase预测显示,FLVCR1-AS1与miR-381-3p存在靶向结合位点;双荧光素酶报告实验显示,在转染野生型载体WT-FLVCR1-AS1的SW480细胞中,共转染miR-381-3p mimics的荧光素酶活性低于共转染miR-con的细胞(P<0.05)。结论lncRNA FLVCR1-AS1可靶向调节miR-381-3p以促进CRC细胞增殖、抑制细胞凋亡,该作用可能通过上调Cleaved-Caspase-3表达及下调Cyclin D1表达实现。

干扰lncRNA FLVCR1-AS1表达通过靶向调控miR-381-3p抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨lncRNA FLVCR1-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:将si-NC、si-FLVCR1-AS1、miR-NC、miR-381-3p、pcDNA、pcDNA-FLVCR1-AS1分别转染至DU145细胞,分别记为si-NC组、si-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、miR-381-3p组、pcDNA组、pcDNA-FLVCR1-AS1组;将si-FLVCR1-AS1质粒分别与anti-miR-NC、anti-miR-381-3p共转染至DU145细胞,分别记为si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组。RT-qPCR检测miR-381-3p和FLVCR1-AS1表达水平;Western blot法检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、p27、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、MMP-14表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测FLVCR1-AS1和miR-381-3p的靶向关系。结果:与正常前列腺上皮细胞株RWPE-1相比,前列腺癌细胞DU145、LNCaP、22Rv1中FLVCR1-AS1表达显著升高,miR-381-3p表达显著降低。干扰FLVCR1-AS1表达和miR-381-3p过表达可降低细胞活性,减少迁移、侵袭细胞数,降低CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达,提高p21表达。FLVCR1-AS1靶向调控miR-381-3p表达,抑制miR-381-3p表达可逆转干扰FLVCR1-AS1表达对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:干扰FLVCR1-AS1表达可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与抑制miR-381-3p表达有关,将为前列腺癌的治疗提供新思路和新靶点。

五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠FLVCR1及BCRP表达的影响

目的探讨五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠猫白血病病毒C亚类受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR1)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)表达的影响。方法通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,然后将实验动物分为模型组、西药组(尼莫地平片20mg·kg^(-1)·d^(-1))及五脏温阳化瘀方低(1.25 g·kg^(-1)·d^(-1))、中(2.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、高(5 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,另取6只大鼠设为假手术组。各组大鼠给予相应药物干预28 d后,采用Morris水迷宫实验评价各组大鼠学习记忆能力;HE及Nissl染色法进行组织病理学检测;Perls’铁染色检测各组大鼠海马CA1区铁沉积情况;采用qRT-PCR和Western blotting检测各组大鼠海马组织中FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著性延长(P<0.01);穿越平台次数明显减少(P<0.01);海马CA1区病理损伤严重,尼氏小体数量明显减少,铁沉积明显增多;FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平显著性降低(P<0.01);与模型组比较,西药组、五脏温阳化瘀方中剂量和高剂量组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),穿越平台次数明显增加(P<0.01);与模型组比较,西药组和五脏温阳化瘀方各剂量组大鼠海马CA1区病理损伤减轻,尼氏小体数量明显增加,铁沉积明显减少;FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平显著性升高,且高剂量组及西药组升高效果最显著(P<0.01);高剂量组与西药组比较无显著差异(P>0.05)。结论五脏温阳化瘀方可以通过上调FLVCR1和BCRP的表达,减少细胞内铁过载,调节铁代谢,抑制铁死亡,从而发挥改善血管性痴呆大鼠认知能力的作用。

FLVCR1-AS1靶向miR-877-5p对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病病毒C亚类受体1反义RNA1(FLVCR1-AS1)对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法收集2016年12月至2018年11月在海南医学院第二附属医院行手术治疗的35例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织。体外培养SiHa细胞,按不同转染分为si-NC组、小干扰RNA(si)-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、微小RNA(miR)-877-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,RT-qPCR检测FLVCR1-AS1和miR-877-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-877-5p的调控关系。结果宫颈癌组织中FLVCR1-AS1表达量高于癌旁组织(3.82±0.23 vs 1.00±0.08,t=68.510,P<0.01);而miR-877-5p表达量低于癌旁组织(0.32±0.03 vs 1.00±0.05,t=68.993,P<0.01)。经转染后,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中FLVCR1-AS1表达较si-NC组显著下调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于si-NC组(P<0.01)。miR-877-5p组SiHa细胞中miR-877-5p表达较miR-NC组显著上调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均低于miR-NC组(P<0.01)。与miR-877-5p抑制剂共转染后,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组SiHa细胞OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均高于si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组(P<0.01)。结论 FLVCR1-AS1可能通过靶向抑制miR-877-5p的表达促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭。