我的尼康FM3A和70S

一，黄金草原上的盛景 去年得到色达县委的邀请参加色达县建县五十周年的笔会，因此才有机会拍得雪地上这组藏族小女孩牧羊和牧马尼石去神山的照片。当时我们正进去在竹日神山的路途上，我们发现远处过来一个大约七八岁的小女孩，她正在放牧一大群羊朝我们走来，我们都激动地让司机停车。

不同海拔急性髓系白血病患者化疗前后血清及骨髓造血因子表达水平差异研究

背景化疗是急性髓系白血病(AML)患者重要的治疗手段,最常见的毒副作用是骨髓抑制。各类血细胞的发育增殖、分化受到多种造血因子的调控,不同海拔AML患者化疗后造血因子表达水平是否存在差异及其变化规律尚未明确。目的探讨不同海拔AML患者化疗前后骨髓及血清造血因子表达水平是否存在差异及其变化。方法选取2021—2022年青海省人民医院血液科(中海拔地区1501~2500 m)及中国人民解放军空军军医大学西京医院血液科(低海拔地区500~1500 m)首诊初治的28例AML患者(非M3型)为研究对象,根据就诊医院海拔高低将AML患者分为中海拔组(13例)和低海拔组(15例)。采用WHO抗癌药物急性及亚急性毒性反应分级标准评估患者化疗第8、14、28天骨髓抑制分度;采用酶联免疫吸附法对两组患者化疗前、化疗第8天、化疗第28天血清及骨髓促红细胞生成素(EPO)、FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3-L)、促血小板生成素(TPO)和干扰素γ(IFN-γ)表达水平进行检测并比较。结果化疗第14、28天,低海拔组患者骨髓抑制分度均高于中海拔组(Z=-1.975,P=0.048;Z=-2.049,P=0.040)。化疗第28天,低海拔组血清及骨髓EPO表达水平高于中海拔组(P<0.05);中海拔组化疗第28天血清EPO表达水平低于化疗第8天(P<0.05)。化疗第28天,低海拔组血清及骨髓Flt3-L表达水平均高于中海拔组(P<0.05);两组患者化疗第8天、化疗第28天血清Flt3-L表达水平均高于化疗前,两组患者化疗第28天骨髓Flt3-L表达水平均高于化疗前(P<0.05)。化疗前、化疗第8天、化疗第28天,低海拔组血清TPO表达水平均高于中海拔组(P<0.05);低海拔组患者化疗第8天血清TPO表达水平低于化疗前(P<0.05);化疗第28天,低海拔组骨髓TPO表达水平高于中海拔组(P<0.05);中海拔组化疗第28天骨髓TPO表达水平低于化疗前(P<0.05)。两组患者化疗前后血清及骨髓IFN-γ表达水平组间、组内比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论低海拔AML患者化疗后骨髓抑制恢复期间造血生长因子EPO、Flt3-L、TPO表达水平高于中海拔,造血抑制因子IFN-γ两组间无明显差异;中海拔AML患者化疗后骨髓抑制分度及程度较低海拔更严重。

急性髓系白血病靶向治疗药物的研究进展

急性髓系白血病(AML)是最具侵袭性的成人白血病,大量的临床前和临床研究推动了美国食品药品监督管理局逐步批准了数种适用于AML的靶向药物。然而,大多数患者的预后仍然不佳,而且常因耐药突变克隆导致疾病复发。因此,临床上仍需要进一步研究新的靶向药物,或提出创新性的、更为合理的用药方案。本文综述了包括B淋巴细胞瘤-2基因抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、FMS样酪氨酸激酶3抑制剂和TP53抑制剂药物的临床研究进展,并简述这些药物在AML治疗中的地位及作用,为未来治疗方案制订的精准化、个体化提供思路。

多巴酚丁胺可增强奎扎替尼对FLT3-ITD突变型急性髓系白血病的靶向抑制作用

目的:观察多巴酚丁胺对人FLT3-ITD突变型急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用,探讨多巴酚丁胺单药或者联合奎扎替尼治疗该型AML的可行性。方法:体外培养FLT3-ITD突变AML细胞系MOLM13及MV4-11,实验分为对照组、多巴酚丁胺处理组、奎扎替尼处理组、多巴酚丁胺联合奎扎替尼处理组,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞活性、细胞凋亡率及ROS水平,并通过Western blot检测YAP1蛋白的表达。结果:多巴酚丁胺和奎扎替尼均可抑制FLT3-ITD突变型AML细胞系MOLM13、MV4-11的增殖。与对照组相比,多巴酚丁胺组FLT3-ITD突变AML细胞的ROS水平显著上升(P<0.01),凋亡率增加(P<0.05),其YAP1蛋白的表达减少(P<0.05);与多巴酚丁胺组相比,奎扎替尼联合多巴酚丁胺组的细胞活性显著降低(P<0.05),ROS水平上升(P<0.01),YAP1表达减少(P<0.05)。结论:多巴酚丁胺单药可抑制FLT3-ITD突变型AML细胞的增殖,引起其凋亡,且联合奎扎替尼可增强对FLT3-ITD突变型急性髓性白血病的靶向抑制作用。其机制可能是通过抑制该型AML细胞YAP1蛋白的表达,提高ROS水平从而发挥其抗肿瘤作用。

伴FLT3突变的急性髓系白血病患者淋巴细胞亚群和细胞因子的表达水平及意义

目的:探讨伴FMS样酪氨酸激酶3受体(FMS like tyrosine kinase 3 receptor,FLT3)突变的初诊急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者外周血淋巴细胞亚群、细胞因子表达水平及其与血细胞计数、突变类型之间的相关性。方法:168例伴FLT3突变的AML患者纳入研究,进一步对FLT3突变类型进行分类,收集患者治疗前外周血淋巴细胞亚群、细胞因子数据及血细胞计数,分析其之间的相关性。结果:与健康对照组相比,伴FLT3突变的AML患者治疗前外周血CD4、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL-10表达水平升高,CD8、CD16+CD56、IL-2、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、干扰素-γ(interferon gamma,IFN-γ)表达水平下降。按白细胞计数分组,CD3、CD4、CD8、CD19、IL-4、IL-10在组间分布差异具有统计学意义(P=0.039、P=0.024、P=0.034、P=0.008、P=0.048、P=0.024);按血小板计数分组,CD19、CD16+CD56在组间分布差异具有统计学意义(P=0.030、P=0.045)。按FLT3类型分组,分为FLT3-ITD^(+)、FLT3-TKD^(+)、FLT3(-ITD^(+)+TKD^(+))和FLT3-(ITD^(-)+TKD^(-))组,CD3、CD8、CD19、IL-10、TNF在4组间分布差异具有统计学意义(P=0.046、P=0.048、P=0.041、P=0.042、P=0.013)。结论:伴FLT3突变AML患者的血细胞计数及FLT3突变类型与淋巴细胞亚群和细胞因子的表达水平有关,可能有助于AML危险分层并对AML患者的预后有一定影响。

Flt3L、TGF-β1及EGFR与急性髓系白血病患者不良预后的关系

目的探究FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、转化生长因子β1(TGF-β1)及表皮生长因子受体(EGFR)与急性髓系白血病(AML)患者不良预后的关系。方法选取120例首次确诊AML患者作为观察组,募集同期体检的100例健康志愿者为对照组,比较2组的Flt3L、TGF-β1及EGFR水平。观察组患者出院后随访3~12个月,根据预后情况将患者分为良好组(86例)和不良组(34例),比较2组的临床资料,采用COX模型分析上述指标与患者不良预后的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线探究上述指标对AML患者不良预后的预测效能。结果观察组Flt3L、TGF-β1水平低于对照组,EGFR水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同预后AML患者的Flt3L、TGF-β1及EGFR水平比较差异有统计学意义(P<0.05);COX模型分析显示Flt3L、TGF-β1及EGFR水平为AML患者预后不良的独立影响因素(P<0.05)。经ROC曲线分析显示,Flt3L、TGF-β1及EGFR水平预测AML患者预后不良的AUC为0.874、0.838、0.858。结论Flt3L、TGF-β1及EGFR与AML患者不良预后相关。

吉列替尼治疗FLT3突变的复发或难治性急性髓系白血病的应用研究

目的观察吉列替尼治疗Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)突变型复发或难治性急性髓系白血病(AML)的效果及安全性。方法本文为前瞻性研究,选择南阳医学高等专科学校第一附属医院2020年6月至2022年4月期间收治的85例FLT3突变型AML患者为研究对象,经数字表法将其分为常规组(42例)和试验组(43例),常规组实施AMI常规化疗,试验组采用吉列替尼辅助治疗,所有患者治疗后均开展为期1年随访,比较两组患者的近期疗效及远期预后。结果在不同治疗方案下,试验组治疗1个周期后、2个周期后、3个周期后的β2微球蛋白(β2-MG)分别为(5.25±1.33)mg/L、(3.31±1.27)mg/L、(2.66±0.41)mg/L,均低于常规组[(6.31±2.05)mg/L、(4.49±1.88)mg/L、(3.12±0.72)mg/L];试验组的治疗总有效率为88.37%(38/43),高于常规组69.05%(29/42),差异有统计学意义(P<0.05)。试验组随访期间的中位无进展生存期(PFS)、中位总生存期(OS)分别为(7.72±2.36)个月、(10.45±2.28)个月,均高于常规组[(6.41±1.25)月、(9.11±2.72)月];试验组病情复发率及死亡率分别为23.26%(10/43)、16.28%(7/43),均低于常规组[38.10%(16/42)、30.95%(13/42)],差异有统计学意义(P<0.05)。试验组的毒副反应发生率为46.51%(20/43),略高于常规组42.86%(18/42),差异无统计学意义(P>0.05)。结论吉列替尼辅助常规化疗能改善FLT3突变型AML患者的近期疗效及远期预后,此联合疗法未明显增强副反应发生风险,具有一定推广价值。

不同基因突变的急性髓系白血病患者的疗效及预后研究进展

急性髓系白血病(AML)是一组起源于造血干细胞的血液系统恶性肿瘤。近年来细胞遗传学改变被认为是AML患者重要的独立预后因素。FLT3、NPM1、RUNX1及WT1基因突变已成为重要的危险分层评价指标。其中FLT3-ITD突变可导致白血病细胞增殖失控,是独立预后不良因素。NPM1突变预示着更好的预后,可考虑选择全反式维甲酸和砷剂联合治疗、抗CD33单抗、放线菌素等治疗。RUNX1基因突变是近年来在髓系肿瘤中发现的热点突变,在初发核型正常AML中频发,与短的总体生存时间及不成熟的细胞形态有关,被认为是维持AML生存所必需的肿瘤抑制因子。WT1基因为调节造血和凋亡的肿瘤抑制基因,表达高低可能与临床缓解和复发有关,可作为潜在的预后因素和特异性免疫治疗的新靶点。复发时用定量PCR方法检测NPM1突变较WT1更具优势。本文就以上分子标志作一综述。旨在寻找潜在的基因靶点,为开发精准治疗AML的新型基因靶向药物提供参考。

汾河二坝—义棠段液压坝群对河道冲淤变化影响的数值研究

在中小河流中连续修建多座液压坝,会对河道水动力及泥沙冲淤过程产生较大影响,液压坝群不同的运行方案导致河道冲淤变化特性也有所不同。针对此问题,基于Delft3D FM软件,选取了4场典型洪水过程,对汾河二坝—义棠段进行二维水沙数值模拟,在设定的4种液压坝群运行方案下,研究了液压坝群对河道冲淤变化特性的影响,为液压坝群在汾河中游的调度提供参考。研究结果表明:对于4场洪水情况下方案1—方案4,在模拟时段末,14#坝的坝前水深分别约为0.5~1.4、1.3~2.8、0.6~1.8、0.5~1.6 m,坝后局部流速最大分别约为1.5~2.5、2.0~6.0、2.0~3.0、2.0~2.5 m/s;从河道冲淤变化统计来看,泥沙冲淤范围分别约为-0.5~1.4、-0.3~1.9、-0.5~1.6、-0.5~1.5 m;河道泥沙淤积总量变化范围分别约为(4.9~242.3)万、(5.3~323.5)万、(5.0~252.5)万、(4.95~245.1)万m^(3)。所得结论如下:液压坝全部运行时对水动力场和床面高程变化影响最大;4场洪水情况下,液压坝全部运行时泥沙淤积量约为无坝运行时的1.08~1.36倍。

二代基因测序技术检测急性髓系白血病患者CRLF2、FLT3及C-KIT突变的价值

目的探讨二代基因测序技术检测急性髓系白血病患者细胞因子受体样因子2(CRLF2)、FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)及C-KIT突变的价值。方法选择2017年1月至2020年1月在我院接受治疗的78例急性髓系白血病患者为研究对象,采用二代基因测序技术检测CRLF2、FLT3及C-KIT突变情况。比较CRLF2、FLT3及C-KIT不同突变类型患者的临床参数;比较CRLF2、FLT3及C-KIT不同突变类型患者治疗≤2个疗程的完全缓解率和复发率。结果78例患者中CRLF2突变11例,突变率为14.10%,正常核型突变率高于异常核型,差异具有统计学意义(P<0.05);FLT3突变9例,突变率为11.54%,正常核型突变率高于异常核型,差异具有统计学意义(P<0.05);C-KIT突变6例,突变率为7.69%,正常核型突变率低于异常核型,差异具有统计学意义(P<0.05)。CRLF2不同突变类型患者的年龄、白细胞计数、血小板计数比较,差异具有统计学意义(P<0.05);FLT3不同突变类型患者的白细胞计数比较,差异具有统计学意义(P<0.05);C-KIT不同突变类型患者的血红蛋白水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。开展随访跟踪共计76例患者可评价干预效果,CRLF2不同突变类型患者治疗≤2个疗程的完全缓解率和复发率比较,差异无统计学意义(P>0.05);FLT3突变阳性患者治疗≤2个疗程的完全缓解率低于突变阴性患者,复发率高于突变阴性患者,差异具有统计学意义(P<0.05);C-KIT不同突变类型患者治疗≤2个疗程的完全缓解率比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-KIT突变阳性患者复发率高于突变阴性患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论急性髓系白血病患者CRLF2、FLT3及C-KIT突变较为常见,利用二代基因测序技术开展上述基因突变检测有助于指导临床治疗及预后评估。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合FMS样酪氨酸激酶-3抑制剂对FLT3-ITD突变白血病细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)联合FMS样酪氨酸激酶-3(FLT3)抑制剂对FLT3-ITD突变的急性髓系白血病(AML)细胞系增殖抑制作用及其相关机制。方法 将西达本胺(Chidamide)和奎扎替尼(Quizartinib,AC220)以不同浓度单药或联合作用于MV4-11、MOLM-13细胞系48 h后,CCK8检测细胞增殖能力;Compusyn 1.0软件分析两药联合作用的协同效应;流式细胞计数法测定各组细胞凋亡率、增殖周期;蛋白质印迹法测定P53、Bcl-2、Bax、FLT3、磷酸化FLT3(p-FLT3)及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果 随西达本胺及奎扎替尼单药或联合作用浓度升高,对MV4-11及MOLM-13细胞系的48h增殖抑制率均显著升高(P<0.05),并且两药具有协同抑制效应(均CI值<1)。在奎扎替尼1.0 nmol/L+西达本胺1.0μmol/L作用48 h后,细胞凋亡率MV4-11细胞株为31.697%±5.648%,MOLM-13细胞株为18.500%±1.751%,细胞周期阻滞于G0/G1期的比例MV4-11细胞株为78.493%±1.285%,MOLM-13细胞株为89.850%±1.072%,两药联合较奎扎替尼1.0 nmol/L或西达本胺1.0μmol/L单药使用可明显促进MV4-11及MOLM-13细胞系的凋亡和周期阻滞(P<0.05)。奎扎替尼1.0 nmol/L联合西达本胺1.0μmol/L治疗较单药能更明显上调P53、BAX促凋亡蛋白,下调p-FLT3、抗凋亡蛋白BCL-2及PI3K/AKT信号通路关键下游因子p-AKT。结论 西达本胺与奎扎替尼联合应用可通过下调p-FLT3、p-AKT、Bcl-2蛋白表达,上调P53、Bax蛋白表达,促进FLT3-ITD突变白血病细胞系的凋亡及周期阻滞,抑制AML细胞的增殖活性。

Flt3配体体内扩增肺树突细胞对多器官功能障碍综合征模型小鼠的免疫治疗作用观察

目的探讨fms样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)体内扩增肺间质树突细胞(DCs)对多器官功能障碍综合征(MODS)的免疫治疗作用。方法雄性BALB/c小鼠80只,随机均分为正常对照组、Flt3L对照组、MODS模型组和Flt3L治疗组。腹腔注射酵母多糖复制MODS模型,Flt3L治疗于MODS模型复制后24h开始连续9d每天皮下注射(10μg/次)。观察各组动物病死率。12d后处死动物,取肺组织,用密度梯度离心法分离肺单个核细胞,流式细胞术检测DCs亚群数量百分比;全自动生化分析仪检测外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、肌酐、血糖、脂肪酶和淀粉酶水平;光镜观察肺组织病理学变化。结果正常对照组和Flt3L对照组无死亡发生;Flt3L治疗组病死率明显低于MODS模型组(P<0.05)。Flt3L对照组肺髓系CD11c+CD11b+、类浆系CD11c+CD45R/B220+和CD11c+I-Ad+DCs亚群比例明显高于正常对照组及MODS模型组(P<0.05),且正常对照组明显高于MODS模型组(P<0.05),而Flt3L治疗组三个DCs亚群比例较MODS模型组显著上升(P<0.05)。与正常对照组和Flt3L对照组比较,MODS模型组血清ALT、AST、脂肪酶、淀粉酶和肌酐水平明显升高,血糖水平明显下降(P<0.05),而与MODS模型组比较,Flt3L治疗组血清ALT、AST和肌酐水平明显下降,血糖水平明显上升(P<0.05),肺组织损伤明显减轻。结论 Flt3L可通过刺激肺DCs从而明显减轻MODS模型肺组织损伤,改善脏器功能,降低实验动物的病死率,具有潜在的免疫调节治疗作用。

FMS样酪氨酸激酶3配体在急性髓系白血病患者血清中的表达及其临床意义

目的:分析血清FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3 ligand,Flt3L)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达水平及其临床意义。方法:选取2017年10月至2019年1月本院收治的200例AML患者为研究对象,分为初治组(n=124)、缓解组(n=39)和复发组(n=37)。用酶联免疫吸附试验检测入组时血清Flt3L表达水平。对初治组患者进行为期1年的随访,根据生存预后分为存活组(n=96)和死亡组(n=28)。AML患者不良生存预后的影响因素用Cox多因素分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Flt3L预测预后的价值。结果:初治组血清Flt3L质量浓度为(83.09±12.09)pg·ml^(-1),复发组为(91.76±20.23)pg·ml^(-1),均低于缓解组的(133.08±30.24)pg·ml^(-1)(均P<0.001),而初治组与复发组差异有统计学意义(P<0.001)。存活组血清Flt3L质量浓度为(88.07±11.82)pg·ml^(-1),高于死亡组的(78.07±10.09)pg·ml^(-1),但差异无统计学意义(t=1.372,P>0.05)。血清Flt3L(OR=0.897)是AML患者死亡的独立影响因素(P<0.05)。血清Flt3L预测AML患者1年内死亡的ROC曲线下面积(AUC)为0.823(P=0.031);当血清Flt3L截断值为75.08 pg·ml^(-1)时,约登指数最大(0.625),此时血清Flt3L预测AML患者死亡预后的价值最高,灵敏度为84.15%,特异度为79.83%。结论:血清Flt3L对AML患者病情及预后早期评价有一定价值。

FLT3-ITD-mt和FLT3-ITD-wt初治原发AML患者外周血象和DNMT3A基因突变的临床特征对比

目的:比较初治原发急性髓系白血病(AML)FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)-内部串联重复野生型(ITD-wt)与突变型(FLT3-ITD-mt)患者临床特征的差异。方法:收集并回顾性研究本院2016年1月至2018年12月收治的108例初治原发AML患者的临床资料,根据是否伴有FLT3-ITD基因突变分为2组:A组(FLT3-ITD-wt)84例,B组(FLT3-ITD-mt)24例。对2组患者均行细胞形态学、分子生物学及免疫学分型检查,比较2组患者外周血红细胞数(RBC)、血红蛋白(Hb)水平、血小板数(Plt)、白细胞数(WBC)等血常规检查,骨髓原始细胞比例,FAB分型结果,融合基因分析及基因突变的发生情况等差异。结果:B组外周血Hb和RBC水平相比A组明显下降(P<0.05),WBC计数明显升高(P<0.01);而2组患者外周血Plt计数和骨髓原始细胞比例则无明显差异(P>0.05)。2组患者FAB分型结果无明显差异(P>0.05)。MLL-ELL、CBFβ-MYH11、PML-RARA及AML-ETO是初治原发AML患者的常见融合基因,而2组患者常见融合基因占比无明显差异(P>0.05)。本组108例患者共检出27种基因突变(包括FLT3-ITD在内);B组DNMT3A基因突变检出率相比A组明显升高(P<0.05);而2组其它基因突变检出率无明显差异(P>0.05)。结论:FLT3-ITD-wt与FLT3-ITD-mt初治原发AML患者临床特征存在一定差异;与FLT3-ITD-wt比较,FLT3-ITD-mt的初治原发AML患者外周血Hb与RBC较低,而外周血WBC较高,且DNMT3A基因突变较多见。

紫草素对人白血病MV4-11细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的:探讨紫草素对FMS样酪氨酸激酶3受体基因内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变急性髓系白血病(AML)MV4-11细胞的增殖抑制和促凋亡作用,并初步阐明其分子机制。方法:生长状态良好的MV4-11细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组和不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol·L-1)紫草素组,处理细胞24和48 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC 50)。MV4-11细胞分为空白对照组、DMSO组和不同浓度(0.25、0.50和1.00μmol·L-1)紫草素组,处理细胞48和72 h,采用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记法检测各组细胞增殖率。MV4-11细胞分为DMSO组和不同浓度(0.702、1.404和2.808μmol·L-1)紫草素组,处理细胞48 h,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。MV4-11细胞分为DMSO组和不同浓度(0.351、0.702和1.404μmol·L-1)紫草素组,处理细胞48 h,Real-time PCR法检测各组细胞中微小RNA-155(miR-155)的表达水平。结果:CCK-8法和CFSE法检测,与DMSO组比较,不同浓度紫草素组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),增殖率明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;24和48 h时IC 50分别为1.743和1.404μmol·L-1。流式细胞术检测,与DMSO组比较,不同浓度紫草素组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),且呈剂量依赖性。Real-time PCR法检测,与DMSO组比较,不同浓度紫草素组细胞中miR-155表达水平明显降低(P<0.01),1.404μmol·L-1紫草素组细胞中miR-155表达水平降低超过75%。结论:紫草素对人FLT3-ITD突变AML MV4-11细胞具有增殖抑制和促凋亡作用,并可下调miR-155表达,提示紫草素可能作为FLT3-ITD突变AML的潜在治疗药物之一。

Flt3配体增强HCV核心-包膜E2融合基因DNA疫苗诱导的细胞免疫应答

建立一种可高效诱导细胞免疫应答 ,对丙型肝炎病毒 (HCV)感染可能起预防和治疗作用的DNA疫苗。将小鼠Flt3配体 (FL)信号肽和胞外段cDNA插入结构优化的HCV核心 包膜E2融合抗原DNA疫苗pST CE2t,构建成pST CE2t FL。将pST CE2t FL转染COS7细胞 ,Westernblot和ELISA检测表明该重组质粒能表达HCV核心 包膜E2融合抗原和可溶性小鼠FL。分别将pST CE2t、pST CE2t FL和空载体pCI neo肌肉注射接种BALB c小鼠 ,检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果表明两种DNA结构均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答 ,但pST CE2t诱导的体液免疫应答强于pST CE2t FL ,而后者诱导的细胞免疫应答明显强于前者。FL能明显增强HCV核心 包膜E2融合抗原DNA疫苗诱导的细胞免疫应答 ,对于发展HCV预防和治疗性疫苗有潜在的应用价值。

儿童急性髓系白血病FLT3-ITD突变分析及其临床意义

目的探讨FLT3-ITD在AML患儿的临床意义。方法收集我院2013年-2015年收治的45例AML患儿骨髓样本,提取全基因组DNA,采用PCR扩增产物克隆测序法检测FLT3-ITD基因突变情况,解析序列,整理并分析其插入的重复序列,同时分析FLT3-ITD阳性患儿的临床特征及对预后的影响。结果 45例初诊AML患儿中,FLT3-ITD突变阳性患儿4例(8.9%),表现为杂合突变和纯合突变,解析出4条插入序列,插入长度范围为18-99bp。阳性患儿伴染色体正常核型1例,异常核型3例,突变型患儿白细胞及骨髓原始细胞比例高于野生型患儿,差异有统计学意义,但在性别、年龄、血红蛋白、血小板无显著差异。结论 FLT3-ITD突变检测有助于急性白血病基因分型,是儿童AML预后不良的一个危险因素,可作为预后的分子标志物。

构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。

急性髓系白血病患者FLT3基因ITD、TKD突变观察及其临床分析

目的观察急性髓系白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变、酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变的发生情况,分析并比较双突变患者与单突变患者的临床资料。方法 AML患者432例,取新鲜骨髓分离单个核细胞,提取DNA,采用PCR法对FLT3基因第14、15外显子多发突变区及第20外显子突变区进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳,分析ITD、TKD突变情况。收集并比较FLT3基因ITD、TKD双突变AML患者与单突变患者的性别、年龄、白细胞、血红蛋白、血小板、外周血原始细胞比例、骨髓原始细胞比例、治疗缓解情况等资料。结果 432例AML患者中共检出FLT3基因突变102例。TKD、ITD双突变11例;FLT3基因单突变91例,其中ITD突变60例,TKD突变31例。FLT3基因ITD、TKD双突变与单突变患者的性别、年龄、白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例、外周血原始细胞比例及治疗缓解情况差异均无统计学意义。结论少数AML患者可同时发生FLT3基因ITD、TKD突变,FLT3基因双突变患者与单突变患者临床特征无明显差异。

血浆游离DNA检测FLT3-ITD突变及ITD特征对急性髓细胞白血病诊断的意义

目的探讨在血浆游离DNA中检测Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复序列(ITD)突变及ITD特征,为急性髓细胞白血病(AML)无创性诊断、个体化的分子靶向治疗提供新的策略。方法提取88例初诊AML患者和40例对照者(体检健康者和血液系统良性疾病患者)的血浆游离DNA及骨髓细胞DNA并检测其浓度;PCR检测血浆及骨髓DNA中FLT3-ITD突变的表达水平;毛细管电泳法检测FLT3-ITD阳性患者血浆游离DNA和骨髓细胞DNA中的ITD数量,并进行统计学分析。结果初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度为203.85(115.8,1 165.7)μg/L,而体检健康者和血液系统良性疾病患者分别为4.60(3.21,5.79)μg/L和9.26(5.23,16.77)μg/L,三组间差异有统计学意义(K-Wχ2=84.64,P<0.05);初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度显著高于血液系统良性病变患者组及体检健康组(Z分别为-7.10和-6.96,P均<0.05),而体检健康者与血液系统良性疾病患者间、FAB分型不同的初诊AML患者间的血浆游离DNA浓度差异无统计学意义(Z=-1.56,P>0.05;F=0.073,P>0.05);FAB各型别中M2型FLT3-ITD突变率最高为30.77%(12/39),其次为M4型(20%,1/5),M5型(20%,2/10)和M3型(12%,3/25),其余型别未见突变;发生FLT3-ITD突变18例,与骨髓细胞DNA检测结果一致,13例患者在毛细管电泳中出现一条ITD条带峰,骨髓细胞结果与血浆结果一致;5例出现多条ITD条带峰,其骨髓细胞结果只有2例一致。结论监测血浆游离DNA中FLT3-ITD突变及ITD数量,可能会成为AML个体化诊断的新分子标志物。