不同熔解曲线分析技术在犬细小病毒基因分型中的比较

本试验旨在建立基于聚合酶链式反应(PCR)技术的犬细小病毒2型(CPV-2)2种不同熔解曲线技术基因分型方法,并通过比较其熔解温度差异(△Tm)评价不同方法对犬细小病毒单核苷酸多态性(SNP)位点的分型鉴别能力。结果显示,探针熔解曲线聚合酶链式反应(FMCA-PCR)方法中不同SNP位点之间熔解温度差异(△Tm)均大于3℃,而在高分辨率熔解曲线聚合酶链式反应(HRM-PCR)方法中熔解温度差异(△Tm)只有0.2~0.6℃。临床30份CPV-2核酸样本基因分型结果显示,FMCA-PCR方法的准确率为100%;而HRM-PCR方法准确率为96.6%(未形成杂合子前)。虽然HRM-PCR方法中不同SNP位点之间熔解温度差异较小,影响其基因分型结果,但通过杂合子HRM分析后可提高该方法的准确率。本试验结果表明,基于PCR方法的2种不同熔解曲线基因分型技术均具有较好的SNP位点分型鉴别能力,为熔解曲线基因分型技术在兽医临床中的应用提供实际参考依据。