猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验初探

为推广猪瘟、猪口蹄疫和高致病性猪蓝耳病3种疫苗有效免疫,在前期开展"猪瘟疫苗(脾淋源)、猪O型口蹄疫疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验"确定新的免疫程序基础上进行扩大试验,进一步验证猪瘟疫苗1头份免疫剂量足以产生可靠的免疫保护;先免疫接种猪瘟疫苗,1周后免疫接种口蹄疫和高致病性猪蓝耳病疫苗,二者有明显的协同促进作用,适宜在农村散户中使用;3种疫苗同时分点注射,相互之间干扰较大,猪瘟病毒抗体产生时间推迟,不宜推广使用。

O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

分别按一次免疫、首免后第15 d加强免疫和首免后第60 d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15 d加强免疫牛和第60 d加强免疫牛抗体水平较高,50%保护牛所占比例分别为56.3%和63.1%,完全受保护的牛所占比例分别为34.3%和29.5%。第60 d加强免疫牛的保护率要高于第15 d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明,首免后第60 d加强免疫是最理想的免疫程序。

口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果，按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准，对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示，4批疫苗均对靶动物和实验动物安全，无任何毒副反应；对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4．73、6．84和8．10PD50／头份；一次接种的有效免疫期达6个月；2～8℃下的疫苗保存期为12个月；适宜的免疫剂量为，6月龄以上牛每头3．0mL，6月龄以下牛每头1．5mL。该疫苗对接种动物安全，免疫效果良好，一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。

猪口蹄疫O型灭活疫苗PD_(50)效检攻毒剂量试验

采用PD50 效检方法 ,对 0 30 4 0 4 1 2批猪口蹄疫O型灭活疫苗 (I型苗 )进行不同攻毒剂量的PD50 检测。结果表明 ,分别用 5 0 0ID50 、10 0 0ID50 、2 0 0 0ID50 和 4 0 0 0ID50 的病毒进行攻毒 ,疫苗每头份分别含 5 .2、3.6、2 .1和 1.0个PD50 。该项试验的攻毒毒株ORMF8的ID50 为 10 - 7.0 /2mL ,MID为10 - 6 .0 /2mL。

西藏牦牛O型、AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫抗体效价分析

为调查口蹄疫疫苗对西藏牦牛的免疫保护情况,应用口蹄疫液相阻断ELISA方法对随机选取的西藏五区一市844头牦牛的血清进行O型、AsiaⅠ型口蹄疫抗体水平检测。结果显示,西藏地区牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型疫苗抗体具有50%以上保护力的比例分别为83.44%、71%,口蹄疫疫苗免疫状况良好,但西藏同一地区不同县、市的牦牛口蹄疫疫苗免疫情况存在较大差异。

猪口蹄疫O型灭活疫苗PD_(50)效检攻毒方式探索

用10000TCID50的OR/80株F13细胞毒或用10000LD50的OR/80株乳鼠组织毒(ORMF8),通过肌肉注射途径、蹄踵球部或趾间皮内注射途径接种O型口蹄疫抗体阴性架子猪进行攻毒试验,三种途径均不能使试验猪产生规律性发病。

天水市2014-2017年牛、羊口蹄疫O型和亚洲I型免疫抗体检测结果分析

口蹄疫(FMD)属于高度接触性传染病,也是农业部强制免疫病种之一。天水市对牛、羊进行了全覆盖免疫接种。为掌握该病的免疫效果,我市采取液相阻断ELISA试验方法检测免疫抗体水平。结果显示,2014-2017年全市七个县区免疫抗体合格率全年保持在70%以上,达到了农业部的要求,另外口蹄疫O型抗体普遍高于亚洲I型抗体。

天水市2014-2017年猪O型口蹄疫免疫抗体检测与结果分析

口蹄疫(FMD)被世界动物卫生组织列为A类传染病之首,我国将其列为一类动物疫病,也是农业部强制免疫病种之一。天水市对猪进行了全覆盖免疫接种。为掌握该病的免疫效果,我市采取正向间接血凝试验(IHA)检测猪o型口蹄疫免疫抗体水平。结果显示,2014-2017年全市七个县区免疫抗体总合格率全年保持在80%以上,高于农业部的要求,个别县区在单一年份出现了抗体不达标现象。

羊同时注射布病M5菌苗与口蹄疫疫苗副反应观察

在甘肃河西3市6个乡镇选择90日龄以上的羊198 080只,其中怀孕羊84 160只,单独注射布氏菌病活疫苗(M5株)64 350只,同时注射布氏菌病活疫苗(M5株)和牛羊口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗133 730只,结果 50 d内死亡428只,流产4 460只。表明布病M5疫苗毒株毒力强,不适合用于免疫防控,更不能与口蹄疫疫苗同时注射。

猪口蹄疫O型病毒ORMF8测毒试验

用中国农科院兰州兽医研究所统一提供的猪口蹄疫O型灭活疫苗效检攻毒用种毒ORMF8,在3个企业同时用架子猪进行测毒,分别测得猪的最小感染量(MID)和猪的半数感染量(ID50)。3家单位测得的MID和ID50分别为10-6.0/2mL,10-8.2/2mL;10-7.0/2mL,10-7.0/2mL;10-6.0/2mL,10-7.5/2mL。将所有实验动物统计计算,MID约为10-6.3/2mL,ID50约为10-7.6/2mL。从这些数据得出,该试验1MID约为20ID50。

应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒

建立了一种适用于检测动物（猪、牛、羊）组织（肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮）和牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫（ＦＭＤ）病毒核酸（ＲＮＡ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。引物对是人工合成的两条２０ｍｅｒ寡核苷酸片段，它们的序列相应于ＦＭＤ病毒结构蛋白ＶＰ１基因后２／３区段，在４个血清型之间基本一致（保守）。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ具有良好的特异性，属该４个血清型的各个毒株都获得了预计长度的ＤＮＡ片段；而相关的小ＲＮＡ病毒科的猪水泡病（ＳＶＤ）和柯赛奇Ｂ５（Ｃｏｘ．Ｂ５）病毒（特异性对照），及未感染的细胞培养物和动物组织（空白对照）都是阴性。与常规检测方法相比，该ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度提高６－１２倍，最高可检测２０ＴＣＩＤ５０（细胞毒）或０．１６～０．３２ＬＤ５０（组织毒）的病毒量，二次扩增还可提高检测灵敏度１００倍。因为直接利用组织样品，检测试验快速简便，可在２４小时内获得结果。应用该方法已检测了２３２份组织样品和５８份Ｏ－Ｐ液样品。

国内现有猪口蹄疫O型灭活疫苗对2010年流行毒株的抵抗力

在2010年上半年,猪O型口蹄疫不断发生,作为国内几个生产厂家的猪口蹄疫现用疫苗种毒的提供者,我组进行了猪源流行毒对该种毒灭活疫苗免疫猪的攻毒保护试验及观察。结果如下:1)、猪源流行毒致猪发病速度慢。猪源流行毒接种猪后,致猪发病的时间在3～5天,而疫苗株致猪发病时间是接种后2～3天;2)、该疫苗毒株能有效抵抗猪源流行毒的攻击,PD50大于6;3)、免疫保护和ELISA抗体水平没有线性相关性;4)、免疫保护与140S抗原量有相关性。

2021年河南省O型口蹄疫免疫效果评估

为了解河南省O型口蹄疫(FMD)的免疫抗体水平,评估其免疫效果,2021年在河南省规模场、屠宰场与散养户,随机采集785场次22879份血清样品,采用ELISA方法检测O型FMD免疫抗体,并对检测结果进行不同畜种、不同场点类型、不同季节、不同行政区域的统计分析。结果显示:2021年全省O型FMD抗体免疫合格率为80.30%,其中猪、牛、羊抗体免疫合格率分别为79.09%、92.48%、72.26%。猪场中,种猪场、商品代场、屠宰场O型FMD抗体免疫合格率分别为85.24%、82.57%、65.56%;牛场中,种牛场、商品代场、屠宰场、散养户O型FMD抗体免疫合格率分别为96.72%、91.75%、94.17%、100%;羊场中,种羊场、商品代场、散养户O型FMD抗体免疫合格率分别为78.63%、72.37%、69.46%。春、夏、秋、冬季的O型FMD抗体免疫合格率分别为79.42%、79.00%、80.58%、86.12%。18个地市中,有2个地市O型FMD抗体免疫合格率低于70%。结果表明:河南省O型口蹄疫整体免疫效果较好,但羊场免疫效果相对较差,尤其是散养户,免疫抗体合格率未达到70%,存在疫情发生风险。结果提示,需重点加强羊饲养场尤其是散养户的O型FMD免疫工作。

口蹄疫O型灭活疫苗对不同母源抗体仔猪血清中抗体及细胞因子水平的影响

为了解不同母源抗体水平对仔猪免疫后抗体消长的影响,以及免疫后细胞因子的变化,使用口蹄疫O型灭活疫苗对40头初生仔猪进行免疫,并于初次免疫后28 d二次免疫,采用液相阻断ELISA方法检测血清中抗体滴度,双抗体夹心ELISA法检测血清IL-8和IL-12水平。结果显示,母源抗体水平越高对于初次免疫后仔猪抗体影响越大;二次免疫后抗体水平可长时间维持较高水平。初次免疫后14 d^28 d,血清中IL-8和IL-12水平上升极显著(P<0.01);二次免疫后14~28 d,IL-8水平上升极显著(P<0.01),IL-12水平上升不显著(P>0.01)。试验表明,母源抗体水平是影响仔猪免疫后抗体消长的因素之一;口蹄疫O型灭活疫苗能有效提高血清中IL-8和IL-12水平。

2017年云南地区部分猪场主要疫病病原及血清学检测与分析

为了了解云南部分地区猪场2017年主要疫病的流行情况,试验采用ELISA、RT-PCR及PCR方法对云南省10个市（州） 21个猪场送检的3 143份血样及205份病料进行6种抗体和4种抗原检测。结果表明：猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病gE病毒、猪伪狂犬病gB病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫O型病毒抗体监测阳性率分别是84.73%、73.56%、13.78%、78.87%、96.95%、91.05%,猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病gE病毒、猪圆环病毒2型（除猪口蹄疫O型病毒）的阳性检出率分别是4.00%、18.31%、17.95%、17.86%。不同季度、区域猪群的抗体阳性率有差异,猪瘟病毒免疫抗体总体效果较好,但仍有猪瘟散发现象;猪蓝耳病、猪圆环病毒2型感染仍然普遍;猪伪狂犬野毒感染阳性率有上升趋势;猪口蹄疫O型病毒的抗体水平很好。说明这猪蓝耳病、猪圆环病毒病、猪伪狂犬病仍然是防控的重点。

2018-2020年山西省长子县O型口蹄疫免疫效果评估

为掌握山西省长子县O型口蹄疫的免疫抗体水平,评估其免疫效果,2018—2020年在全县14个乡镇的规模场和散养户,随机采集2258个场户的12186份血清样品,采用阻断ELISA法检测口蹄疫免疫抗体,并对检测结果进行时间、群间和空间分布分析。结果显示:2018—2020年全县平均场户免疫合格率为81.18%,个体免疫合格率为85.21%。其中:2020年抗体合格率最低,场户和个体免疫合格率分别为70.27%和79.78%,与其他年份差异显著(P<0.05);规模场场户合格率和个体免疫合格率分别为87.25%和89.56%,散养户分别为78.96%和82.39%,规模场显著高于散养户(P<0.05);王峪、横水2个乡镇免疫效果较好,个体免疫合格率均在90%以上,而大堡头、碾张、色头3个乡镇免疫效果较差,个体免疫合格率为70%~80%,差异显著(P<0.05)。结果表明:长子县O型口蹄疫整体免疫效果较好,达到了国家要求的70%以上标准;但抗体水平不稳定,且存在一定的地区和场群差异,散养户和部分乡镇免疫水平偏低,存在发生疫情风险。结果提示,长子县可依据地区和场群不均衡的抗体水平分布特点,制定有针对性的免疫措施,分类指导、梯度推进全县口蹄疫防控与净化工作。

2017—2019年山西省长子县猪瘟和猪口蹄疫血清抗体检测

为了解山西省长子县猪瘟和猪O型口蹄疫免疫状况,评估疫苗免疫效果,2017—2019年在全县14个乡镇的规模场和散养户中,随机采集1343场次的6592份猪血清样品,采用间接ELISA方法进行免疫抗体检测。结果显示:2017—2019年长子县猪瘟和猪O型口蹄疫抗体合格率分别为84.85%、88.14%,均达到了农业农村部规定的70%以上的要求;色头镇抗体水平最低,分别为75.97%、76.39%,其他乡镇大多在80%以上;规模场的抗体合格率(86.32%、91.99%)高于散养户(84.12%、86.25%),差异均显著(P<0.05)。结果表明,长子县猪瘟和猪O型口蹄疫整体免疫效果较好,但仍需持续加强免疫和抗体检测,有针对性地“分区域、按场点”开展猪瘟和猪口蹄疫防控工作。

猪瘟、蓝耳病及猪O型口蹄疫母源抗体消长规律

为了研究猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫母源抗体的消长规律,制定科学合理的免疫程序。本试验利用ELISA抗体检测试剂盒,对仔猪0、7、14、21、28、35、42、49、56日龄的猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫母源抗体分别进行检测。结果表明仔猪猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫哺乳前抗体水平均与阴性对照相当,抗体为0,7日龄时各疾病抗体均达到最高水平;猪瘟抗体水平在28日龄时明显下降;猪高致病性蓝耳病35日龄时抗体水平明显下降;仔猪O型口蹄疫14日龄抗体明显下降。猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫的母源抗体具有不同消长规律,为临床制定合理的首免日龄提供科学依据。

猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗组合与猪口蹄疫O型灭活苗同时分点免疫效果评价

推广猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗组合与猪O型口蹄疫灭活苗同时分点免疫(三苗两点同步免疫)技术,免疫45 d后随机对规模养猪场及部分散养户68头猪进行了免疫效果评价。结果表明,三苗两点同步免疫临床上无严重的不良反应,且免疫后抗体有效保护率均达70%以上,该技术可在基层动物防疫中大力推广应用。

2020—2022年湖南省永州市零陵区规模养殖场O型口蹄疫免疫效果评估

为掌握湖南省永州市零陵区规模场口蹄疫免疫效果,2020—2022年春防、秋防期间,在辖区内13个乡镇的规模场,采集337个场次的4301份血清样品,采用阻断ELISA法检测口蹄疫免疫抗体,并对检测结果进行时间、群间和空间分布分析。结果显示:2020—2022年全区O型口蹄疫平均场免疫合格率为84.27%,平均个体免疫合格率为87.17%,且合格率呈逐年上升趋势。牛场场户免疫合格率和个体免疫合格率均最高,分别为88.89%和90.04%,其次是猪场,分别为85.64%和89.10%,羊场最低,仅为77.78%和79.75%,其中羊场与牛场的场户免疫合格率差异有统计学意义(P<0.05),羊场与猪场(P<0.05)、牛场(P<0.01)的个体免疫合格率差异均有统计学意义;黄田铺和接履桥2个乡镇的免疫效果最好,免疫合格率均达到90%以上,而凼底和水口山则欠佳,免疫合格率仅略高于70%,差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明:零陵区规模养殖场O型口蹄疫整体免疫效果较好,但存在一定的地区和畜群差异。结果提示,应持续加强对养殖场的免疫技术指导和宣传培训工作,强化日常监测,做好羊群的及时补免工作,使全区口蹄疫免疫合格率保持在较高水平,防范疫情发生。