FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复序列突变阳性急性髓系白血病研究进展

FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复序列（FLT3-ITD）突变是急性髓系白血病（AML）中常见的突变类型,其突变与AML的发生、发展及不良预后关系密切.FLT3-ITD突变阳性AML患者常规化学治疗预后差,复发率高,异基因造血干细胞移植对该类患者疗效不一,索拉非尼等靶向治疗及不同治疗方式的联合治疗的临床前及临床试验已经开展且已初见成效.文章就FLT3-ITD突变在AML中的临床意义及对该类患者治疗的最新进展作一综述.

伴fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复突变的急性早幼粒细胞白血病患者初次诱导临床特点研究

目的通过研究fms样酪氨酸激酶3(fms-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者初次诱导过程中的临床特征,为探索FLT3-ITD突变的APL患者更有效的治疗提供思路。方法回顾性分析18例初发APL患者的临床资料,将患者分为基因突变组(8例,其中2例在诱导中死亡)和非基因突变组(10例)。观察两组患者诱导前的白细胞(white blood cell,WBC)计数、诱导中WBC计数峰值、维甲酸综合征(retinoic acid syndrome,RAS)发生率、弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)发生率,以及完全缓解(complete response,CR)所需时间等指标。结果基因突变组与非基因突变组诱导前WBC计数分别为16.73(1.30,20.30)×10^(9)/L和2.94(0.60,3.70)×10^(9)/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。WBC计数峰值分别为(39.21±14.28)×10^(9)/L和(28.15±19.40)×10^(9)/L,达峰时间分别为(8.5±2.5)和(4.8±2.0)d,两组间差异均无统计学意义(P值均>0.05);RAS发生率分别为4/6和3/10;DIC发生率分别为4/8和2/10;达到CR时间分别为(30.0±1.63)和(27.6±6.7)d,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论FLT 3-ITD突变的APL患者在初次诱导治疗过程中不良事件发生率高、程度重,提示FLT 3-ITD是APL预后不良因素。

索拉非尼对FMS样酪氨酸激酶3-基因内部串联重复突变急性髓系白血病患者的疗效观察

目的分析索拉非尼对携带FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复突变(Fms-like tyrosine kinase 3-internal tandem duplication mutation,FLT3-ITD)急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者的疗效和安全性。方法回顾性分析2012年1月-2018年4月解放军总医院第一医学中心收治的连续的初治FLT3-ITD阳性AML患者(M3型除外),第1疗程诱导化疗中未应用索拉非尼并且1个疗程结束后未缓解,共计42例。根据患者后续治疗是否应用索拉非尼分为索拉非尼观察组和无索拉非尼对照组,比较两组化疗后的完全缓解率(complete remission,CR)、总生存率(overall survival,OS)及无复发生存(relapse-free survival,RFS),并评估不良事件。结果观察组15例,对照组27例,两组基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。观察组与对照组的完全缓解率分别为73.3%、40.7%,差异有统计学意义(P=0.043)。观察组1年总生存率及1年无复发生存率均高于对照组(1年总生存率:53.3% vs 25.9%;1年无复发生存率:54.5% vs 18.2%),但差异无统计学意义(P>0.05)。两组不良反应的类型及发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论索拉非尼安全性较好,可以改善FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者完全缓解率,为患者异基因造血干细胞移植争取时机。

索拉非尼在治疗Fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复突变阳性急性髓系白血病中的临床分析

目的分析伴有Fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复(FLT3-ITD)阳性急性髓系白血病(AML)患者的临床特征及预后,探析索拉非尼在该类白血病中的治疗效果。方法回顾性分析2015年6月至2018年6月该院40例初治伴FLT3-ITD突变的AML患者的临床资料,分析该类患者发病时的临床特征,并对比分析联合或不联合索拉非尼治疗的疗效,且进一步观察对于初治不缓解患者加用索拉非尼的治疗效果。结果40例伴FLT3-ITD突变的AML患者中,M5型所占比例最高(50%),外周血白细胞计数中位数为88.9×10^9/L,初治高白细胞计数患者占90%,骨髓原始细胞中位数0.718。40例患者初治总诱导缓解率为57.50%,联合索拉非尼诱导缓解率为83.33%,单纯化疗诱导缓解率为36.36%,差异具有统计学意义(P<0.05),14例单纯化疗组初治不缓解病人有10例患者加用索拉非尼再次诱导治疗,其中7例达完全缓解,2例部分缓解,1例不缓解。所有患者口服索拉非尼均能耐受。结论伴有FLT3-ITD突变的急性髓系白血病,通常初发时高白细胞计数,骨髓原始细胞负荷高,常规诱导缓解率低,预后差,而索拉非尼能明显改善该类白血病的诱导缓解率,能够改善患者生存时间,值得临床应用。

急性髓系白血病患者FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复突变的检测及其临床意义

目的 分析急性髓系白血病（AML）患者骨髓FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复（FLT3／ITD）突变情况.方法 采用聚合酶链反应方法检测96例初发AML患者FLT3／ITD突变,分析FLT3／ITD阳性患者的临床特征.结果 96例AML患者中FLT3／ITD突变18例（18.8％）.其中M22例,M3 11例,M42例,M53例.FLT3／ITD阳性AML患者初发时外周血白细胞计数中位数为18.0×109／L（3.6× 109～ 137.6×109/L）,FLT3／ITD阴性AML患者为6.3×109/L（4.5×109 ～ 113.0×109/L）,两组比较差异有统计学意义（t=3.04,P＜0.05）.FLT3／ITD阳性者随访16例,中位随访时间10个月（6～ 15个月）,13例处于第1次完全缓解.诱导缓解率为81.3％（13／16）.结论 FLT3／ITD是AML患者常见的基因突变,FLT3／ITD阳性患者白细胞计数较高.

变性高效液相色谱技术定量检测急性髓细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变方法学的建立

目的:建立一种应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)相对定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因的内部串联重复(ITD)突变的方法。方法:根据FLT3-ITD突变基因多位于14外显子而设计引物,用聚合酶链反应(PCR)方法特异性扩增121例AML患者FLT3-ITD突变基因,再用DH-PLC技术相对定量检测FLT3-ITD等位基因突变的情况;与毛细管电泳法(CE)检测突变的结果对比进行该方法的有效性检验;最后与121例样品PCR扩增产物的测序结果进行对比。结果:经DHPLC分析后均能得到特征性的洗脱峰。121例样本中检测到FLT3-ITD突变阳性的样本13例,总阳性率为10.7%,阳性突变等位基因的比例不一,分布范围中位数为34.5%(11.4%-80.2%),为21-87 bp单个插入片段。阳性率和突变比例与CE方法检测结果相比较均无显著差异(P>0.05),并与121例样本FLT3-ITD扩增PCR产物基因测序结果一致。结论:成功建立了一种应用DHPLC相对定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变的方法。

化学法提取贮存骨髓涂片DNA检测Fms样酪氨酸激酶3基因突变预测急性髓系白血病患者预后

目的 探讨用化学法（苯酚：氯仿：异戊醇法）从贮存的骨髓涂片中提取微量DNA检测Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复（FLT3-ITD）突变情况,分析其对急性髓系白血病（AML）预后的预测价值.方法 采用化学法从58例-20℃贮存1~5年的骨髓涂片（AML 48例和非恶性血液病10例）中提取微量DNA,采用聚合酶链反应（PCR）技术检测患者FLT3-ITD突变情况.结果 48例初治AML患者中6例（12.5%）检测到FLT3-ITD,10例非恶性血液病患者中均未检测到FLT3-ITD.FLT3-ITD阳性AML患者初次诱导完全缓解（CR）率较FLT3-ITD阴性者低[0（0/6）比77.78%（21/27）,P=0.001],总生存时间短（x^2=7.274,P=0.007）.肝、脾大和FLT3突变是影响AML患者初次化疗CR的危险因素（OR=7.2,P=0.12;OR=36.3,P=0.10）.FLT3-ITD是初治AML患者不良预后的危险因素（RR=9.088,P=0.029）.结论 使用化学法提取贮存的AML患者骨髓涂片微量DNA可在临床中应用,是进行回顾性分子生物学研究的重要实验方法.从骨髓涂片中提取微量DNA检测FLT3-ITD可用于预测AML预后.

急性髓系白血病的FMS样酪氨酸激酶3靶向治疗

Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员FMS样酪氨酸激酶3（fms-like tyrosine kinase 3,FLT3）的内部串联重复（ITD）突变,是急性髓系白血病（AML）最常见的预后不良标志之一,见于约20％的AML患者，FLT3-ITD突变AML患者临床上具有高白细胞血症、诱导化疗死亡率高、化疗及造血干细胞移植后易复发、生存时间短等特点,治疗方法亟待提高，同时,野生型FLT3也常在其他预后不良的AML患者中高表达，因此,FLT3可作为AML的治疗靶点，近年来,FLT3抑制剂治疗AML的临床研究取得了可喜的突破,在一定程度上改善了预后不良的FLT3-ITD突变AML患者的预后，我们就FLT3基因突变AML的发病机制、FLT3抑制剂治疗AML的研究现状及发展方向予以综述。

FLT3-ITD-mt和FLT3-ITD-wt初治原发AML患者外周血象和DNMT3A基因突变的临床特征对比

目的:比较初治原发急性髓系白血病(AML)FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)-内部串联重复野生型(ITD-wt)与突变型(FLT3-ITD-mt)患者临床特征的差异。方法:收集并回顾性研究本院2016年1月至2018年12月收治的108例初治原发AML患者的临床资料,根据是否伴有FLT3-ITD基因突变分为2组:A组(FLT3-ITD-wt)84例,B组(FLT3-ITD-mt)24例。对2组患者均行细胞形态学、分子生物学及免疫学分型检查,比较2组患者外周血红细胞数(RBC)、血红蛋白(Hb)水平、血小板数(Plt)、白细胞数(WBC)等血常规检查,骨髓原始细胞比例,FAB分型结果,融合基因分析及基因突变的发生情况等差异。结果:B组外周血Hb和RBC水平相比A组明显下降(P<0.05),WBC计数明显升高(P<0.01);而2组患者外周血Plt计数和骨髓原始细胞比例则无明显差异(P>0.05)。2组患者FAB分型结果无明显差异(P>0.05)。MLL-ELL、CBFβ-MYH11、PML-RARA及AML-ETO是初治原发AML患者的常见融合基因,而2组患者常见融合基因占比无明显差异(P>0.05)。本组108例患者共检出27种基因突变(包括FLT3-ITD在内);B组DNMT3A基因突变检出率相比A组明显升高(P<0.05);而2组其它基因突变检出率无明显差异(P>0.05)。结论:FLT3-ITD-wt与FLT3-ITD-mt初治原发AML患者临床特征存在一定差异;与FLT3-ITD-wt比较,FLT3-ITD-mt的初治原发AML患者外周血Hb与RBC较低,而外周血WBC较高,且DNMT3A基因突变较多见。

急性髓系白血病患者FLT3基因ITD、TKD突变观察及其临床分析

目的观察急性髓系白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变、酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变的发生情况,分析并比较双突变患者与单突变患者的临床资料。方法 AML患者432例,取新鲜骨髓分离单个核细胞,提取DNA,采用PCR法对FLT3基因第14、15外显子多发突变区及第20外显子突变区进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳,分析ITD、TKD突变情况。收集并比较FLT3基因ITD、TKD双突变AML患者与单突变患者的性别、年龄、白细胞、血红蛋白、血小板、外周血原始细胞比例、骨髓原始细胞比例、治疗缓解情况等资料。结果 432例AML患者中共检出FLT3基因突变102例。TKD、ITD双突变11例;FLT3基因单突变91例,其中ITD突变60例,TKD突变31例。FLT3基因ITD、TKD双突变与单突变患者的性别、年龄、白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例、外周血原始细胞比例及治疗缓解情况差异均无统计学意义。结论少数AML患者可同时发生FLT3基因ITD、TKD突变,FLT3基因双突变患者与单突变患者临床特征无明显差异。

p73基因在核型正常的急性髓细胞白血病中的表达与临床相关性的研究

目的:检测p73在核型正常的急性髓细胞白血病(cytogenetically normal acute myeloid leukemia,CN-AML)中的表达情况,探讨p73与CN-AML病情进展的关系及临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测68例CN-AML患者的骨髓单个核细胞中p73表达,根据核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)突变(NPM1 mutation,NPM1mt)或FMS样的酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)内部串联重复序列(FLT3 internal tandem duplication,FLT3ITD)将CN-AML患者分为3个不同的危险组:低危组(NPM1mt/no FLT3ITD内部串联重复),高危组(FLT3ITD),中危组(排除NPM1mt/no FLT3ITD和FLT3ITD的病例),并进行相关分析。对患者化疗的效果应用完全缓解(complete remission,CR)率进行评估。结果:68例CN-AML有29.4%患者p73过度表达,p73过度表达与CR率呈负相关。p73过度表达的CN-AML患者在低危组有更好的临床预后,有33.3%的患者获得CR;相反,p73过度表达者在高危组有更差的临床预后,均未获得CR。结论:p73过度表达可能是预测CR率的负性指标。p73过度表达与根据NPM1mt和FLT3ITD进行CN-AML危险分组相一致,可能对CN-AML的危险分组有意义。

FLT3-ITD基因突变阳性与急性髓系白血病预后的关系

目的探讨分析急性髓系白血病患者群体中FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复(FLT3-ITD)基因突变阳性的发生情况及其与患者预后的关系。方法取208例急性髓系白血病患者的骨髓检验样本,运用聚合酶链反应(PCR)技术对患者FLT3-ITD基因突变的发生情况进行检验分析,运用R显带技术对患者进行制片和显带处理,观察急性髓系白血病患者群体中FLT3-ITD基因突变的发生情况及与患者临床预后的关系。结果 208例急性髓系白血病患者中,检出FLT3-ITD基因突变阳性43例,阳性检出率为20.67%(43/208)。43例FLT3-ITD基因突变阳性患者,其基因突变的实际分布区域具有依次首尾相接特点,且在突变序列内部有一定数量的脱氧核苷酸插入,呈现出框内突变的临床特征。FLT3-ITD基因突变阳性患者的完全缓解率25.58%(11/43)明显低于FLT3-ITD基因突变阴性患者的44.85%(74/165),差异有统计学意义(χ^2=5.2399, P<0.05)。结论在血液科临床诊断过程中, FLT3-ITD基因突变阳性与急性髓系白血病的预后有关,可为预后判断提供依据,并有利于指导治疗。

FLT3-ITD基因突变型和野生型初治原发急性髓细胞白血病的临床特征

目的分析FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复突变型(FLT3-ITDmt)和野生型(FLT3-ITD-wt)初治原发急性髓系白血病(AML)患者临床特征的差异。方法回顾性分析2015年1月至2016年12月河南省肿瘤医院血液科144例初治原发AML住院患者的临床资料,按是否有FLT3-ITD突变分组,其中FLT3-ITDmt组31例,FLT3-ITDwt组113例,根据临床特征数据的类型,分别采用t检验、秩和检验或卡方检验比较两组临床特征的差异。结果 FLT3-ITDmt组外周血WBC、RBC、HGB和DNMT3A基因突变与FLT3-ITDwt组比较,差异均有统计学意义(统计值分别为:705.000;-2.535;-2.290;5.715,均P<0.05)。结论相对于FLT3-ITDwt初治原发AML患者,FLT3-ITDmt初治原发AML患者有较高的外周血WBC,较低的RBC和HGB,更易伴DNMT3A基因突变。

蛋白磷酸酶C1-TEN在急性髓系白血病细胞中的表达及抑制FLT3-ITD对其表达的影响

目的:本研究旨在揭示急性髓系白血病(AML)细胞中具有C1结构域并与TENsin同源的蛋白磷酸酶(C1-TEN)的表达情况,并探讨中间串联重复突变FMS样酪氨酸激酶3(FLT3-ITD)抑制条件下C1-TEN的表达水平。方法:利用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)索拉菲尼、米朵妥林作用于AML细胞系HL-60细胞、MV4-11细胞,采用MTT实验评价AML细胞对TKI的敏感性;TKI对AML细胞FLT3活化作用及对C1-TEN表达的影响采用Western blot(WB)分析;CCK-8实验分析C1-TEN抑制对AML细胞活性的影响;WB、流式(FACS)检测细胞凋亡情况。结果:相比FLT3野生型(FLT3-WT)HL-60细胞,FLT3-ITD突变MV4-11细胞对TKI显著敏感(P<0.05)。WB结果显示,经TKI作用后MV4-11细胞的酪氨酸激酶FLT3活化较HL-60细胞显著下降(P<0.05)。与阴性对照组比较,TKI处理组MV4-11细胞C1-TEN表达显著下降,而HL-60细胞的变化不明显。C1-TEN抑制剂DHTS作用后,MV4-11细胞活性显著下降(P<0.05),且DHTS与TKI具有协同抑制作用。WB、FACS结果显示,DHTS处理组MV4-11细胞凋亡显著高于阴性对照,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究首次报道AML细胞C1-TEN表达情况,揭示FLT3-ITD能上调AML细胞C1-TEN表达,而抑制C1-TEN可通过细胞凋亡机制杀伤FLT3-ITD突变的AML细胞,因此提示该蛋白磷酸酶可能是FLT3-ITD下游分子,有望成为AML治疗的新靶点。

儿童急性髓系白血病FLT3-ITD突变分析及其临床意义

目的探讨FLT3-ITD在AML患儿的临床意义。方法收集我院2013年-2015年收治的45例AML患儿骨髓样本,提取全基因组DNA,采用PCR扩增产物克隆测序法检测FLT3-ITD基因突变情况,解析序列,整理并分析其插入的重复序列,同时分析FLT3-ITD阳性患儿的临床特征及对预后的影响。结果 45例初诊AML患儿中,FLT3-ITD突变阳性患儿4例(8.9%),表现为杂合突变和纯合突变,解析出4条插入序列,插入长度范围为18-99bp。阳性患儿伴染色体正常核型1例,异常核型3例,突变型患儿白细胞及骨髓原始细胞比例高于野生型患儿,差异有统计学意义,但在性别、年龄、血红蛋白、血小板无显著差异。结论 FLT3-ITD突变检测有助于急性白血病基因分型,是儿童AML预后不良的一个危险因素,可作为预后的分子标志物。

FLT3-ITD突变检测及其临床意义

Fms样酪氨酸激酶-3（fms-like tyrosine kinase-3,FLT3）是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员,在约20%-30%的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中FLT3基因中外显子14和15存在内部串联重复（FLT3 in-tema]tandemduplication，FLT3-ITD），近年来对于FLT3突变的检测、预后意义以及FLT3抑制剂的应用研究比较深入．本文对此作一综述。

稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定

构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长。然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞。收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况。207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长。双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证。慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增。同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况。通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型。

血浆游离DNA检测FLT3-ITD突变及ITD特征对急性髓细胞白血病诊断的意义

目的探讨在血浆游离DNA中检测Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复序列(ITD)突变及ITD特征,为急性髓细胞白血病(AML)无创性诊断、个体化的分子靶向治疗提供新的策略。方法提取88例初诊AML患者和40例对照者(体检健康者和血液系统良性疾病患者)的血浆游离DNA及骨髓细胞DNA并检测其浓度;PCR检测血浆及骨髓DNA中FLT3-ITD突变的表达水平;毛细管电泳法检测FLT3-ITD阳性患者血浆游离DNA和骨髓细胞DNA中的ITD数量,并进行统计学分析。结果初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度为203.85(115.8,1 165.7)μg/L,而体检健康者和血液系统良性疾病患者分别为4.60(3.21,5.79)μg/L和9.26(5.23,16.77)μg/L,三组间差异有统计学意义(K-Wχ2=84.64,P<0.05);初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度显著高于血液系统良性病变患者组及体检健康组(Z分别为-7.10和-6.96,P均<0.05),而体检健康者与血液系统良性疾病患者间、FAB分型不同的初诊AML患者间的血浆游离DNA浓度差异无统计学意义(Z=-1.56,P>0.05;F=0.073,P>0.05);FAB各型别中M2型FLT3-ITD突变率最高为30.77%(12/39),其次为M4型(20%,1/5),M5型(20%,2/10)和M3型(12%,3/25),其余型别未见突变;发生FLT3-ITD突变18例,与骨髓细胞DNA检测结果一致,13例患者在毛细管电泳中出现一条ITD条带峰,骨髓细胞结果与血浆结果一致;5例出现多条ITD条带峰,其骨髓细胞结果只有2例一致。结论监测血浆游离DNA中FLT3-ITD突变及ITD数量,可能会成为AML个体化诊断的新分子标志物。

FLT3-ITD急性髓系白血病的临床诊疗及生存状况研究

目的研究FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)的急性髓系白血病(AML)患者的临床诊疗及生存状况。方法选取陕西核工业417医院2016年7月至2017年7月收治的98例确诊为AML的患者作为研究对象。根据聚合酶链反应(PCR)联合DNA法检测FLT3-ITD基因突变情况分为两组,其中观察组为存在FLT3-ITD基因突变阳性(FLT3-ITD+)患者23例(阳性率为23.47%),对照组FLT3-ITD突变阴性(FLT3-ITD-)患者75例(76.53%)。显微镜下观察并比较两组患者骨髓细胞形态及幼稚细胞数目,同时采用流式细胞数检测并分析患者的细胞学抗原表达情况及阳性细胞数;对患者细胞遗传学表现情况以及其他临床指标情况进行记录并对比分析。所有患者均接受化疗治疗,在化疗后3~4周时比较患者完全缓解(CR)、部分缓解(PR)及未缓解(NR)情况;随访1年,统计两组患者的总生存期(OS)及无事件生存期(EFS)。结果观察组与对照组的性别、年龄比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者的白细胞计数及骨髓原始细胞明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组患者的血红蛋白及血小板计数明显高于对照组,CD33、CD7的抗原阳性率明显高于对照组,CD16、CD15、CD34、CD117抗原阳性率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组正常核型分别为14例(60.87%)、46例(61.33%),其中观察组预后良好率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗1个疗程后CR为39.13%,明显低于对照组的73.33%,差异具有统计学意义(P<0.05);经随访1年,观察组患者的EFS为34.7%,明显低于对照组的65.3%,OS为43.4%,明显低于对照组的73.3%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论FLT3-ITD基因突变在AML患者中较为常见,FLT3-ITD突变阳性患者的白细胞水平升高,其完全缓解率及总体生存率均低于阴性患者,可用于评估AML患者预后情况。

FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。