扶肾方对UUO大鼠肾脏病理及CTGF、FN、Vimentin表达的影响

[目的]研究扶肾方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响。[方法]健康雄性SD大鼠50只,适应性饲养1周后,按照随机原则将大鼠分为假手术组(12只)与造模组(38只),造模组在手术后7 d随机选取大鼠2只以验证造模是否成功,余造模组大鼠随机分为模型组(12只)、中药低、高剂量组(各12只)。除假手术组外,其余各组均以单侧输尿管结扎的方法制作肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管。各组大鼠在术后7 d开始灌胃给药,所有大鼠均按照每只每天2 mL进行灌胃,假手术组与模型组灌服生理盐水,中药低剂量组和高剂量组分别按照扶肾方溶度2.52和5.04 g/mL进行灌胃。用苏木精-伊红(HE)染色及电镜观察肾脏病理形态变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测肾组织CTGF、FN、Vimentin的表达。[结果]光镜下观察,HE染色示假手术组肾小球形态完整,肾小管结构正常,肾间质正常;模型组术后28 d,肾小球数量减少,肾皮质显著变薄,肾小管萎缩、坏死、消失明显,肾间质纤维化程度严重;中药低、高剂量组肾组织病变较模型组轻。电镜示对比假手术组,模型组肾组织病变明显,中药低、高剂量组肾组织病变较模型组轻。Western Blot检测显示,在术后14、28 d时,与假手术组比较,模型组、中药各剂量组CTGF、FN、Vimentin表达明显增多(P<0.05);中药低、高剂量组与模型组比较,在术后14 d CTGF、FN、Vimentin表达明显下降(P<0.05);与低剂量组比较,在术后28 d高剂量组CTGF、FN、Vimentin表达明显下降(P<0.05)。[结论]扶肾方可以降低UUO大鼠CTGF、FN、Vimentin的表达,随着梗阻时间的延长,高剂量效果更好。

丹参酚酸注射液对室间隔缺损模型家兔血清候选蛋白标志物FN及心房肌细胞Cx43蛋白的表达影响研究

目的探讨丹参酚酸注射液对室间隔缺损模型家兔血清候选蛋白标志物FN以及心房肌细胞Cx43蛋白的表达影响。方法选取家兔34只,其中24只室间隔缺损造模,造模成功19只按随机数字表达法分为2组,阴性对照组(A组)9只,给予混合饲料和纯净水饲养;丹参酚酸注射液组(B组)10只,在A组饲养的基础上,按每天剂量为150 mg/kg的丹参酚酸注射液进行灌胃;未造模10只家兔作为正常对照组(C组),给予混合饲料和纯净水饲养,由家兔自行饮食。饲养8周后处死家兔,采用荧光定量PCR、免疫组化及免疫印迹法(Western blot)检测3组家兔血清中候选蛋白标志物FN和心房肌细胞Cx43蛋白表达水平。结果 A组家兔血清中候选蛋白标志物FN mRNA表达水平显著高于B、C组,心房肌细胞Cx43mRNA表达水平显著低于B、C组,差异均有统计学意义(P<0.01);B组家兔血清中候选蛋白标志物FN mRNA和心房肌细胞Cx43mRNA的表达水平与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A组家兔血清中候选蛋白标志物FN蛋白表达水平显著高于B、C组,心房肌细胞Cx43蛋白表达水平显著低于B、C组,差异均有统计学意义(P<0.01);B组家兔血清中候选蛋白标志物FN和心房肌细胞Cx43的蛋白表达水平与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酚酸注射液能够明显降低室间隔缺损模型家兔血清中候选蛋白标志物FN的表达,升高心房肌细胞Cx43蛋白的表达,改善室间隔缺损家兔心脏功能,对临床具有指导意义,值得临床推广。

糖皮质激素支架植入联合鼻内镜手术对慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻腔通气功能及鼻黏膜恢复的影响

目的分析糖皮质激素支架植入联合鼻内镜手术对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CSwNP)患者鼻腔通气功能及血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)、纤维连接蛋白(Fn)和水通道蛋白-1(AQP-1)水平的影响。方法选择2022年1月-2023年2月该院收治的CSwNP患者60例,采用随机数表法分为试验组和对照组,各30例。试验组在原有鼻内镜手术基础上联用糖皮质激素支架植入治疗,对照组接受鼻内镜手术治疗,两组患者随访至术后12周。比较两组患者鼻部症状、生活质量、鼻腔结构、通气功能、血清ECP、Fn、AQP-1水平和不良反应发生情况。结果与治疗前比较,治疗后12周两组患者鼻腔黏膜结构评分(Lund-Mackay评分)、鼻部症状视觉模拟评分法(VAS)(包括:鼻塞、流涕、头部闷胀感、嗅觉减退、鼻腔干燥/结痂感)和血清ECP水平降低,鼻腔最小横截面至前鼻孔距离(DCAN)缩短,且试验组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后12周,两组患者鼻腔最小横截面积(NMCA)和鼻腔容积(NCV)增大,世界卫生组织生活质量测定量表简表(WHOQOL-100量表)评分、血清Fn和AQP-1水平升高,且试验组高于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖皮质激素支架植入联合鼻内镜手术可缓解CSwNP患者鼻部症状,改善鼻腔结构和通气功能,调节血清ECP、Fn和AQP-1水平,提高患者生活质量。

γ-干扰素诱导沙眼衣原体感染细胞酪氨酸激酶活化的研究

目的 探讨IFN -γ诱导的沙眼衣原体感染细胞信号转导中酪氨酸激酶活化。方法 采用IFN -γ作用于沙眼衣原体感染的McCoy细胞 ,用免疫印迹法检测信号蛋白酪氨酸激酶磷酸化的诱导活化 ,并应用酪氨酸激酶特异性抑制剂genistein拮抗IFN -γ诱导的酪氨酸激酶磷酸化。结果 IFN -γ可以在短时间内引起沙眼衣原体感染细胞内的蛋白质酪氨酸激酶磷酸化。磷酸化程度随时间延长而改变 ,在 15min时磷酸化程度最高 ,以后逐渐减弱。Genistein可抑制IFN -γ诱导的酪氨酸激酶磷酸化 ;随着浓度增大 ,抑制作用有所增加。结论 IFN -γ诱导沙眼衣原体感染细胞酪氨酸激酶活化。

纤维粘连蛋白酶切片段的制备及其对大白鼠血浆中冷凝蛋白形成的抑制作用

冷凝蛋白（ｃｏｌｄｉｎｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＩＰ）是机体血浆经低温致冷后形成的大分子冷不溶性蛋白，它在机体组织冷损伤起着一定的作用。ＣＩＰ的形成与纤维粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）有关。本文观察到猪血浆Ｆｎ的胰蛋白酶酶切片段混合物（Ｆｎｆｒａｇｍｅｎｔｓ，Ｆｎｆ）在５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度时，能明显抑制新鲜大白鼠血浆中ＣＩＰ的形成，血浆中ＣＩＰ的形成量（７９±４６μｇ／ｍｌ）仅为对照血浆组（７８１±２６０μｇ／ｍｌ）的１０％，推测Ｆｎ分子上可能有相应的结构参与了ＣＩＰ的形成。

BID蛋白促细胞凋亡增殖失衡作用与IgA肾病患者病情的关系

目的探讨IgA肾病(IgAN)不同病变程度肾组织中BID蛋白的表达与细胞凋亡、增殖的关系。方法免疫组化法检测肾组织PCNA、BID蛋白和FN,用原位末端标记法(TUNEL)结合光镜形态学检测细胞凋亡情况。结果随IgAN病变程度加重,BID蛋白、PCNA、凋亡细胞及FN表达逐渐增强(P<0.05),Ⅳ级最强(PCNA:Ⅲ、Ⅳ相当);肾小球内BID蛋白与凋亡细胞比值、PCNA、FN表达,肾小球硬化率及尿蛋白排泄量正相关,与eGFR负相关(P<0.01)。结论BID蛋白可通过促进细胞凋亡增殖失平衡促进IgAN病程进展,可能为判断预后的一项重要病理指标。

坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。

芪蓟肾康颗粒总黄酮对大鼠肾小球系膜细胞外基质动态平衡的干预实验

目的 通过体外肾小球系膜细胞培养实验,明确芪蓟肾康颗粒总黄酮是否为组方的有效组分,探讨其作用机制.方法 运用血管紧张素Ⅱ诱导体外培养的肾小球系膜细胞,使细胞外基质增加,经芪蓟肾康颗粒总黄酮干预后,观察白细胞介素-6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、纤维粘连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）的蛋白表达.结果 与Ang Ⅱ组比较芪蓟肾康颗粒总黄酮可降低IL-6、MCP-1的蛋白表达,FN和Ⅳ型胶原的含量也都分别降低（P＜0.01）.结论 芪蓟肾康颗粒总黄酮可能是通过调节促炎症因子的表达,从而抑制细胞外基质过度积聚.

运动对老年糖尿病人抗凝血酶Ⅲ及粘附蛋白的影响

本文对20例老年Ⅱ型糖尿病(NIDDM)病人在30分钟中等强度运动前后血清抗凝血酶Ⅲ及血浆粘附蛋白(纤维连结素与von Willebrand因子)的变化进行了研究。发现运动前NIDDM组抗凝血酶Ⅲ活性低于对照组,运动后活性升高;两组运动前后纤维连结素水平平均无明显变化;运动前NIDDM组von Willebrand因子水平高于对照组,有运动习惯的NIDDM组其水平低于无运动习惯的NIDDM组,并且运动后其水平接近正常水平。提示适当运动可能有助于延缓血管并发症的发生、发展。

T管引流术后胆汁粘度及CRP、FN、C_3的动态变化

为了观察胆汁中急性时相蛋白（ＡＰＰ）对胆汁流动特性的影响。利用毛细管粘度计测定胆汁相对粘度，采用单向免疫扩散法测定胆汁中Ｃ－反应蛋白（ＣＲＰ）、纤维连接素（ＦＮ）及补体Ｃ３（Ｃ３）并与胆汁引流量、体温等对照分析。发现急性梗阻性化脓性胆管炎（ＡＯＳＣ）术中胆汁粘度、ＣＲＰ、ＦＮ及Ｃ３明显高于术后各天（Ｐ＜０．０１）；而慢性胆管炎（ＣＣ）胆汁粘度、ＣＲＰ、ＦＮ、Ｃ３，术后２天达高峰（Ｐ＜０．０１）。术后ＡＯＳＣ组胆汁粘度、ＣＲＰ、ＦＮ、Ｃ３下降较ＣＣ组快；而胆管残余结石病人术后以上指标均无明显下降。体温、胆汁粘度、ＣＲＰ、ＦＮ、Ｃ３两两间呈明显正相关（Ｐ＜０．０１）。认为ＡＰＰ是引起胆汁粘度增高的重要因素；同时ＡＰＰ及粘度可用于监测胆道炎症及指导术后拔管。

手术切口感染患者血清C反应蛋白与降钙素原及纤连蛋白检测价值

目的研究分析手术切口感染患者的血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及纤连蛋白(FN)水平的检测价值。方法选取2007年12月-2009年12月于医院进行手术治疗并发生切口感染的57例患者为观察组,同期采用手术治疗但未并发切口感染的57例患者为对照组,将两组患者的血清CRP、PCT及FN的阳性率、含量进行检测与比较。结果观察组的血清CRP、PCT阳性率为91.23%和89.47%,含量分别为(12.27±0.62)mg/L和(10.46±2.14)μg/L,均高于对照组,血清FN的阳性率为82.46%,高于对照组,含量为(137.84±18.96)μg/ml,低于对照组,且重度感染患者CRP、PCT升高的幅度和FN降低的幅度均大于轻度和中度患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论手术切口感染患者的血清CRP、PCT及FN水平均呈现异常波动,且对感染的严重程度有一定的临床价值。

金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A对血管内皮细胞紧密连接的破坏作用

目的观察金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A基因(fnBA)敲除金黄色葡萄球菌菌株对人微血管内皮细胞(HMEC-1)紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的影响,并探讨金黄色葡萄球菌侵袭血管内皮细胞的机制。方法将野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325与HMEC-1按100︰1比例共培养,实时定量RT-PCR检测共培养30 min、60 min和120 min时HMEC-1紧密连接成份ZO-1和Claudin-5 mRNA的表达,同时应用Western blot分析和免疫组织化学染色观察共培养不同时间紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的表达。构建fnBA基因敲除突变菌株NCTC8325ΔfnbA,以野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325为阳性对照,观察突变株NCTC8325ΔfnbA与HMEC-1共培养120 min后紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的变化。结果金黄色葡萄球菌NCTC8325与HMEC-1共培养30 min、60 min和120 min后紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达在30 min、120 min时较对照组显著下降[30 min时与对照组比较:ZO-1:t=4.104、P=0.015,Claudin-5 mRNA:t=2.802、P=0.049;120 min时与对照组比较:ZO-1:t=3.478、P=0.025,Claudin-5 mRNA:t=1.802、P=0.261],但60 min时ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达有一过性升高。与金黄色葡萄球菌NCTC8325共培养后,免疫组织化学结果发现在30 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达显著下降(t=33.6、59.03,P均<0.001),120 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达亦显著下降(t=31.8、60.75,P均<0.001);Western blot与免疫组组织化学结果一致。与突变菌株NCTC8325ΔfnbA共培养30 min、60 min和120 min后,在30 min和60 min时ZO-1、Claudin-5蛋白的表达与NCTC8325组差异无统计学意义(P均>0.05),在120 min时ZO-1和Claudin-5蛋白的表达较NCTC8325组显著升高,差异均有统计学意义(ZO-1:t=14.89、P<0.001,Claudin-5:t=7.008、P=0.002)。结论金黄色葡萄球菌能通过下调紧密连接蛋白破坏HMEC-1紧密连接屏障,且其表面蛋白FnBPA发挥了重要作用。