基因MMP-2、PTEN和Fn的表达与胃癌临床病理因素的关系

为了探讨基因MMP-2、PTEN和FN与胃癌临床病理因素的关系,采用免疫组织化学方法,检测了56例胃癌中MMP-2、PTEN和Fn的表达.结果表明:MMP-2、PTEN的阳性表达和Fn的异常表达分别为58.9%、55.4%和60.7%.低分化癌中MMP-2的表达和Fn的异常高于高分化癌(P<0.05).MMP-2的表达和Fn的异常与胃癌浸润深度、淋巴结转移正相关(P<0.05),PTEN的表达与淋巴结转移负相反(P<0.05).MMP-2和PTEN的表达呈负相关(P<0.05),MMP-2表达和Fn的异常呈正相关(P<0.01),PTEN表达与Fn异常之间无明显相关性(P>0.5).通过该研究发现,检测胃癌组织中MMP-2、PTEN和Fn的表达,有助于了解胃癌的发展和评估胃癌患者的预后.

黔北麻羊CTSK、FN1基因生物信息学分析及其在性腺轴中的表达

【目的】研究组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)和纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)基因与黔北麻羊繁殖率之间的相互关系,为研究CTSK、FN1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。【方法】通过生物信息学方法分析黔北麻羊CTSK、FN1蛋白理化性质、亚细胞定位、信号肽位点和蛋白高级结构,并进行氨基酸同源性分析,构建系统发育进化树;采用荧光定量PCR法检测CTSK、FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊性腺轴(下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢)中的表达量。【结果】CTSK、FN1基因分别编码330和2478个氨基酸,理论PI值分别为8.82和5.37,CTSK是一种具有信号肽的稳定亲水性蛋白,而FN1是一种具有信号肽的不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位结果说明:CTSK蛋白可能主要在细胞外和内质网中发挥生物学作用,而FN1蛋白可能主要在细胞核中发挥生物学作用;高级结构预测结果显示,CTSK和FN1蛋白均主要由无规则卷曲构成;与其他动物相比,黔北麻羊CTSK、FN1基因均与反刍动物绵羊及牛的亲缘关系最近。qPCR分析表明:CTSK和FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢组织中均有表达,与单羔组相比,多羔组CTSK基因在卵巢、下丘脑、子宫中的表达量均极显著下调(P<0.01),而FN1基因在下丘脑和子宫中的表达均极显著上调(P<0.01),在卵巢中显著上调(P<0.05)。【结论】CTSK基因表达量与黔北麻羊的繁殖性状呈负相关,FN1基因则呈正相关,CTSK和FN1基因均是影响黔北麻羊繁殖性能的重要候选基因。

血管壁脂质过氧化与FN、P105基因表达关系的研究

目的 初步研究血管壁脂质过氧化状态下FN、P10 5基因表达的变化及其意义。方法 以不同剂量的盐阿霉素 (adriamycin ,ADR)分别一次性腹腔注射雄性SD大鼠 ,制备脂质过氧化模型。采用硫代巴比妥酸 (TBA)荧光分光光度法测定大鼠血清脂质过氧化产物丙二醛 (malondialdehyde ,MDA)含量。运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定大鼠主动脉中的Fibronectin(FN)、P10 5coactivatormRNA的表达。结果 ADR中、高剂量组大鼠血清中MDA含量高于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;RT PCR结果表明FN、P10 5mRNA在不同剂量模型组呈不同程度的高表达。结论 在阿霉素导致血管壁脂质过氧化后 ,有FN、P10 5基因的高表达 。

山羊FN1基因InDel位点鉴定及其与生长性状的关联性分析

【目的】转录组候选基因纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)对于骨分化、骨形成和骨细胞迁移起关键作用。对FN1基因预测突变位点进行DNA池检测,并与山羊生长性状进行关联分析,以期为山羊的遗传育种和性状改良提供分子标记。【方法】利用DNA池检测和PCR-RFLP技术,分析福清山羊、努比亚黑山羊和简阳大耳羊中FN1基因的7个预测突变位点的遗传多态性,并与其生长性状进行关联分析。【结果】通过DNA池检测和PCRRFLP发现,7个预测位点中只有Del66652位点存在多态性,且在3个山羊群体中都只存在Ⅱ和ID基因型,都不处于哈迪温伯格平衡(P>0.05),多态性信息含量小于0.25。关联分析发现,努比亚黑山羊ID基因型个体的管围显著优于Ⅱ基因型(P<0.05),ID基因型的胸围指数极显著优于Ⅱ基因型(P<0.01)。简阳大耳羊ID基因型个体的胸围指数和管围指数显著优于Ⅱ基因型(P<0.05)。【结论】Del66652位点与努比亚山羊和简阳大耳羊的生长性状显著相关,且ID基因型为优势基因型。Del66652位点可作为影响山羊生长性状的分子标记位点,为提高山羊生长性状的品种改良提供研究基础。

新疆农牧区老年肌少症患者外周血PBMC中TWEAK、Fn14及NF-κB通路基因表达分析

目的观察新疆农牧区老年肌肉减少症(后简称肌少症)患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导物(TWEAK)、成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)及核因子κB(NF-κB)通路基因的表达变化,并探讨其意义。方法在新疆农牧区常住居民中选择80例研究对象,肌少症患者40例纳入肌少症组、健康人群40例纳入对照组。提取两组空腹外周血中的PBMC,采用qRT-PCR法检测TWEAK、Fn14、IκB激酶α(IKKα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65 mRNA。结果肌少症组外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA表达高于对照组(P均<0.05)。校正性别、年龄后,协方差分析结果仍显示,肌少症组外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA表达高于对照组(P均<0.05)。校正年龄、性别后,偏相关性分析显示,TWEAK mRNA与Fn14 mRNA表达呈正相关(r=0.424,P<0.01),Fn14 mRNA与IKKα、IKKβmRNA表达呈正相关(r分别为0.264、0.284,P均<0.05),IKKα、IKKβmRNA与NF-κB p65 mRNA表达呈正相关(r分别为0.724、0.660,P均<0.01)。结论新疆农牧区老年肌少症患者外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA高表达,TWEAK、Fn14 mRNA表达与IKKα、IKKβmRNA表达有相关性;TWEAK、Fn14可能通过调节IKK激活NF-κB炎症通路从而参与老年人肌少症的发生发展。

四棱豆纤维连接蛋白基因部分序列克隆与分析

利用已报道的FNDC基因序列的保守区域设计引物，用所设计的引物扩增四棱豆FNDC基因的部分序列，将序列提交GenBank，获1个登录号FJ176925。通过对该序列的同源性比较分析发现，该序列与目前数据库中山豆根YP_001511236序列具有明显的同源性。该序列在112—651bp片段上包括了1个开放性阅读框，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA。将ORF处的氨基酸序列继续进行生物信息学的分析，对其进行的1级结构分析和2级结构分析中，表明该序列是一个酸性蛋白，亲水性较弱，疏水性较强，信号肽序列为第23位一第45位，亚细胞定位最大可能性为定位于细胞外。含有N型糖基化位点，蛋白激酶C磷酸化位点，酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，C-末端锚定微体信号，纤维素结合结构域。主要以旺一螺旋，不规则盘绕和延伸链为该蛋白最大量的结构元件，β-折叠散布于整个蛋白质中。

LncRNA XIST、miR-204及FN1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨LncRNA XIST,miR-204及FN1在PTC组织和癌旁组织及LncRNA XIST在PTC细胞系中的表达及意义。方法:应用Real-time PCR技术检测20例甲状腺乳头状癌和其癌旁组织中LncRNA XIST,miR-204及FN1的表达情况,应用QPCR检测3株甲状腺癌细胞系(BCPAP, TPC-1, KTC-1) LncRNA XIST、miR-204-5p的表达水平,应用荧光原位杂交(FISH)检测PTC细胞系BCPAP中LncRNA XIST的表达定位,应用双荧光素酶报告基因检测人293T细胞的LncRNA XIST、miR-204及FN1相互作用。结果:与癌旁组相比,PTC癌组织组的LncRNA XIST的表达水平显著上调(p 【0.05),PTC癌组织组的FN1的表达水平极显著上调(p 【0.01),而PTC癌组织组的miR-204-5p的表达水平极显著下调(p 【0.01),差异均具有统计学意义;BCPAP细胞的LncRNA XIST的表达水平最高,且miR-204-5p的表达水平最低;LncRNA XIST主要在细胞质中表达;LncRNA XIST与miR-204有相互作用(p 【0.05),FN1与miR-204有相互作用(p 【0.05)。结论:LncRNA XIST在甲状腺乳头状癌中高表达,miR-204在甲状腺乳头状癌中低表达,FN1在甲状腺乳头状癌中高表达;LncRNA XIST,miR-204及FN1相互作用,参与甲状腺乳头状癌的发生发展,并可为甲状腺乳头状癌潜在诊断标志物和治疗靶点的寻找提供理论依据,LncRNA XIST可能是甲状腺乳头状癌诊断和治疗的一个新靶点。

FN1基因表达与人纤维肉瘤肺转移的相关性

目的研究纤维连接蛋白1（FN1）基因表达与人纤维肉瘤肺转移的相关性。方法将HT1080细胞经裸鼠尾静脉注射接种，采集肿瘤浸润组与正常对照组肺组织RNA，合成cDNA，以含1176个人肿瘤相关基因的芯片行cDNA微阵列分析，以实时定量RT-PCR法测定两组FN1表达。利用激光捕获法采集实验组小鼠肿瘤浸润肺组织及周围组织RNA，分别以实时定量RT-PCR法测定FN1表达。结果肺转移组与对照组相比，表达差异基因31个，占2．3％，其中表达下调的基因占0．3％，表达上调的基因占2．3％，FN1表达明显上调。肿瘤浸润肺组织与周围组织相比，FN1表达明显上调。结论FN1基因高表达可能与人纤维肉瘤肺转移有关。

FN1基因变异致纤维连接蛋白沉积肾小球2型的临床特点和遗传学分析

目的 探讨FN1基因变异所致纤维连接蛋白沉积肾小球疾病2型(GFND2)的临床表型及遗传学特征。方法 回顾分析2023年3月于中山市小榄人民医院儿科收治的1例以眼睑浮肿为主诉的GFND2患儿为研究对象。采集该患儿的临床数据资料,采用全医学外显子组测序(WES)对患儿及其父母行遗传学分析,并回顾国内外文献报道的FN1基因突变所致GFND2病例的临床特点以及遗传学特征。总结已报道FN1所致GFND2基因变异和临床特点的关系。结果 患儿,男,8岁,以眼睑浮肿、血尿、蛋白尿、高血压为临床特点。全医学外显子测序结果提示其携带FN1基因c.938G>T位点杂合基因变异,现国内尚未见以该位点变异的报道。连同16篇文献报道的50例FN1基因变异致病患者,主要临床表现为高血压(14/50,28%)、血尿(20/50,40%)、蛋白尿(31/50,62%)。共检出FN1基因变异16个。结论FN1基因c.938G>T(p.Gly313Val)是本例患儿的致病原因。本研究丰富了FN1相关的GFND2基因变异谱,并为临床诊断、产前诊断提供了依据。对于高血压、蛋白尿、血尿的患儿,需尽早完善基因检查明确病因。

CRISPR/Cas9介导下构建FN1敲除的DLD1细胞系及初步功能学研究

[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建FN1基因敲除的人结直肠腺癌DLD1细胞系,并初步探讨FN1基因敲除对DLD1细胞增殖、迁移的影响。[方法]根据CRISPR/Cas9技术原理,设计针对FN1基因的crRNA,体外混合crRNA、tracrRNA、Cas9酶,形成核糖核蛋白(即RNP复合物)后转染至DLD1细胞,实现基因编辑。采用二维梯度稀释法挑取单克隆细胞系,使用测序及蛋白质印迹技术(Western Blotting)检测FN1基因敲除情况,通过CCK8、Transwell及划痕实验检测FN1敲除对DLD1细胞增殖、迁移的影响。[结果]测序结果表明,8号单克隆细胞系在靶点附近缺失1 366个碱基,造成FN1编码基因的移码突变,蛋白翻译提前终止。与未编辑细胞相比,DLD1FN1-KO细胞的增殖及迁移能力明显降低。[结论]成功构建DLD1FN1-KO细胞系。初步证实,与未编辑细胞相比,DLD1FN1-KO细胞在第5d增殖水平减慢约40%(P <0.001)、迁移水平减慢约27%(P <0.001)。

脂质体-γ-干扰素DNA复合物肝内直接注射对大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨脂质体 γ干扰素(γIFN )DNA复合物肝纤维化肝脏内直接注射后的表达及对肝纤维化的影响。方法 用阳离子脂质体包裹人γIFNDNA ,并直接注射入肝纤维化大鼠的肝实质内,3周后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血内γIFN水平并评估肝纤维化程度变化。结果 肝内注射脂质体 γIFNDNA复合物的大鼠下腔静脉血中检测到了γIFN的表达(6.6±1.7)mg/L ,而对照组却未检出;行γIFN基因肝内注射的大鼠在基因转导前后,肝纤维化分期、Ⅳ型胶原染色及肝纤维化的Chevallier评分无明显改变(P >0 .0 5 ) ,且均显著轻于对照组(P <0 .0 5 )。结论 脂质体 DNA复合物进行肝实质内注射是一条肝纤维化肝内直接基因转导的有效途径。