燃煤电站用FN3合金长时组织稳定性研究

FN3是基于617合金改进优化而来的固溶强化型镍基合金,具有较好的制造和焊接工艺性、抗蒸汽氧化性能和高温长时持久强度,是650~725℃燃煤发电机组的重要候选材料之一。针对FN3合金开展高温长时时效和持久性能的测试与研究。研究表明:FN3合金725℃、10万h的持久强度超过100 MPa。分别在650℃和725℃下经历12000 h时效后,FN3合金仍保持着良好的强度和塑韧性。通过分析FN3合金高温长时时效和持久前后微观组织的演变规律,进一步验证了FN3合金在650~725℃具有较好的组织稳定性,可以满足超超临界燃煤电站关键高温部件的使用要求。

人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位研究

目的·应用人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端（NT-proBNP）抗原表位,采用大肠杆菌表达系统高效表达具有脑钠肽前体N端抗原表位活性的结构稳定的重组蛋白。方法·将编码脑钠肽前体N端第12～21位和第13～20位氨基酸残基的抗原表位序列分别取代骨架蛋白FN3 FG loop区,并克隆到大肠杆菌表达载体pET28（a）＋上,由大肠杆菌BL21（DE3）plySs表达后纯化,检测其抗原活性并进行理化性质分析。结果·成功构建骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体第12～21位和第13～20位氨基酸残基抗原表位的表达载体,获得高效表达骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位的大肠杆菌表达菌株。镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白,经Western blotting与ELISA鉴定具有脑钠肽前体N端抗原免疫活性。通过差式热量扫描法检测显示重组蛋白保持FN3骨架蛋白原有结构稳定性;血浆稳定性检测显示重组蛋白是与抗原蛋白等效的高稳定的抗原蛋白替代物,可明显延长降解周期（血浆半衰期）。结论·成功利用了FN3骨架蛋白展示脑钠肽N端前体,采用大肠杆菌表达系统可以简单、快速、高效制备具有与脑钠肽前体的抗原性相当的脑钠肽前体抗原替代物。

一个新的纤黏连蛋白剪接体FN3在体节中的表达受SHH的负调控

纤黏连蛋白是脊椎动物血浆和许多组织的胞外基质中的主要蛋白,在细胞黏连、迁移和分化等过程中起重要作用。分离鉴定了斑马鱼的一种新型纤黏连蛋白剪接体FN3,原位杂交表明,其mRNA特异性地存在于前体节中胚层和新形成的体节中,而其在成熟体节中的表达量下降。在胚胎中易位表达SHH（sonic hedgehog）,导致FN3的表达量下降。在缺失脊索的Flh突变体胚胎中,FN3的表达量增加,以上结果表明,FN3可能在体节的形成中起作用,而在体节分化时需受到来自中轴组织的信号的抑制。

人源Fank1蛋白质FN3结构域多肽的原核表达，纯化及晶体筛选

目的纯化人源Fank1（fibronectin type Ⅲ and ankyrin repeat domain1）蛋白质N端FN3（fibronectin typeⅢ，Ⅲ型纤黏连蛋白）结构域蛋白，用于晶体生长的三维结构分析。方法将FN3结构域基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21（DE3）后获得表达菌株。该菌株经IPTG诱导高效表达出带有GST标签的可溶性的融合蛋白，经过Glutathione Sepha-rose^TM 4B亲和层析、Hiload16／60 superdex200分子筛层析纯化后，蛋白纯度达到95％以上。结果纯化蛋白采用悬滴气相扩散法得到棒状晶体。结论成功制备了高纯度FN3蛋白，获得FN3蛋白质晶体，为进一步的三维结构解析及Fank1功能研究奠定了基础。

高邮凹陷阜宁组三段储层成岩演化序列

利用薄片观察,黏土矿物分析、流体包裹体测温及储层物性等资料,对高邮凹陷古新统阜宁组三段(E1fn3)储层的成岩演化序列进行了深入探讨。研究认为,高邮凹陷E1fn3储层具低渗、超低渗特征,成岩过程复杂。利用黏土矿物的两个转换带,可将该区E1fn3划分为中成岩A1期、中成岩A2期及中成岩B期。该套储层经历了弱酸-弱碱-弱酸-中性的成岩环境,发育了颗粒压实-长石溶蚀、石英加大-碳酸盐胶结、加大边交代-碳酸盐、长石溶蚀的成岩序列,最终成为有效储层。

版纳微型猪近交系FANK1基因CDS克隆、qPCR表达及功能生物信息学分析

【目的】获得猪FANK1基因CDS序列、组织表达和蛋白质功能信息。【方法】以GenBank下载的猪及近缘物种的FANK1 mRNA序列为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)睾丸组织中扩增FANK1基因完全编码序列及部分侧翼序列。应用实时荧光定量PCR技术检测BMI 15个重要组织的FANK1 mRNA转录表达水平,并对FANK1翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析,预测FANK1蛋白质的功能,最后构建FANK1多物种氨基酸系统进化树。【结果】获得了BMI FANK1编码区序列长1 041 bp,编码346个氨基酸,序列已提交GenBank,基因登录号为KU705617和KU705618,对应的氨基酸登录号为AOC89035和AOC89036。基因组结构分析表明FANK1基因定位于猪14号染色体,有11个外显子和10个内含子。多组织相对荧光定量表达分析表明FANK1基因在睾丸、尿道球腺和精囊腺中呈高表达水平;在其他组织中呈中低表达水平。功能生物信息学分析表明FANK1蛋白质含有2种保守结构域FN3和ANK,无跨膜螺旋结构,无N端信号肽序列,二级结构以无规卷曲为主,N末端和C末端均亲水,有4类功能活性位点。系统进化分析表明,FANK1基因在进化中高度保守,且与牛、羊的亲缘关系最近,符合物种的系统分类学。【结论】成功克隆了版纳微型猪近交系FANK1基因的CDS序列并进行了多种组织表达分析,为后续研究FANK1基因在小型猪精细胞分裂及调节信号通路方面的作用及功能奠定基础。

栝楼桂枝汤通过抑制小胶质细胞活化改善大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨栝楼桂枝汤(gua lou gui zhi decoction,GLGZD)是否通过影响脑缺血/再灌注损伤大鼠皮层小胶质细胞活化来发挥脑保护作用。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,GLGZD治疗7 d后,改良神经功能缺损评分评价各组大鼠的神经功能,小动物核磁共振检测大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测缺血侧皮层神经细胞凋亡情况,免疫组化法检测缺血侧皮层脑组织中TNF-α蛋白的表达情况,RT-qPCR检测缺血侧皮层脑组织中神经元-小胶质细胞相互作用的相关因子TWEAK、Fn14、NIK、Rel B、CCL21、CXCR3 mRNA及小胶质细胞活化标志物IBA-1 mRNA表达情况。结果GLGZD能明显改善MCAO大鼠神经功能,显著减少MCAO大鼠脑梗死体积和缺血侧皮层神经细胞的凋亡;并可明显下调MCAO大鼠缺血侧皮层脑组织中TNF-α蛋白及TWEAK、Fn14、NIK、Rel B、CCL21、CXCR3、IBA-1 mRNA的表达。结论GLGZD能明显改善大鼠脑缺血/再灌注损伤,这一作用可能与其通过影响TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路抑制小胶质细胞活化有关。

合浦珠母贝PU3基因的克隆及功能鉴定

目的:克隆获得合浦珠母贝PU3基因的序列,并研究其在生物矿化中的功能。方法:使用RACE获得PU3基因的全长;利用实时荧光定量PCR的方法检测PU3基因在不同组织中的表达分布;利用实时荧光定量PCR的方法检测贝壳损伤修复过程中PU3基因的表达量的变化;通过RNAi实验,抑制PU3基因的表达,之后用扫描电子显微镜观察合浦珠母贝贝壳表面的变化。结果:合浦珠母贝PU3基因的cDNA全长为2361bp,编码618个氨基酸。氨基酸序列的功能结构域分析表明其含有4个FN3结构域。该基因在外套膜中高表达,且在外套膜边缘区的表达量高于外套膜中心区。在贝壳损伤修复的过程中,该基因的表达水平呈现上升的趋势。利用RNAi技术抑制PU3基因的表达后,贝壳的棱柱层结构发生了变化,缝隙变宽,且出现空洞。结论:PU3基因所表达的蛋白作为正调控因子参与生物矿化的过程,并主要作用于贝壳的棱柱层,抑制其表达会影响棱柱层的框架结构。