马腺疫链球菌FNE基因的克隆及原核表达

采用PCR方法从马腺疫链球菌新疆分离株中扩增FNE基因片段,克隆至pMD19-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果,将FNE截短基因亚克隆至原核表达载体pET-30a中,转化到大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导FNE重组蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western blot法分析蛋白表达及其反应原性。序列分析显示,其与GenBank收录的马腺疫链球菌4047(登录号YP002747216)核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99%。采用PCR法扩增到675bp的FNE截短基因片段构建重组表达载体获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析在46ku处出现明显条带,Western blot分析显示具有反应原性。成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE截短基因,为重组FNE蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。