FOS样抗原2蛋白表达在新疆维吾尔族2型糖尿病中的应用

目的比较FOS样抗原2(FOSL2)蛋白在新疆维吾尔族2型糖尿病(T2DM)及正常糖代谢(NGT)人群中的表达水平,并分析其表达与临床生化指标的相关性。方法收取2013年10月-2014年10月新疆喀什地区维吾尔族T2DM及NGT对象各50例,测量并记录其一般临床指标,采集血液标本。生化分析仪测定空腹血糖(FPG)以及总胆固醇(TC)等糖脂代谢指标;全自动电化学发光分析仪及配套试剂测定空腹胰岛素(FINS)水平;高效液相色谱法(HPLC)测定糖化血红蛋白(Hb Alc);酶联免疫吸附法(ELISA)测定FOSL2蛋白表达水平。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果 1与维吾尔族NGT组比较,T2DM组的体重指数(BMI)[(25.02±3.19)vs(28.36±4.01),P=0.000]、FPG[(5.45±0.69)vs(11.4±4.39),P=0.000]、Hb A1c[(6.21±1.30)vs(10.20±2.10),P=0.000]、TC[(3.80±0.87)vs(5.16±0.87),P=0.000]、TG[(1.48±0.85)vs(2.21±1.02),P=0.000]、LDL-C[(2.26±0.83)vs(2.63±0.74),P=0.018]水平较高,而HDL-C[(1.19±0.30)vs(1.03±0.34),P=0.011]及FOSL2蛋白表达水平降低[(41.48±26.32)vs(18.09±9.48),P=0.000];2与维吾尔族NGT组比较,T2DM组的FINS[(11.61±0.94)vs(16.13±1.61),P=0.017]、稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR)[(2.74±0.22)vs(7.81±0.75),P=0.000]水平较高;3维吾尔族T2DM患者血清FOSL2蛋白表达水平与BMI(r=-0.44,P=0.005)、FPG(r=-0.39,P=0.013)、Hb Alc(r=-0.34,P=0.044)、TC(r=-0.35,P=0.027)呈负相关。回归分析示BMI(β=-2.17,P=0.032)为FOSL2蛋白表达水平的影响因素。结论 FOSL2蛋白表达水平下调可能参与新疆维吾尔族胰岛素抵抗及T2DM的发生发展,BMI是维吾尔族T2DM的FOSL2蛋白表达水平的重要影响因素。

FOS样抗原2 mRNA及DNA甲基化在新疆维吾尔族2型糖尿病患者中的表达分析

目的分析FOS样抗原2(FOSL2)mRNA及DNA甲基化在新疆维吾尔族T2DM患者中的表达。方法选取2015年1月至2016年1月于莎车县人民医院内分泌科就诊的维吾尔族人群100例,分为糖耐量正常(NGT)组和T2DM组,每组各50例。测定HbA1c、FPG、TG、TC等生化指标,采用RT-PCR、MALDI-TOF-MS检测外周血白细胞FOSL2 mRNA表达及DNA甲基化水平,多元线性回归分析影响因素。结果与NGT组比较,T2DM组BMI、HbA1c、FPG、TG、TC、LDL-C升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C、FOSL2 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。T2DM组FOSL2基因有7个CPG单位的甲基化水平升高(P<0.05或P<0.01)。相关分析显示,T2DM组FOSL2基因DNA甲基化水平与mRNA表达呈负相关(r=-0.39,P<0.05)。多元线性回归结果显示,BMI、HbA1c是新疆维吾尔族T2DM患者FOSL2基因DNA甲基化高表达的危险因素(P<0.05)。结论新疆维吾尔族T2DM患者存在肥胖、血脂代谢紊乱等,通过FOSL2基因DNA高甲基化下调其mRNA表达,可能在T2DM发病中起作用。

新疆维吾尔族2型糖尿病患者血液白细胞中FOSL2 mRNA表达水平及其临床意义

目的:比较FOS样抗原2(FOSL2)mRNA在新疆维吾尔族2型糖尿病(T2DM)患者及正常糖代谢(NGT)人群中的表达水平,并分析其表达与研究对象临床生化指标的相关性。方法:收集新疆喀什地区维吾尔族T2DM(T2DM组)患者50例和NGT者(NGT组)50人,测量并记录其一般临床指标,如性别、年龄、脉搏、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、腰臀比(WHR)、体质量指数(BMI),记录T2DM病程(根据WHO糖尿病诊断标准确诊),采集血液标本。生化分析仪测定2组研究对象的空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)等糖脂代谢指标;全自动电化学发光分析仪及配套试剂测定空腹胰岛素(FINS)水平;高压液相色谱法(HPLC)测定糖化血红蛋白(HbAlc)水平;RT-PCR法测定血液中FOSL2 mRNA表达水平。结果:与NGT组比较,T2DM组患者的BMI(t=-4.62,P=0.00)、FPG(t=-9.56,P=0.00)、HbAlc(t=-7.83,P=0.00)、TC(t=-7.86,P=0.00)、TG(t=-3.89,P=0.00)和LDL-C(t=-2.41,P=0.01)水平升高。而HDL-C水平和FOSL2mRNA表达水平(t=-2.58,P=0.01;t=-12.174,P=0.000)降低。与NGT组比较,T2DM组患者的FINS(t=-2.42,P=0.02)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(t=-6.46,P=0.00)、胰岛β细胞功能指数(In-HOMA-β)(t=-5.58,P=0.00)升高,胰岛素敏感指数(In-ISI)(t=6.80,P=0.00)降低。T2DM患者白细胞中FOSL2 mRNA表达水平与WHR(r=-0.415,P=0.008)、FPG(r=-0.620,P=0.000)、HbAlc(r=-0.681,P=0.000)、HOMA-IR(r=-0.504,P=0.001)、TC(r=-0.582,P=0.000)、TG(r=-0.342,P=0.031)和HDL-C(r=-0.323,P=0.042)、T2DM病程(r=-0.733,P=0.000)呈负相关关系,与In-HOMA-β(r=0.638,P=0.000)呈正相关关系。回归分析,T2DM病程(β=-0.056,P=0.002)、In-HOMA-β(β=0.342,P=0.001)和TC(β=-0.219,P=0.003)为FOSL2基因表达水平的影响因素。结论:FOSL2mRNA表达水平下调参与新疆维吾尔族人群胰岛素抵抗和T2DM发生发展,TC是维吾尔族T2DM患者FOSL2基因表达水平下调的重要影响因素。

沉默FOSL2基因对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨沉默FOS样抗原2(FOSL2)基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响及机制。方法:采用Western blot检测骨肉瘤和肉瘤旁正常组织中FOSL2蛋白的表达。取对数生长期MG63细胞分为空白对照组(加生理盐水)、阴性对照组(NC组,转染阴性对照siRNA)和FOSL2-siRNA组(转染FOSL2 siRNA),通过CCK-8、Annexin V-FITC/PI双染法及Transwell小室分别检测各组细胞增殖、凋亡情况和侵袭、迁移能力,Western blot检测FOSL2、PCNA、MMP-2和Bax蛋白表达,qRT-PCR检测PCNA、MMP-2和Bax mRNA表达。结果:FOSL2-siRNA组MG63细胞中FOSL2蛋白表达明显低于空白对照组和NC组(P<0.05)。与空白对照组和NC组比较,FOSL2-siRNA组细胞增殖明显降低,凋亡率明显升高,细胞侵袭和迁移能力明显降低,MMP-2和PCNA表达明显降低,Bax表达明显升高(P<0.05)。结论:沉默FOSL2基因表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,机制与下调PCNA和MMP-2表达,上调Bax表达有关。

miR-485-5p通过下调FOSL2表达影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法选取2016年5月~2018年4月本院行手术治疗的36例鼻咽癌患者癌组织为研究对象,对应癌旁组织距离肿瘤边缘>3cm作为对照组。RT-qPCR检测鼻咽癌组织和对应的癌旁组织中miR-485-5p和FOS样抗原2(FOSL2)mRNA水平,Pearson相关性分析鼻咽癌组织中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达相关性。以人永生化鼻咽上皮细胞系NP69为对照,RT-qPCR检测鼻咽癌细胞系6-10B和5-8F中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达水平,Western Blot检测FOSL2蛋白水平。将5-8F细胞分为miR-NC组、miR-485-5p组、si-NC组、si-FOSL2组、miR-485-5p+pcDNA3.0组和miR-485-5p+pcDNA3.0-FOSL2组,MTT实验、流式细胞术、Western Blot分别检测各组5-8F细胞增殖、凋亡及Cyclin D1、p21、Bcl-2和Bax表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-485-5p与FOSL2调控关系。结果与癌旁组织比较,鼻咽癌组织中miR-485-5p水平降低(P<0.05),FOSL2 mRNA表达水平升高(P<0.05),且鼻咽癌组织中miR-485-5p与FOSL2 mRNA表达水平呈负相关(P<0.05)。与NP69细胞比,鼻咽癌细胞系6-10B和5-8F中miR-485-5p表达水平显著降低(P<0.05),FOSL2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-485-5p组5-8F细胞存活率、CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高(P<0.05)。miR-485-5p在5-8F细胞中负调控FOSL2表达。与miR-485-5p+pcDNA3.0组比较,miR-485-5p+pcDNA3.0-FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平降低(P<0.05)。结论miR-485-5p在鼻咽癌组织和细胞中表达降低,FOSL2表达升高;过表达miR-485-5p通过靶向负调控FOSL2抑制鼻咽癌细胞增殖,并促进其凋亡。

miR-223/Fosl2/NGP调控非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝纤维化作用

目的探讨miR-223/FOS样抗原2(Fosl2)/中性粒细胞颗粒蛋白(NGP)通路调控非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝纤维化的作用。方法将60只小鼠随机分成正常组、蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)组、MCD+miR-NC组(MCD模型鼠经尾静脉注射120 nmol/kg miR-NC 100μL)和MCD+miR-223 mimic组(MCD模型鼠经尾静脉注射120 nmol/kg miR-223 mimic 100μL),每组15只。正常组给予普通饲料,其余组给予MCD饲料。酶联免疫吸附法检测4组小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;采用放射免疫分析法检测小鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C);实时荧光定量PCR检测miR-223和Fosl2 mRNA水平;观察小鼠肝脏病理变化;Western blot检测肝组织Fosl2、NGP蛋白水平。结果与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组中miR-223表达水平升高,Fosl2表达水平下降(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组肝细胞空泡化现象减少,肝细胞肥大程度降低。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组TC、TG、ALT和AST水平下降(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组中脂质滴减少(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组HA、LN和Ⅳ-C水平降低(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组Fosl2蛋白水平下降,NGP蛋白水平上升(P<0.05)。结论miR-223可能通过调控Fosl2/NGP通路减轻NASH小鼠肝纤维化程度。

FOSL2蛋白在肺腺癌中调节TGF-β1信号机制的研究

目的研究FOSL2蛋白在TGF-β1信号传导通路中的作用及FOSL2在肺腺癌中的作用机制。方法利用质粒转染、免疫沉淀、蛋白印迹等方法验证FOSL2蛋白在TGF-β1信号传导通路中的作用及机制。结果 TGF-β1诱导细胞中FOSL2蛋白的表达水平显著增加,在72 h时表达水平最高,约为对照基线水平的4倍。FOSL2的表达与p-Smad3的着色呈正相关(r=0.85,P<0.001)。FOSL2高表达的患者比低表达的患者生存期更短(P=0.005)。结论 FOSL2蛋白通过与Smad3蛋白的相互作用促进TGF-β1诱导的迁移,是肺腺癌治疗中的一个潜在靶点。

miR-597调控FOSL2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨miR-597对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,及其与FOS样抗原2(Fos-related antigen 2,FOSL2)的靶向关系。方法选取乳腺癌细胞株T-47D,SK-BR-3,MDA-MB-231,MCF7及BT-474,正常乳腺细胞株MCF10A为研究对象,分别转染miR-597(miR-597组)及RNA阴性对照序列(NC组),同时选取30例乳腺癌病人癌组织及癌旁正常乳腺组织,迅速液氮冻存以提取RNA用于qRT-PCR检测。采用实时荧光定量PCR法检测细胞、组织中miR-597表达水平,MTT、流式细胞术检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞FOSL2表达水平,生物信息预测miR-597与FOSL2的靶向作用关系,荧光素酶实验验证。结果乳腺癌组织miR-597水平低于正常乳腺组织,乳腺癌细胞株细胞miR-597表达低于正常乳腺细胞株细胞,差异有统计学意义(P<0.01),miR-597组细胞增殖能力明显低于NC组,差异有统计学意义(t=9.833,P=0.003),miR-597组G0G1期细胞百分率高于NC组,S期细胞百分率低于NC组(t=10.215,10.336,P=0.000,0.000),miR-597组细胞侵袭能力低于NC组(t=8.404,P=0.000),miR-597组细胞迁移能力低于NC组(t=5.801,P=0.016),miR-597组细胞FOSL2表达水平低于NC组(t=13.658,P=0.000),miR-597与FOSL2有良好的靶向关系。结论miR-597在乳腺癌组织及细胞株中低表达,其高表达可可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制与调控FOSL2有关。

泄浊解毒方改善大鼠溃疡性结肠炎和调控巨噬细胞极化机制研究

目的探讨泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及其对β-catenin/FOSL2/ARID5A分子及巨噬细胞极化的影响。方法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,分为对照组、模型组、阳性组(柳氮磺胺吡啶干预)和低、中、高剂量组(泄浊解毒方干预)。干预14 d后采用疾病活动指数(disease activity index,DAI)和结肠组织评分(colon mucosa damage index,CDMI)评价大鼠的状态;HE染色观察病变组织,ELISA法检测血清细胞因子TNF-α、IL-6水平,流式细胞仪检测外周血M1、M2巨噬细胞含量,RT-PCR检测iNOS、CD206及β-catenin/FOSL2/ARID5A mRNA表达,免疫组化检测结肠组织β-catenin/FOSL2/ARID5A分子的蛋白表达。结果1)低中高剂量组DAI评分、CMDI评分、血清TNF-α、IL-6水平均显著低于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2)HE染色可见低中高剂量组结肠组织损伤与炎症浸润轻于模型组。3)低、中、高剂量组M1型巨噬细胞比例和iNOS mRNA显著低于模型组,M2型巨噬细胞比例和CD206 mRNA显著高于模型组(P<0.05)。4)低、中、高剂量组结肠组织中β-catenin和FOSL2 mRNA及蛋白表达显著高于模型组,ARID5A mRNA及蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)。结论泄浊解毒方能有效改善大鼠溃疡性结肠炎的临床症状,下调β-catenin/FOSL2/ARID5A分子的表达,调节巨噬细胞的极化,减轻炎症反应,促进肠道恢复。

miR-597在肝细胞性肝癌中表达及其对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制

目的观察肝细胞性肝癌(HCC)组织及细胞系中mi R-597的表达情况,以及上调mi R-597表达对HCC癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法选择20例HCC患者,其中男性12例,女性8例;年龄21~69岁,中位年龄46岁;临床分期T1N0M0期10例,T2N0M0期3例,T3N0M0期3例,T4N0M0期4例;14例有乙型肝炎病史,1例有乙型肝炎、丙型肝炎重叠感染史,5例无肝炎病史。取癌组织及对应的癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其mi R-597 mRNA表达水平。采用RT-qPCR检测不同肝癌细胞系及正常肝上皮细胞中mi R-597mRNA表达水平。将体外传代培养人HCC细胞系Hep3B,分为对照组和mi R-597过表达组,分别转染对照(mi R-NC)及mi R-597模拟物(mi R-597 mimics),用RT-qPCR检测细胞中mi R-597 mRNA表达水平;用MTT实验检测Hep3B细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测Hep3B细胞的迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验确定FOSL2是否是mi R-597的靶基因;通过Western blot实验检测Hep3B细胞FOSL2蛋白的表达水平。采用RT-qPCR检测癌组织及对应的癌旁组织中FOSL2 mRNA表达水平,分析mi R-597与FOSL2表达的相关性。结果HCC组织中mi R-597 mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。HCC细胞系中mi R-597 mRNA表达水平明显低于肝正常上皮细胞(P<0.05)。mi R-597过表达组miR-597 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),且细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(P<0.05)。mi R-597直接靶定FOSL2的3′非翻译区(3′-UTR),同时mi R-597过表达组FOSL2蛋白的表达水平相对于对照组明显降低(P<0.05),HCC组织中FOSL2 mRNA表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01),且FOSL2与mi R-597的表达呈显著负相关(r=-0.784,P<0.001)。结论mi R-597在HCC组织中低表达而FOSL2高表达,上调mi R-597的表达能够抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调FOSL2蛋白的表达有关。