沉默Rbfox1对癫痫模型大鼠海马神经细胞生物学行为的影响及机制研究

目的研究沉默结合RNA的Fox1基因(Rbfox1)对癫痫模型大鼠海马神经细胞生物学行为的影响及其机制。方法2019年8月—10月于西电集团医院神经外科实验室进行实验,选择SD健康雄性大鼠60只,随机选取其中15只作为空白对照组,其余45只建立癫痫模型,按随机数字表法分为模型组、过表达组、沉默组各15只,构建Rbfox1过表达、沉默慢病毒载体,行慢病毒滴定,比较4组大鼠海马神经细胞增殖、凋亡情况及其Akt/mTOR通路蛋白表达量。结果大鼠不同时间点海马神经细胞凋亡率比较,过表达组>模型组>沉默组(F/P=17.500/0.001、7.217/0.001、5.243/0.001),增殖率比较,过表达组<模型组<沉默组(F/P=37.165/0.001、23.632/0.001、3.651/0.001),大鼠海马组织p-p38、p-JNK、p-ERK、Bax、Bim比较,过表达组>模型组>沉默组,Bcl-2比较,过表达组<模型组<沉默组(F/P=53.319/0.001、19.523/0.001、9.580/0.001、3.550/0.001、8.107/0.001、4.770/0.001)。结论沉默Rbfox1基因可抑制海马神经细胞凋亡,促进海马神经细胞增殖,其作用机制可能与调控MAPK通路相关。

缺铁应答基因FOX1上游调控基因的筛选

[目的]筛选与莱茵衣藻FOX1基因启动子结合的调控基因序列。[方法]利用酵母单杂交的方法,构建pHIS2.1-FOX1诱饵载体,并将其转入到酵母菌株Y187中,在SD/-Trp/-His/-Leu/50 mmol/L 3-AT筛选培养基上挑选酵母阳性转化子,PCR克隆阳性转化子的序列并测序,利用Blastx程序检索phytozome莱茵衣藻基因组数据库,获得阳性转化子序列的同源基因信息。[结果]18个酵母阳性转化子测序成功,其同源基因主要有CTR型铜离子转运体(CTR2)、核糖体蛋白,和参与光合作用、氧化还原反应和物质运输等方面的功能蛋白。[结论]利用酵母单杂交技术筛选到缺铁应答基因FOX1潜在的上游调控基因。