Hsa-miR-132通过靶向FOXA1基因影响食管癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨hsa-miR-132(miR-132)对人食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的机制。方法:构建pCDNA3.1(+)-miR-132表达载体并转染高转移潜能的人食管癌细胞KYSE150,G418筛选稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。软琼脂克隆形成实验和Transwell小室实验检测KYSE150细胞的增殖和侵袭,Real-time PCR和Western blotting检测miR-132和叉头框蛋白A1基因(forkhead box protens A1,FOXA1)在KYSE150细胞中的表达,双荧光素酶报告基因分析和Western blotting检测过表达miR-132对FOXA1的调控作用。结果:成功构建pCDNA3.1(+)-miR-132质粒,获得稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。亲本KYSE150细胞中miR-132低表达,而FOXA1蛋白高表达。与转染空载体和未转染KYSE150细胞相比,转染pCDNA3.1(+)-miR-132不影响KYSE150细胞的增殖(13.9±0.33 vs 15.4±0.11、17.1±0.20,P>0.05),但细胞体积较小且表面比较光滑;其可显著降低KYSE150细胞的侵袭能力[(55±1.6)vs(129.0±3.1)、(124.0±2.8)个细胞,P<0.01]。miR-132能够作用于FOXA1 3'-UTR,从而抑制内源性FOXA1的表达。结论:食管癌KYSE150细胞低表达miR-132,外源性过表达miR-132可负向调控FOXA1的表达,从而抑制KYSE150细胞的侵袭能力。

FOXA1基因多态性与2型糖尿病的关联

目的探讨FOXA1基因多态性与2型糖尿病的关系。方法采用MALDI-TOF SNPs质谱分析技术,检测190名2型糖尿病患者和193名对照者FOXA1基因rs7144658位点基因型,利用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果病例组与对照组在性别、年龄分布上差异均无统计学意义。对照组基因型频率分布符合HardyWeinberg平衡。病例组该位点TT基因型占76.5%,TC基因型占19.3%,CC基因型占4.3%;对照组TT基因型占78.1%,TC基因型占20.3%,CC基因型占1.6%。两组基因型频率分布差异无统计学意义(χ2=2.49,P=0.287)。病例组rs7144658位点各基因型与TC、TG、HDL-C和LDL-C均不相关。结论未发现FOXA1基因多态性与2型糖尿病的发生具有显著关联,未发现rs7144658位点基因突变对2型糖尿病患者的血脂水平有明显影响。

表达大鼠FoxA1的慢病毒制备和鉴定

通过PCR扩增获得大鼠FoxA1的cDNA,构建慢病毒重组载体plv-rFoxA1-IRES-EGFP,并瞬时转染293T细胞观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及Western blot检测FoxA1的表达.通过钙转将该重组载体与辅助质粒△8.91,pVSV-G共转染293T细胞制备慢病毒.研究结果表明,大鼠FoxA1慢病毒质粒成功构建,并且证实所制备的慢病毒能感染细胞,使细胞有效表达FoxA1蛋白,为FoxA1的功能研究奠定了材料基础.

Luminal A型乳腺癌治疗进展

乳腺癌是一类受激素受体调控且高度异质性的恶性肿瘤,不同分子亚型其无病生存期、复发转移率及预后均不相同.其中Luminal A型乳腺癌属于预后最好的亚型,而FOXA1基因与Luminal A亚型乳腺癌患者的预后密切相关.