FOXC2基因与肥胖

FOXC2基因是新近发现的与脂肪细胞代谢有关的转录因子,属翼状螺旋/叉头转录因子家族。转基因小鼠高表达FOXC2可避免发生肥胖、高甘油三酯血症和饮食诱导的胰岛素抵抗。在人体中,FOXC2可调节脂肪细胞代谢,改善胰岛素敏感性。FOXC2基因多态性存在种族及性别差异。FOXC2可能是肥胖和胰岛素抵抗的候选基因。

半巢式PCR检测FOXC2基因多态性实验条件研究

目的:研究半巢式PCR方法检测FOXC2基因5’非翻译区C-512T多态性的实验条件。方法:对实验研究中的主要影响因素设置各系列浓度和梯度,进行PCR反应后观察电泳结果,选取最适条件。结果:最适温度为58℃,最适Mg2+浓度为3.0mmol/L,最适dNTP浓度为2.5mmol/L。最适扩增循环为第一次扩增35个循环,第二次扩增30个循环。结论:摸索最适实验条件是进行批量实验的前提和关键。

Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞修复实验性兔股骨头坏死

背景:通过髓芯减压能有效延缓早期骨坏死的自然进程,但是并没有彻底解决股骨头坏死的修复问题,最终仍可能导致股骨头塌陷,发生骨坏死。目的:探讨Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞复合明胶海绵移植对兔实验性股骨头缺血性坏死的治疗效果。方法:取40只新西兰大白兔制备股骨头坏死模型,MRI筛选制备成功模型24只,随机分为4组,空白对照组4只不作任何处理,髓芯减压组4只单纯减压,GFP治疗组8只在减压同时植入GFP基因转染骨髓间充质干细胞与明胶海绵复合材料,Foxc2治疗组8只在减压同时植入Foxc2基因转染骨髓间充质干细胞与明胶海绵复合材料。植入后第1,2,4周用ELISA方法测定植入局部组织中Foxc2蛋白表达水平。植入后4,8,12周进行髋部MRI扫描,然后取股骨头标本组织切片行苏木精-伊红染色,观察骨长入情况,并对12周标本行骨形态计量学测定及透射电镜观察。结果与结论:1植入后1,2,4周Foxc2治疗组股骨头局部有Foxc2蛋白的高表达,明显高于GFP治疗组。2植入后4,8,12周髓芯减压组、GFP治疗组只有较少新骨形成,12周时减压孔道有纤维性骨痂形成;Foxc2治疗组均有明显成骨,12周时坏死区被完全修复。3植入后12周Foxc2治疗组MRI表现为股骨头形态及信号均正常,髓芯减压组、GFP治疗组股骨头可见信号减低。4通过体外转染使骨髓间充质干细胞过表达Foxc2目的基因,利用髓芯减压移植到激素性股骨头坏死动物体内具有较好疗效。

FOXC2-512 C>T基因多态性与蒙古族代谢综合征患者血脂的相关性研究

目的:在内蒙古包头地区蒙古族人群中,探讨FOXC2-512 C>T基因多态性与代谢综合征(metabolic syn-drome,MS)患者血脂的相关性,为MS的早期诊断及预防提供实验依据。方法:在MS患者中,采用等位基因序列特异性聚合酶链反应法(PCR-SSP)检测FOXC2-512 C>T基因多态性,并比较不同基因型间甘油三酯(TC)、胆固醇(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平差异,分析FOXC2-512 C>T多态性与MS患者血脂的关系。结果:检测的各指标在CC、CT、TT三种基因型间的差异均无统计学意义。结论:FOXC2-512 C>T基因多态性与蒙古族代谢综合征患者的血脂没有关联。

等位特异PCR检测FOXC2检测基因多态性实验方法研究

目的研究等位特异PCR方法检测FOXC2基因5’非编码区512C／T多态性的实验条件。方法对实验研究中的主要影响因素设置各系列浓度梯度，进行PCR反应后观察电泳结果选取最适条件。结果最适温度为58℃，最适Mg^2＋浓度为3．0mmol/L，最适dNTP浓度为2．5mmol／L。结论摸索最适实验条件是进行批量实验的前提和关键。

一个淋巴水肿-双行睫综合征家系的FOXC2基因变异分析

目的对1个淋巴水肿-双行睫综合征(lymphedema-distichiasis syndrome,LDS)家系患者的FOXC2基因进行变异分析,明确患者的致病原因。方法采集家系成员血液样本并提取DNA和蛋白,对先证者进行全外显子组测序及生物信息学分析,确定可疑致病变异后应用Sanger测序进行家系验证、Western印迹技术检测蛋白表达量的变化。结果测序结果显示先证者和患病母亲均携带FOXC2基因c.177C>G(p.Tyr59X)杂合无义变异,该变异目前尚未被报道过,Western印迹检测显示FOXC2蛋白表达下降。其母在早孕期B超提示胎儿NT增厚,孕21+1周行羊水穿刺对胎儿进行产前诊断,产前基因诊断结果提示胎儿也携带c.177C>G变异。结论FOXC2基因c.177C>G无义变异是患儿的致病原因,并导致Foxc2蛋白表达下降,胎儿NT增厚可能和Foxc2表达量下降有关。本研究结果扩大了FOXC2基因变异谱。

蒙古族人群FOXC2—512C〉T基因多态性与代谢综合征相关性研究

目的 探讨蒙古族人群代谢综合征（MS）发病的遗传机制和遗传易感性,为MS的早期预防及诊断治疗提供科学依据.方法 通过采用等位基因序列特异性聚合酶链反应法检测FOXC2-512C＞T基因多态性,比较MS组与正常对照组间基因型和等位基因频率分布,同时通过比较不同基因型间BMI、腰臀比、血压、TG、空腹血糖、高密度脂蛋白（HDL）水平差异,分析FOXC2-512C＞T基因多态性与MS的关系.结果 MS组腹围、臀围、BMI、空腹血糖、TG、TC、SBP、DBP均明显高于对照组,HDL值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.MS组及对照组FOXC2-512C＞T基因分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡（x2=1.21,P=0.28;x2=1.51,P=0.20）.MS组FOXC2-512C＞T基因C/C、T/C、T/T频率分别为26.7%、58.3%、15.0%,对照组为13.9%、39.3%、46.7%;MS组C、T等位基因频率为55.8%、44.2%;对照组为33.6%、66.4%.2组间基因型分布比较及等位基因分布比较,差异均具有统计学意义（均P＜0.05）.多元逐步Logistic回归分析显示,在包头地区蒙古族人群中,FOXC2-512C＞T基因型、空腹血糖、TG、血压、BMI是MS发病的危险因素.结论 FOXC2-512C＞T基因型对MS的发生有较高的危险性,其很有可能成为MS治疗的新靶点.但FOXC2-512C＞T基因是否可作为中国内蒙古地区蒙古族人群MS发病的分子遗传学标志,还有待进一步大样本的研究予以证实.

基因芯片技术筛选2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪代谢相关差异表达基因

目的:应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者和正常人大网膜组织脂肪代谢相关基因表达谱的差异,探讨IR可能的发病机制。方法:分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将IR组(n=5)和正常对照组(n=5)脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因。然后对芯片筛选结果中差异表达的FOXC2基因用Northern印迹法进行验证。结果:IR组和正常对照组之间共筛选出82条差异表达已知基因;其中脂肪代谢相关基因10条,表达增加的基因5条,表达降低的基因5条。Northern印迹证实IR组FOXC2 mRNA表达明显升高,与基因芯片检测结果一致。结论:IR的发病与脂肪代谢相关,FOXC2可能是2型糖尿病IR的候选基因。

Foxc2 稳定转染对C3H10T1/2细胞成骨性能的影响

目的 :探讨Foxc2基因过表达对体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞系C3H10T1/2细胞生物学行为及分化能力的影响。方法:通过慢病毒转染构建Foxc2过表达C3H10T1/2细胞系,采用实时定量PCR和Western免疫印迹法检测转染后Foxc2蛋白的表达。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,实时定量PCR和Western免疫印迹法检测过表达Foxc2对成骨、成脂相关基因(Runx2、OPN、OCN、PPARγ)表达的影响,分别通过碱性磷酸酶(ALP)染色和油红染色检测细胞成骨和成脂分化能力。采用SPSS 17.0软件包对数据进行t检验。结果:成功构建Foxc2稳定过表达的C3H10T1/2细胞系,发现Foxc2过表达阻滞细胞于G1期,抑制细胞增殖。在成骨诱导过程中,过表达Foxc2可以显著上调Runx2、OPN、OCN等成骨相关基因的表达。ALP染色显示,Foxc2稳定过表达细胞较对照组细胞染色深。在成脂诱导过程中,过表达Foxc2显著下调PPARγ基因的表达;油红染色显示,成脂分化进程被部分抑制。结论:Foxc2过表达抑制细胞增殖,促进细胞分化。其机制是上调Runx2、OPN、OCN成骨相关基因的表达,下调PPARγ的表达,促进C3H10T1/2细胞的成骨分化,抑制其成脂分化。

插头框旋转录因子C2转染BMSCs后成骨作用的研究

[目的]观察过表达Foxc2基因对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。[方法]构建携带Foxc2和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒表达载体,分离、培养兔BMSCs,分别以Lenti-GFP(GFP组)、Lenti-Foxc2(Foxc2组)转染BMSCs,另设未转染BMSCs对照组。MTT法检测过表达Foxc2对细胞增殖能力;Western blot、Real time PCR检测转染后7d各组细胞Foxc2蛋白、m RNA表达;以及转染后1、2、4周各组细胞骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、一型胶原(COLⅠ)蛋白及m RNA表达;转染后2周,各组行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测。[结果]Foxc2组Foxc2 m RNA和蛋白高效表达;对照组、GFP组无Foxc2 m RNA及蛋白表达;MTT法检测示过表达Foxc2对BMSCs的增殖未产生显著影响;Foxc2组OCN、OPN、COLⅠm RNA和蛋白表达显著高于其他组(P<0.01),余组比较差异无统计学意义(P>0.05);Foxc2组ALP染色阳性区域大于其余两组;ALP活性显著高于其他各组(P<0.01)。[结论]过表达Foxc2不影响细胞增殖,可持续表达基因产物,并可促进BMSCs向成骨细胞分化。