免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞

目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。

FOXP3基因多态性与变应性鼻炎的相关性研究

目的探讨FOXP3基因多态性与变应性鼻炎（AR）的相关性。方法临床纳入AR患者55例以及健康者55例作为研究对象，分别为AR组和健康组。参考Hapmap网站公布的中国北京地区人群的FOXP3基因标签单核苷酸多态性（SNPs）信息以及Haploview4．1软件运行的结果，选择rs3761547与rs3761548两个位点，通过聚合酶链反应测序法进行相关基因型的检测。结果rs3761547与rs3761548两个位点的杂合突变与AR的发生具有相关性，但是经校正P值后发现只有rs3761548位点仍均有统计学意义（OR值为3．10，95％CI为1．19～8．02，P〈0．05）。对不同过敏原进行分层分析，发现尘螨过敏患者中rs3761547与发病存在明显的相关性（OR值为1．98，95％CI为1．16～3．37，P〈0．05）。结论rs3761548的AC杂合突变与AR发病存在较为密切的关系，而rs3761547与尘螨过敏的AR存在一定的联系。