期刊文献+
共找到62篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing CEVB2L Gene 被引量:2
1
作者 邵洪泽 毛文智 +4 位作者 宋阳 李琳 程荣华 孙健 孙强 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第3期94-97,共4页
[Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragm... [Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragments obtained from B2L by PCR amplification;B2L gene cloning was cloned into PDNR-CMD vector,screening positive clones and plasmid CTC572-6 was obtained;CTC572-6 plasmid for homologous was recombined with the adenoviral vector.Screening positive clones and bacilli PCR,digestion and sequencing and so on were identified.[Result] After identified by enzyme digestion and gene sequencing,recombinant adenovirus vector CTC572Ade-30 of carrying sheep contagious ecthyma virus B2L gene was constructed successfully.[Conclusion] Which laid the foundation for sheep contagious ecthyma genetically engineered vaccine. 展开更多
关键词 CEV B2L gene adenovirus vector
下载PDF
Construction of the recombinant adenovirus vectors of CALB_2 gene and small interfering RNA,and application in testicular Leydig cells
2
作者 罗建 王菁 +6 位作者 刘姗 孙雪萍 高超 高莉 杨晓玉 刘嘉茵 崔毓桂 《生殖医学杂志》 CAS 2011年第B12期57-65,共9页
Objective:To construct the recombinant adenovirus vectors of calretinin(CALB_2) gene and small interfering RNA(siRNA),for over-expression or knock-down of CALB_2,as the basis of functional investigation of CALB_2 in t... Objective:To construct the recombinant adenovirus vectors of calretinin(CALB_2) gene and small interfering RNA(siRNA),for over-expression or knock-down of CALB_2,as the basis of functional investigation of CALB_2 in testicular Leydig cells. Methods:The cDNA sequence of CALB_2 was cloned by the reverse transcriptive polymerase chain reaction (RT-PCR).A CALB_2 gene fragment was sub-cloned into adenovirus shuttle plasmid pAdTrack-CMV to construct the shuttle plasmid pAdTrack-CALB_2.Then it was transformed into BJ5183 cells with the adenoviral backbone pAdEasy-1 to obtain the homologous recombinant AdCMV-CALB_2.The recombinant AdCMV-CALB_2 was further packaged and amplificated in AD293 cells.The expression of CALB_2 protein in AD293 cells was detected by Western blotting.CALB_2 protein was over-expressed in mouse Leydig cell line(MLTC-1 cells) by the constructed AdCMV-CALB_2. CALB_2 gene siRNA recombinant adenovirus vector(Ad-H1-siRNA/CALB_2 was also constructed simultaneously. Its efficacy was detected in AD293 cells by Western blotting. Results:The CALB_2 gene recombinant adenovirus vector AdCMV-CALB_2 and the CALB_2 gene siRNA recombinant adenovirus vector Ad-H1-siRNA/CALB_2 were constructed successfully by endonulease digestion and sequencing. AD293 cells infected with AdCMV-CALB_2 or Ad-H1-SiRNA/CALB_2 significantly expressed GFP protein. The expression of CALB_2 protein was significantly up-regulated in AD293 cells infected with AdCMV-CALB_2 plasmids, while the expression of CALB_2 protein was down-regulated by 60%in the CALB_2 cells infected with Ad-H1-SiRNA/CALB_2. MLTC-1 cells did not markedly express CALB_2 protein,while MLTC-1 cells infected with AdCMV-CALB_2 expressed CALB_2 protein at a high level. Conclusions:The recombinant adenovirus vectors of AdCMV-CALB_2 and Ad-H1-SiRNA/CALB_2 were successfully constructed.Both vectors effectively expressed in AD293.CALB_2 protein was over-expressed in the cultured MLTC-1 cells by AdCMV-CALB_2.These vectors of CALB_2 gene and Leydig cell line are useful tools for investigating the testicular function. 展开更多
关键词 重组腺病毒载体 睾丸间质细胞 小干扰RNA 基因片段 WESTERN印迹法 逆转录聚合酶链反应 siRNA 293细胞
下载PDF
Construction and expression of SET gene and siRNA recombinant adenovirus vectors
3
作者 许波群 陆品红 +6 位作者 李瑛 薛凯 李梅 马翔 刁飞扬 崔毓桂 刘嘉茵 《生殖医学杂志》 CAS 2010年第A02期64-72,共9页
Objective:To construct SET gene recombinant adenovirus vector and SET gene small interfering RNA(SiRNA) recombinant adenovirus vector for over-expression or knock-down of SET levels. Methods:The cDNA sequence of SET w... Objective:To construct SET gene recombinant adenovirus vector and SET gene small interfering RNA(SiRNA) recombinant adenovirus vector for over-expression or knock-down of SET levels. Methods:The cDNA sequence of SET was cloned by reverse transcriptive polymerase chain reaction(RT-PCR) and the SET gene fragment was subcloned into adenovirus shuttle plasmid pAdTrack-CMV to construct the shuttle plasmid pAdTrack-SET.The shuttle plasmid pAdtrack-SET was transformed into BJ5183 cells with the adenoviral backbone pAdEasy-1 to obtain the homologous recombinant Ad-CMV-SET and the recombinant Ad-CMV-SET was packaged and amplified in the AD293 cells.The expression of SET in AD293 cells was detected by Western blot.In addition,we constructed SET gene SiRNA recombinant adenovirus vector(Ad-H1-SiRNA/SET) and its efficacy of knockdown of SET protein was detected in infected GC-2spd(ts) cells by Western blot. Results:The recombinant adenovirus vectors,both SET gene recombinant adenovirus vector Ad-CMV-SET and SET gene SiRNA recombinant adenovirus vector Ad-H1-SiRNA/SET,were proven to be constructed successfully by the evidence of endonulease digestion and sequencing.AD293 cells infected with either recombinant adenovirus vector of Ad-CMV-SET or Ad-H1-SiRNA/SET were observed to express GFP.The expression of SET protein was up-regulated significantly in AD293 cells infected with SET gene recombinant adenovirus vector.On the contrast, SET protein was significantly down-regulated in the GC-2spd(ts) cells infected with Ad-H1-SiRNA/SET (P<0.05) and the knockdown efficiency was approximately 50%-70%. Conclusion:The recombinant adenovirus vector Ad-CMV-SET and Ad-H1-SiRNA/SET were successfully constructed and effectively expressed in germ cells and somatic cells.It provides an experimental tool for further study of SET gene in the physiological and pathophysiological mechanism of reproduction-related diseases. 展开更多
关键词 重组腺病毒载体 SIRNA 基因片段 逆转录聚合酶链反应 绿色荧光蛋白 巨细胞病毒 RNA干扰 293细胞
下载PDF
Adenovirus vector expressing mda-7 selectively kills hepatocellular carcinoma cell line Hep3B 被引量:6
4
作者 Xue, Xin-Bo Chen, Kun +4 位作者 Wang, Cong-Jun Zheng, Jian-Wei Yu, Yuan Peng, Zhi-Hai Wu, Zai-De 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS 2008年第5期509-514,共6页
BACKGROUND: Melanoma differentiation associated gene-7 (mda-7) is a novel tumor suppressor gene, which has suppressor activity in a broad spectrum of human cancer cells both in vitro and in vivo through activation of ... BACKGROUND: Melanoma differentiation associated gene-7 (mda-7) is a novel tumor suppressor gene, which has suppressor activity in a broad spectrum of human cancer cells both in vitro and in vivo through activation of various intracellular signaling pathways. In this study, we investigated the potential effect of mda-7 on human hepatocellular carcinoma (HCC) in vitro. METHODS: Cells from the human HCC cell line Hep3B and the human liver cell line L-02 were assigned to three groups. One was cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium without serum (control). The others were transfected with adenovirus expressing the mda-7 gene (Ad.mda-7) or adenovirus vector serving as negative control (Ad.vec). The expression of MDA-7 and Bcl-2 proteins in Hep3B and L-02 cells was confirmed by the reverse transcriptase-polymerase chain reaction and enzyme-linked immunosorbent assay. The methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric assay and flow cytometry were used to assess tumor cell proliferation and the cell cycle. Hoechst and Annexin-V/propidium iodide staining were used to study mda-7 gene expression in Hep3B and L-02 cells. The expression of MDA-7, Bcl-2 and Bax proteins were detected by Western blotting. RESULT S: The mda-7 gene was expressed in Hep3B and L-02 cells. The protein concentrations of MDA-7 in supernatants were 790 and 810 pg/ml, respectively. mda-7 induced Hep3B growth suppression and apoptosis, compared with Ad.mda-7 and control (P<0.01). In addition, cell block in G2/M was identified by exposure of HCC cells to secreted MDA-7 protein, but this was not found in L-02. The gene expression of Bcl-2 was markedly decreased in Hep3B but not in L-02. CONCLUSIONS: mda-7 selectively induces growth inhibition and apoptosis in the HCC cell line Hep3B but not in the normal liver cell line L-02 via downregulating the antiapoptosis protein Bcl-2. It could be an ideal gene for gene therapy in HCC. 展开更多
关键词 replication-incompetent adenovirus vector melanoma differentiation associated-7 gene carcinoma hepatocellular Bcl-2
下载PDF
FOXL2基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
5
作者 沈涛 李青旺 +1 位作者 韩增胜 张彦朋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期96-98,170,共4页
为了构建叉头框L2(Forkhead box L2,FOXL2)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因复制缺陷型腺病毒载体,试验将克隆的FOXL2基因与IRES-GFP片段通过酶切、纯化等方法共同连接到pShuttle-CMV载体中,再与pAdEasy-1腺病毒质粒在BJ5183大肠杆菌中进行... 为了构建叉头框L2(Forkhead box L2,FOXL2)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因复制缺陷型腺病毒载体,试验将克隆的FOXL2基因与IRES-GFP片段通过酶切、纯化等方法共同连接到pShuttle-CMV载体中,再与pAdEasy-1腺病毒质粒在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,得到复制缺陷型AD-FOXL2腺病毒载体,再用PacⅠ酶线性化后转染HEK293细胞,观察绿色荧光表达,并测量病毒效价。结果表明:将AD-FOXL2腺病毒载体用PacⅠ酶线性化后,得到1个大于23 kb的大片段和1个4.5 kb的特异性小片段,证明同源重组成功;将所得的腺病毒载体转染HEK293细胞,可以观察到GFP的表达,证明包装成功,并测得病毒效价为1×10-8.61/0.1 mLTCID50。 展开更多
关键词 foxl2基因 转基因 腺病毒 载体
下载PDF
人骨形态发生蛋白-2基因克隆及真核表达载体的构建 被引量:6
6
作者 周诺 黄旋平 +3 位作者 廖妮 韦山良 梁飞新 麦华明 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期487-489,共3页
目的克隆人骨形态发生蛋白-2(hBMP2)基因片段,构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形态发生蛋白-2基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,... 目的克隆人骨形态发生蛋白-2(hBMP2)基因片段,构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形态发生蛋白-2基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,构建pcDNA3.1-hBMP2重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。结果经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人BMP2-cDNA。结论本实验成功克隆了hBMP2基因并构建成其真核表达质粒。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-2 基因克隆 真核表达载体
下载PDF
克隆并构建人骨形成蛋白2真核表达载体 被引量:11
7
作者 田晓滨 孙立 杨述华 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期112-115,共4页
目的探讨构建人骨形成蛋白2(humanbonemorphgeneticprotein2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转... 目的探讨构建人骨形成蛋白2(humanbonemorphgeneticprotein2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒。分别用EcoR和Not双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1(+)真核表达载体,将克隆载体中hBMP基因重组到pcDNA3.1(+)真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序。结果人骨肉瘤细胞中经RT-PCR得到1.2kbp的hBMP-2扩增条带,重组质粒pGEM-T-hBMP-2经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和4.0kbp的载体片断;pcDNA3.1-hBMP-2质粒经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和5.0kbp的载体片断,重组质粒酶谱分析与预期一致;DNA序列分析测序结果校对后经BLAST分析,表明核酸序列与GeneBank中和hBMP-2的mRNA序列完全吻合。结论通过此方法能成功克隆获得hBMP-2基因,并构建其真核表达载体。 展开更多
关键词 骨形成蛋白2 真核表达载体 基因克隆
下载PDF
人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建 被引量:4
8
作者 王芹 李进 +4 位作者 王颖嫒 宋力 岳井银 穆传杰 樊飞跃 《广西医科大学学报》 CAS 2009年第4期516-518,共3页
目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含... 目的:构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法:从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含IL-21基因的腺病毒载体(Ad-IL-21),并进行测序鉴定和PCR鉴定。结果:Ad-IL-21表达载体测序结果与GenBank中IL-21基因序列一致,Ad-IL-21经PCR扩增出IL-21基因片段。结论:成功构建携带人IL-21基因的重组腺病毒表达载体。 展开更多
关键词 IL-21基因 基因克隆 腺病毒表达载体 LR重组反应
下载PDF
重组腺病毒人白细胞介素2的质量分析 被引量:4
9
作者 林建伟 王军志 饶春明 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期639-643,共5页
目的 通过对重组腺病毒人白细胞介素 2 (Adv IL2 )的质量研究和实验方法参数的选择 ,建立Adv IL2的质量控制标准。方法 选用CPE法测定病毒滴度 ;将病毒转染Hela细胞 ,表达出IL 2 ,分别用MTT法和ELISA法测定IL 2的活性和表达量。建立... 目的 通过对重组腺病毒人白细胞介素 2 (Adv IL2 )的质量研究和实验方法参数的选择 ,建立Adv IL2的质量控制标准。方法 选用CPE法测定病毒滴度 ;将病毒转染Hela细胞 ,表达出IL 2 ,分别用MTT法和ELISA法测定IL 2的活性和表达量。建立了UV和IE HPLC系统分析纯度 ;琼脂糖凝胶电泳检查基因组分子量和基因组酶切图谱 ;PCR法鉴定病毒特征基因E2B区、IL 2表达基因盒和外源因子 (复制型病毒RCV ,HIV ,HBV和HCV) ;按照《中国生物制品规程》的有关规定进行了其他项目检查。结果 测定的重组腺病毒人白细胞介素 2原液滴度达 3× 10 1 0pfu·mL- 1 。IL 2表达活性达 70 0U·mL- 1 ,表达量约 2 5ng·mL- 1 。制品的A2 6 0nm A2 80nm 为 1 2 3;IE HPLC纯度检查大于98%。基因组分子量和基因组酶切图谱以及病毒特征基因E2B区和IL 2表达基因检查结果均在理论值范围 ;复制型病毒RCV ,HIV ,HBV和HCV检测均呈阴性 ;其他项目均符合规定。结论 建立了重组腺病毒人白细胞介素 2的质量标准 。 展开更多
关键词 重组腺病毒人白细胞介素2 腺病毒载体 质量标准 基因治疗 白细胞介素2
下载PDF
EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达 被引量:2
10
作者 彭光勇 姚堃 +2 位作者 许琳 徐江英 谢芳艺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期155-158,161,共5页
目的 :构建EB病毒潜伏期膜蛋白 2A重组腺病毒 ,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗。方法 :利用RT PCR扩增出EB病毒B95 8株潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因 ,并克隆至pGEM T载体中。并将LMP2AcDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX... 目的 :构建EB病毒潜伏期膜蛋白 2A重组腺病毒 ,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗。方法 :利用RT PCR扩增出EB病毒B95 8株潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因 ,并克隆至pGEM T载体中。并将LMP2AcDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW ,选择正确的克隆pAX1CW LMP2A与Ad5DNA 末端肽复合体共转染 2 93细胞 ,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒。提取重组腺病毒转染的 2 93细胞DNA ,通过酶切初步鉴定。选择阳性克隆感染CV1细胞 ,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况。结果 :挑选同源重组 17个克隆中有 9个为阳性克隆 ,扩增到的病毒滴度为 2 3× 10 8pfu/ml。用MOI =10 0的重组腺病毒感染CV1细胞 ,48h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上 ,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为 94 4 %。结论 :重组腺病毒能有效地介导LMP2A基因的表达 ,为进一步研究该基因功能及其工程疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 EB病毒 LMPSA基因 腺病毒载体 基因转移 基因表达 潜伏期 RT-PCR法
下载PDF
拟南芥AtNCED2基因启动子区域序列克隆及其活性分析 被引量:4
11
作者 万小荣 莫爱琼 +1 位作者 潘家辉 梁翠瑶 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期18-23,共6页
目的:克隆拟南芥AtNCED2基因启动子区域序列,并分析其组织器官特异性及对外界刺激的响应。方法:通过PCR从拟南芥基因组中克隆AtNCED2基因5’侧翼2295bp启动子区域序列(AtNCED2p),并进行生物信息学分析。构建AtNCED2p驱动GUS的植物双元... 目的:克隆拟南芥AtNCED2基因启动子区域序列,并分析其组织器官特异性及对外界刺激的响应。方法:通过PCR从拟南芥基因组中克隆AtNCED2基因5’侧翼2295bp启动子区域序列(AtNCED2p),并进行生物信息学分析。构建AtNCED2p驱动GUS的植物双元表达载体pAtNCED2p::GUS,通过根癌农杆菌介导法将其转化野生型拟南芥,检测转基因植株中GUS表达的组织器官特异性。结果:该启动子序列中存在TATA-box、CAAT-box、根器官特异性元件、ABA响应元件、低温响应元件、昼夜节律响应元件等顺式作用元件。GUS活性主要集中在转基因拟南芥根尖及侧根发生部位。外源ABA处理的转基因植株根中GUS活性为174.8nmol4-MU min-1mg-1蛋白,明显高于对照值91.7nmol 4-MU min-1mg-1蛋白。结论:AtNCED2基因可能在根的生长和发育中起作用,且外源ABA处理增强其在根中的表达。 展开更多
关键词 拟南芥AtNCED2基因 双元载体构建 启动子克隆及活性分析 脱落酸
下载PDF
人骨形成蛋白2基因克隆及真核表达载体的构建 被引量:4
12
作者 郭勇 张西正 +2 位作者 李娜 赵红斌 曾强成 《生物医学工程研究》 2004年第3期133-136,共4页
在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白 2基因并获得真核表达载体。由人成骨瘤细胞中提取总RNA ,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白 2基因cDNA ;将此基因片段重组到pGEM -T克隆载体中 ,转化到大肠杆菌DH5α后 ,蓝白斑筛选阳性克隆 ,利用限... 在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白 2基因并获得真核表达载体。由人成骨瘤细胞中提取总RNA ,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白 2基因cDNA ;将此基因片段重组到pGEM -T克隆载体中 ,转化到大肠杆菌DH5α后 ,蓝白斑筛选阳性克隆 ,利用限制性酶切、PCR扩增和核苷酸序列分析鉴定重组质粒 ;将pGEM -T克隆载体中人骨形成蛋白 2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体中 ,用限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒。结果表明 :重组在两种质粒中的基因片段为人骨形成蛋白 2基因全编码序列。克隆获得人骨形成蛋白 2基因 ,并得到此基因的真核表达载体 ,为人骨形成蛋白 2的表达打下了基础。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白2 基因克隆 真核表达载体 大肠杆菌 骨修复
下载PDF
人骨形成蛋白2和人骨形成蛋白7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建 被引量:1
13
作者 吉建新 廖伟娇 +3 位作者 刘利东 卢春生 朱伯平 范婷婷 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期410-413,共4页
目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达... 目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2MP和pcDNA3.1(+)/BMP-7MP。结果总RNA提取液电泳可见在28S、18S和5S处出现明显的条带,PCR和酶切可在439bp和364bp出现条带,阳性克隆测序结果与Genebank中登录的序列一致。结论成功克隆出人BMP-2MP和BMP-7MP基因,成熟肽基因已与pcDNA3.1(+)连接,成功构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2MP和pcDNA3.1/BMP-7MP,为进一步研究BMP-2、BMP-7的功能及其成熟肽基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 骨形成蛋白-2 骨形成蛋白-7 基因克隆 真核表达载体
下载PDF
哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达 被引量:1
14
作者 吴健谊 蒋太峰 +3 位作者 谢剑君 张锴 杜则澎 许丽艳 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2011年第4期245-249,共5页
目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的C... 目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果:RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论:成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。 展开更多
关键词 CDK2 基因克隆 真核表达载体
下载PDF
山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建 被引量:1
15
作者 刘海燕 岳华 +5 位作者 汤承 杨发龙 张焕容 黄兴 张平 周光荣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期16-19,23,共5页
为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕... 为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。 展开更多
关键词 山地乌骨鸡 Β防御素 Gal-2基因 克隆 酵母 表达 载体
下载PDF
鸡传染性法氏囊病病毒BJ-10株VP2基因的克隆及原核表达 被引量:1
16
作者 王俊全 王韦华 刘桂梅 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第9期38-42,共5页
【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,... 【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,筛选出阳性重组质粒;将该质粒克隆至原核表达载体pET-32α中,转化入JM109,经IPTG诱导表达,对产物进行SDS-PAGE电泳分析,确定IPTG的最佳诱导表达时间和浓度。【结果】克隆到了全长1 356bp的IBDV BJ-10株VP2基因;PCR、酶切鉴定分析表明,成功构建了重组质粒pET-32α-VP2;SDS-PAGE电泳分析表明,在宿主菌JM109中成功表达了约为60ku的VP2蛋白;IPTG诱导表达时间以4.5h为宜,诱导最佳浓度为0.8mmol/L。【结论】成功克隆了IBDV BJ-10株VP2基因,并在大肠埃希菌中表达了VP2蛋白。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 基因克隆 原核表达载体
下载PDF
IL-2Rα结合位点修饰型OviIL-2基因真核表达载体的构建 被引量:1
17
作者 王文昊 苗利光 +3 位作者 李海涛 刘艳环 王松 安亚雄 《特产研究》 2011年第4期5-8,共4页
IL-2主要由激活后的T细胞产生,是一种天然的免疫增强剂,临床应用广泛。为了表达roviIL-2,本研究采用人工合成的方法获得基因,通过大肠杆菌对目的基因进行扩增筛选,并成功构建了适用于毕赤酵母表达系统的roviIL-2的真核表达载体pPIC9K-ro... IL-2主要由激活后的T细胞产生,是一种天然的免疫增强剂,临床应用广泛。为了表达roviIL-2,本研究采用人工合成的方法获得基因,通过大肠杆菌对目的基因进行扩增筛选,并成功构建了适用于毕赤酵母表达系统的roviIL-2的真核表达载体pPIC9K-roIL2。本研究为下一步roviIL-2的真核表达及免疫机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊IL-2 基因克隆 真核表达载体
下载PDF
Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和鉴定
18
作者 马树东 罗荣城 +2 位作者 丁振华 袁长青 丁雪梅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1641-1643,1647,共4页
目的构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料。方法RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺... 目的构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料。方法RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺病毒质粒,脂质体法转染293细胞后,荧光显微镜观察病毒噬斑形成和绿色荧光蛋白表达,Westernblot检测目的蛋白的表达。结果PCR扩增出了预定大小的目的基因cDNA片段,测序结果和GenBank完全相符。病毒质粒转染293细胞后形成了病毒噬斑,绿色荧光蛋白和目的蛋白均获得表达。目的蛋白的表达量随着病毒感染复数的升高而增加。结论成功地构建了在真核细胞中表达Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的腺病毒载体,为Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的功能研究提供了材料基础。 展开更多
关键词 HER2/NEU基因 载体 基因克隆 重组腺病毒
下载PDF
微囊化腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用
19
作者 伊远学 刘晓平 +5 位作者 李宝金 张超 冷希圣 刘筑 罗效梅 杨瑞兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期1516-1519,共4页
目的研究微囊化重组腺病毒AdCMV/Bcl-2转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用及其机制。方法利用气体雾化技术将携带Bcl-2基因的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/Bcl-2微囊化,检测其在人工胃、肠液中的融出率;将等量的重组腺病毒通过静脉注... 目的研究微囊化重组腺病毒AdCMV/Bcl-2转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用及其机制。方法利用气体雾化技术将携带Bcl-2基因的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/Bcl-2微囊化,检测其在人工胃、肠液中的融出率;将等量的重组腺病毒通过静脉注射、腹腔注射与口服微囊3种转染途径转染大鼠,应用RT-PCR和Western blot方法检测目的基因Bcl-2在小肠中的表达,并检测各组大鼠伤后血浆内毒素、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸含量和肠上皮细胞凋亡数量的变化。结果制备的微囊在人工胃液中仅有少量崩解,而在肠液中40min崩解融出率即达到(57.2±3.9)%,肠溶性良好;AdCMV/Bcl-2转染后48h大鼠肠黏膜Bcl-2基因的表达显著增强,其中,口服微囊组Bcl-2表达最强;AdCMV/Bcl-2转染使大鼠肠上皮细胞凋亡减少,伤后血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平显著降低(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒微囊化可保护其免受胃液损伤,并在肠道中被释放吸收。AdCMV/Bcl-2转染提高肠黏膜组织Bcl-2的表达在缺血再灌注损伤过程中可显著保护肠黏膜屏障功能。 展开更多
关键词 小肠 缺血再灌注损伤 基因转染 Bcl-2 微囊 腺病毒载体
下载PDF
hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定
20
作者 倪晓彬 陈敏生 +4 位作者 刘世明 何晓青 刘启才 董颀 赵路宁 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期319-322,共4页
目的构建hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础。方法通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF165基因片段,并克隆到pMD-19T载体。将目的基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF165依次定向... 目的构建hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础。方法通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF165基因片段,并克隆到pMD-19T载体。将目的基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF165依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上。线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细胞以包装制备重组腺病毒。重组腺病毒经PCR鉴定之后进一步扩增、纯化。通过荧光计数确定病毒感染滴度。结果克隆的hBcl-2和hVEGF165基因测序正确,酶切重组穿梭载体质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物,重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞3 d后观察到GFP的表达,重组腺病毒的PCR得到hBcl-2和hVEGF165基因的PCR产物,滴度测定为5×109pfu/mL。结论成功构建制备了高滴度的hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为联合基因治疗心肌梗死的研究提供实验基础。 展开更多
关键词 hBcl-2基因 hVEGF165基因 双基因共表达 腺病毒载体
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部