西洋参茎叶总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤后FOXO3a/Bim信号通路的影响

目的:探讨西洋参茎叶总皂苷(PQS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤后FOXO3a/Bim信号通路的影响。方法建立心肌缺血再灌注模型(IR组),心肌缺血再灌注+PQS预处理组(IR+P)在术前3 d腹腔注射PQS,假手术组(S组)仅接受假手术。再灌注24 h后TUNEL法检测心肌细胞凋亡、生化指标测定、免疫组化和Western blots检测心肌FOXO3a,p-FOXO3a和Bim蛋白表达,实时荧光定量PCR检测心肌Bim mRNA表达。结果:TUNEL结果显示,与S组(0.6±0.0)相比,IR组(23.1±3.7)和(IR+P)组(12.4±3.1)凋亡率明显升高(P<0.01),且(IR+P)组明显低于IR组(P<0.01)。IR组和(IR+P)组心肌SOD明显低于S组(P<0.01),且(IR+P)组明显高于IR组(P<0.01);IR组和(IR+P)组心肌MDA、CK、LDH高于S组(P<0.05或P<0.01),且(IR+P)组明显低于IR组(P<0.05或P<0.01)。免疫组化和Western blots结果发现,三组心肌组织FOXO3a蛋白表达差异没有统计学意义(P>0.05);IR组和(IR+P)组p-FOXO3a蛋白明显低于S组(P<0.01),(IR+P)组高于IR组(P<0.01);IR组和(IR+P)组Bim蛋白明显高于S组(P<0.05或P<0.01),(IR+P)组低于IR组(P<0.05或P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与S组比较,IR组和(IR+P)组Bim mRNA明显升高(P<0.01),(IR+P)组低于IR组(P<0.01)。结论西洋参茎叶总皂苷可能是通过基因转录和蛋白质翻译水平调节FOXO3a/Bim信号通路对心肌缺血再灌注损伤起到保护作用。

骨疏方调节FoxO3a/Wnt信号通路对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤的影响

目的探讨骨疏方调节FoxO3a/Wnt信号通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导成骨细胞损伤的影响。方法CCK-8法检测不同浓度(0.01、0.1、1、10、100μmol/L)的骨疏方对H_(2)O_(2)诱导的MC3T3-E1细胞活力。随后设置对照组、H_(2)O_(2)(150μmol/L H_(2)O_(2))组、骨疏方组、骨疏方+空载体组、骨疏方+FoxO3a过表达组。CCK-8法、ELISA分别检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);成骨诱导分化后,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒及茜素红分析ALP活性、细胞骨矿化结节;qRT-PCR检测成骨相关基因OPN mRNA、Runx2 mRNA以及FoxO3a mRNA表达水平;Western blot检测通路相关蛋白FoxO3a、Wnt2、β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组MDA、FoxO3a表达显著增加,细胞活力、SOD、ALP活性、骨矿化结节数量、OPN mRNA、Runx2 mRNA、Wnt2、β-catenin表达显著降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,骨疏方组MDA、FoxO3a表达显著降低,细胞活力、SOD、ALP活性、骨矿化结节数量、OPN mRNA、Runx2 mRNA、Wnt2、β-catenin表达显著增加(P<0.05);与骨疏方+空载体组比较,骨疏方+FoxO3a过表达组MDA、FoxO3a表达显著增加,细胞活力、SOD、ALP活性、骨矿化结节数量、OPN mRNA、Runx2 mRNA、Wnt2、β-catenin表达显著降低(P<0.05)。结论骨疏方可改善H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤,可能与抑制FoxO3a/Wnt信号通路有关。

PI3K/Akt/FoxO1信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响

目的探究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞(hPASMC)及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响。方法细胞实验部分,将hPASMC分为4组:(1)空白对照组;(2)血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)组;(3)PDGF-BB+LY294002组;(4)PDGF-BB+紫杉醇(paclitaxel)组。采用TUNEL检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。动物实验部分,将12只SD大鼠随机分为4组:(1)空白对照组;(2)野百合碱(MCT)组;(3)MCT+LY294002组;(4)MCT+paclitaxel组。采用Western blot检测Bcl-2、cleaved caspase-3和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果细胞实验部分:相比于PDGF-BB组,PDGF-BB+LY294002组与PDGF-BB+paclitaxel组的Bcl-2表达水平下降(P<0.01),cleaved caspase-3表达水平上升(P<0.01);相比于空白对照组,PDGF-BB+LY294002组与PDGF-BB+paclitaxel组的凋亡率增加(P<0.01)。动物实验部分:相比于MCT组,MCT+LY294002组与MCT+paclitaxel组Bcl-2、磷酸化Akt与磷酸化FoxO1表达水平下降(P<0.01),cleaved caspase-3与FoxO1表达水平上升(P<0.01)。各组之间PI3K表达水平无显著差异。结论PI3K/Akt/FoxO1信号通路抑制hPASMC与肺动脉高压大鼠肺组织的细胞凋亡。

骨痹通消颗粒调控PI3K/AKT/FoxO1信号通路对人骨髓间充质干细胞骨脂分化的影响

目的探讨骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死(SANFH)的保护作用。方法收集接受髋关节置换术的SANFH、股骨颈骨折(FNF)患者股骨头和骨髓组织进行研究。检测骨组织内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、叉头框蛋白1(FoxO1)和胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)表达水平。分离、培养人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),CCK-8法检测骨痹通消颗粒含药血清对hBMSCs增殖的影响,油红O及茜素红染色观察细胞成脂和成骨分化情况,RT-qPCR、Western blot法分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCATT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA和通路蛋白表达情况。结果Western blot结果表明,SANFH患者股骨头组织中PI3K、AKT和SREBP蛋白表达较正常组明显升高,FoxO1表达则明显降低(P<0.05);不同体积分数骨痹通消颗粒含药血清均能促进hBMSCs增殖,其中以5%组作用48 h时最为明显;与模型组比,5%含药血清作用后可明显减少胞质中的脂滴着色进而增加钙盐沉积处的橙红色矿化结节,同时下调细胞中PPARγ、C/EBPαmRNA和上调Runx2、ALP mRNA表达水平(P<0.05)。此外,含药血清干预后,还可显著提高细胞中FoxO1蛋白表达,降低AKT、p-FoxO1和SREBP等蛋白表达(P<0.05)。结论骨痹通消颗粒干预后hBMSCs成脂分化减少、成骨分化增多,可有效改善糖皮质激素环境下的脂质沉积,其机制可能与调控PI3K/AKT/FoxO1信号通路有关。

右美托咪定经STAT3/FoxO3a信号转导通路对减轻H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的建立大鼠心肌细胞系H9C2细胞缺氧/复氧模型,探究STAT3/FoxO3a信号转导通路在右美托咪定(Dex)保护心肌缺氧/复氧损伤中的作用。方法实验时间:2023年7月至11月,地点:香港大学深圳研究院实验室。使用对数生长期的H9C2心肌细胞进行实验,将其分为不同组别:对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组,缺氧6 h/复氧12 h)、Dex预处理后缺氧/复氧组(D组),以及添加STAT3抑制剂Stattic+Dex预处理后缺氧/复氧组(S组)。通过CCK8试剂盒检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞损伤,丙二醛(MDA)试剂盒检测氧化应激水平,使用蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达。统计学方法采用单因素方差分析。结果H/R组H9C2细胞活力、Bcl-2和P62蛋白水平均低于C组,LDH、MDA、Bax、CC-3、LC3和Beclin-1蛋白水平均高于C组(均P<0.05)。Dex组细胞活力、P-STAT3/STAT3比值及Bcl-2、P62、FoxO3a蛋白水平均高于H/R组,LDH、MDA含量及Bax、CC-3、LC3、Beclin-1蛋白水平均低于H/R组(均P<0.05)。STAT3抑制剂可减弱Dex对心肌细胞损伤的保护作用。结论Dex预处理通过STAT3/FoxO3a信号转导通路,抑制心肌细胞的凋亡和自噬,降低氧化应激水平,减轻缺氧/复氧H9C2细胞损伤,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。

红花提取物通过调节PI3K/Akt/FoxO信号通路改善酒精性肝病

目的探讨红花提取物(Carthamus tinctorius L.extract,CTLE)对酒精诱导的肝损伤小鼠氧化应激、脂质代谢和凋亡水平的影响及其作用机制。方法采用慢性酒精喂养加急性酒精灌胃的酒精性肝病小鼠模型造模。小鼠被随机分为4组,造模期间每天观察小鼠状态变化并记录体质量。造模结束后,收集各组小鼠血液和肝脏组织。对小鼠血液进行生化分析。HE染色和油红O染色进一步评价小鼠肝脏病理损伤程度。应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、p-FoxO1、FoxO1、p-FoxO3a、FoxO3a、p-FoxO4、FoxO4、BCL-2和BAX因子的mRNA和蛋白表达水平。结果与模型组相比,CTLE给药组小鼠肝脏病理损伤程度和脂质沉积有所改善;小鼠血清及肝脏中的生化相关指标,如ALT、AST、TG、TC、MDA水平有所降低,GSH、SOD水平有所升高。并且通过调控PI3K/Akt/FoxO通路产生了更多的SOD,减少了活性氧(reactive oxygen species,ROS)对机体的损伤和细胞凋亡。结论CTLE可以通过PI3K/Akt/FoxO通路发挥抗氧化应激和抗凋亡作用,减轻小鼠的酒精性肝损伤,为治疗酒精性肝病和开发相关药物提供新的思路。

槲皮素调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路抑制C2C12细胞凋亡

目的:基于AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路探讨槲皮素对C2C12细胞增殖、成肌分化和凋亡的影响。方法:体外培养C2C12细胞进行成肌诱导,分别采用CCK8法(Cell Counting Kit-8)、ATP染色法及TUNEL法检测槲皮素对C2C12细胞增殖活力、成肌能力和凋亡的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测MyoD1和Myogenin基因和蛋白表达,筛选合适浓度。再采用合适浓度的槲皮素或AKT1通路抑制剂(LY294002)干预成肌诱导后的C2C12细胞,ATP法和TUNEL法分别检测C2C12细胞成肌能力和凋亡水平,Western blot检测p-AKT1、p-AMPK和p-Foxo3a蛋白表达水平。结果:①在一定范围内,槲皮素呈浓度依赖性促进C2C12增殖,12.5μmol/L的槲皮素显著促进C2C12细胞成肌分化,能显著提高成肌标志物MyoD1和Myogenin基因和蛋白表达,因此本研究选择12.5μmol/L的槲皮素用于后续研究。②10μmol/L LY294002显著抑制C2C12细胞成肌分化,促进细胞凋亡,抑制p-AKT1和p-AMPK蛋白表达,促进p-Foxo3a蛋白表达;12.5μmol/L槲皮素联合10μmol/L LY294002显著促进C2C12细胞成肌分化,抑制细胞凋亡,促进p-AKT1和p-AMPK蛋白表达,抑制p-Foxo3a蛋白表达。结论:槲皮素通过调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路的磷酸化促进C2C12细胞增殖和分化,抑制细胞凋亡。

小檗碱调节PI3K/AKT/FOXO1/Bim信号通路改善高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨小檗碱通过调节PI3K/AKT/FOXO1/Bim信号通路改善高糖诱导的足细胞损伤。方法用指数生长期的足细胞进行实验,实验分为正常对照组、高糖模型组、小檗碱作用组:浓度分别为30、60、90μmol·L^-1。CCK-8法检测细胞的存活率;Annexin V FITC/PI双色标记检测细胞的凋亡率;Transwell小室法考察细胞的迁移能力;Western blot法分析细胞上PI3K、p-AKT、p-FOXO1、Bim和足细胞标志蛋白nephrin、WT-1的表达情况。结果CCK-8检测结果显示,不同浓度的小檗碱对足细胞增殖能力的促进程度不同;An-nexin V FITC/PI双色标记细胞凋亡结果显示,小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡具有抑制作用;Transwell小室实验结果显示,小檗碱对高糖诱导的足细胞迁移具有抑制作用;Western blot的结果得出,小檗碱能明显升高nephrin、WT-1蛋白的表达,降低PI3K、p-AKT、Bim蛋白的表达,明显升高p-FOXO1蛋白的表达。结论小檗碱能缓解高糖诱导足细胞的损伤,其可能的机制与保护足细胞PI3K/AKT/FOXO1/Bim的信号通路有关。

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制,与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁,并发挥重要的作用。近年研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡,卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞,其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一,参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。

基于PI3K-Akt-FoxO信号通路的四物汤对小鼠骨髓基质细胞凋亡的影响

目的观察四物汤对小鼠骨髓基质细胞OP9细胞凋亡和PI3K-Akt-FoxO信号通路分子及靶基因Bim基因表达的影响,以及使用PI3K选择性抑制剂LY294002阻断PI3K-Akt-FoxO信号通路后四物汤对上述指标的影响。方法流式细胞术检测四物汤对OP9细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测PI3K、Akt、FoxO、Bim mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法检测PI3K、Akt、p-Akt、FoxO、p-FoxO、Bim蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,四物汤组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著上升(P<0.01,P<0.05),FoxO、Bim mRNA表达量显著下降(P<0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平显著上调(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.05),FoxO、Bim蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。相较于四物汤组,LY294002+四物汤组凋亡率明显上升(P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著降低(P<0.01),FoxO、Bim mRNA表达量显著升高(P<0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平明显下调(P<0.01),FoxO、Bim蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论四物汤可能通过激活PI3K-Akt-FoxO信号通路,下调Bim基因表达,从而抑制小鼠骨髓基质细胞凋亡。

肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响

目的通过研究肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响,探讨其在肝脏胰岛素抵抗方面的作用机制。方法连续两日同一时间测空腹血糖,并参考体重用随机分层抽样法将18只db/db小鼠分为模型组、吡格列酮组和肉桂酸组,正常组为同周龄db/m+小鼠,每组6只,分别给予肉桂酸溶液与等量DMSO灌胃4周。Elisa法检测血清胰岛素水平,全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和游离脂肪酸(FFA),Western blot法检测肝脏组织PI3K、AKT、FoxO1的蛋白表达。结果肉桂酸可降低db/db小鼠空腹血糖水平及血清ALT、AST、TG、TC和FFA的水平;其亦可上调肝脏组织PI3K、p-FoxO1、p-AKT蛋白表达水平,下调FoxO1蛋白表达水平。结论肉桂酸可以改善db/db小鼠的空腹葡萄糖水平,调节血脂及改善胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT/FoxO1信号通路来实现的。

基于PI3K/Akt/FoxO1信号通路研究中药益糖康对2型糖尿病大鼠糖脂代谢异常的影响

目的通过观察中药益糖康对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖、血脂水平,以及肝脏中PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白和肝脏糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)、葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达情况的影响,探究中药益糖康调节T2DM大鼠糖脂代谢异常的机制。方法从60只Wistar大鼠中随机选取8只入组正常组,其余大鼠均腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,采用随机数字表法随机分为模型组、益糖康组及二甲双胍组。益糖康组及二甲双胍组分别选用益糖康及二甲双胍进行灌胃,正常组及模型组选用生理盐水进行灌胃。连续给药6周后观察4组大鼠血糖、血脂、肝脏组织形态及肝脏组织中PI3K/Akt/FoxO1信号通路蛋白及糖异生关键酶PEPCK、G6Pase蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组T2DM大鼠的空腹血糖(FBG)、胰岛素水平(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显增高(均P<0.05);p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1的蛋白表达比例显著降低,p-PI3K/PI3K蛋白表达比例增加,PEPCK和G6Pase蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,益糖康组和二甲双胍组T2DM大鼠FBG、FINS、HbA1c、TC、TG水平均显著降低(均P<0.05),p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1表达比例显著提高,p-PI3K/PI3K表达比例降低,PEPCK和G6Pase蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论益糖康能够调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,上调p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平,下调FoxO1、PEPCK和G6Pase的蛋白表达水平,抑制T2DM大鼠肝脏糖异生,从而改善T2DM大鼠糖脂代谢异常。

转录因子FOXO3a相关信号通路在前列腺癌中的研究进展

FOXO3a是Forkhead转录因子亚家族O的一个重要成员,通过磷酸化、泛素化降解、微小RNA(miRNA)等方式在促进细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤转移等中发挥重要作用。研究发现增强FOXO3a表达能够抑制前列腺癌细胞生长,本文主要对FOXO3a在前列腺癌中的调控信号通路研究进展进行综述,拟为前列腺癌临床诊断和靶向治疗提供新的思路。

新生大鼠原始卵泡凋亡与PI3K/Akt/Foxo3a信号通路的相关性

目的:观察PI3K激动剂对新生大鼠卵巢PI3K/Akt/Foxo3a蛋白、细胞周期以及凋亡蛋白表达的影响。方法:取7日龄雌性大鼠卵巢体外培养,随机分为对照组、PI3K激活剂组、PI3K通路抑制剂组,每组10只。培养7dHE染色观察培养5d卵巢组织卵泡形态学;荧光显微镜法检测卵巢细胞凋亡;Western blot法比较p-AKT、p-FOXO3A、CDK2、P27、BCL-2及TAP63蛋白表达;PCR法检测培养3,5,7d PI3K、Akt、Foxo3a、Bcl-2、p27、Cdk2和Tap63 mRNA表达量。结果:PI3K激活剂组卵巢组织PI3K、p-AKT、p-FOXO3A、BCL-2、CDK2和TAP63蛋白表达增加(P<0.01),P27蛋白表达减少,尤以第5天最显著(P<0.05),之后逐渐下降,第7天达到最低(P<0.05);而PI3K抑制剂组卵巢组织PI3K、p-AKT、p-FOXO3A、CDK2、BCL-2和TAP63蛋白表达减少,P27蛋白表达增加。结论:激活PI3K/AKT/Foxo3a信号通路可以促进原始卵泡发育,其机制可能与上调卵巢组织PI3K、AKT、FOXO3A、BCL-2、CDK2和TAP63蛋白表达,下调P27蛋白表达有关。

苦参碱调控Sirt1/FoxO3信号通路促进胃癌细胞SGC7901凋亡的机制研究

目的研究苦参碱促进胃癌细胞SGC7901细胞凋亡的AKT/FoxO3信号通路机制,为临床新药研发提供参考。方法将生长状态良好的胃癌SGC7901细胞随机分为对照组、Nicotinamide处理组(20μmol/L)、苦参碱低剂量处理组(10μmol/L)、苦参碱高剂量处理组(40μmol/L)。Western Blotting法分析细胞凋亡蛋白Caspase-3/9、Bax/Bcl-2及Sirt1/FoxO3蛋白的表达,DAPI染色分析各组细胞的凋亡情况;免疫细胞化学法分析Sirt1/FoxO3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,Nicotinamide组和苦参碱组细胞Bax、Caspase-3/9和FoxO3的表达明显增强(P<0.05),而Bcl-2、Sirt1蛋白的表达明显减弱(P<0.05),DAPI染色凋亡小体明显增多;免疫组织化学发现FoxO3的荧光强度增强(P<0.05),而Sirt1蛋白的荧光强度减弱(P<0.05),且苦参碱的效果有剂量依从性(P<0.05)。结论苦参碱可能通过调控Sirt1/FoxO3信号通路促进胃癌细胞SGC7901的细胞凋亡过程。

异丙酚对大鼠全脑缺血再灌注后海马Akt—FOXO3a信号通路的影响

目的探讨异丙酚对大鼠全脑缺血再灌注后海马Akt—FOXO3a信号通路的影响。方法采用四血管闭塞法建立全脑缺血模型（IR组），全脑缺血再灌注＋异丙酚组（IR＋P组）脑缺血前10min腹腔注射异丙酚，假手术组（S组）仅接受假手术。术后48h三组大鼠进行神经功能学检测。术后4h处死取大脑，SP法进行免疫组化以及Western blots检测大鼠海马Akt、P—Akt、FOX03a、P—FOXO3a蛋白的表达。结果与S组比较，IR组和IR＋P组运动功能和感觉功能均明显降低（P〈0．01），IR＋P组高于IR组（P〈0．05或P〈0．01）。免疫组化及Western blots检测结果显示，三组海马Akt和FOX03a蛋白表达量在术后比较差异无统计学意义（P〉0．05）；IR组和IR＋P组海马P—Akt蛋白表达量明显高于s组（P〈0．05或P〈0．01）；IR＋P组低于IR组（P〈0．05或P〈0．01）。IR组和IR＋P组海马P—FOXO3a蛋白表达量明显低于S组（P〈0．01），IR＋P组高于IR组（P〈0．05或P〈0．01）。结论异丙酚可能通过对全脑缺血再灌注大鼠海马区Akt—FOXO3a信号通路活化的抑制作用，起到保护大鼠神经功能的作用。

血管紧张素II通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路诱导骨骼肌细胞萎缩

目的探讨血管紧张素II(Ang II)对骨骼肌细胞的调控作用及其作用机制。方法使用Ang II及其1型受体(AT1R)拮抗剂(ARB)奥美沙坦干预C2C12成肌细胞,分为Control、Ang II和Ang II+ARB三组。使用2%马血清诱导成肌细胞分化为肌管细胞。免疫荧光染色检测肌管细胞的平均面积改变,Western blot检测肌管细胞泛素连接酶、生肌调节因子(MRFs)和PI3K/Akt/FOXO1信号通路蛋白表达的变化。结果免疫荧光染色显示,Ang II干预后,肌管细胞的平均直径和面积减小(P<0.001);使用奥美沙坦干预后,肌管细胞平均直径和面积明显增大(P<0.01)。Western blot显示,Ang II干预后,肌管细胞p-PI3K/PI3K(P<0.01),p-Akt/Akt(P<0.001)和p-FOXO1/FOXO1(P<0.01)的比率降低;MURF1(P<0.05)和MAFbx(P<0.001)蛋白表达明显升高,MHC(P<0.01)和MyoD(P<0.05)蛋白表达明显降低;使用奥美沙坦处理后,能够减轻Ang II对肌管细胞的干预作用。结论Ang II能够通过抑制PI3K/Akt/FOXO1信号通路的磷酸化,促进蛋白的降解,抑制蛋白的合成,诱导骨骼肌细胞萎缩。

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的:比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法:不同浓度顺铂(cisplatin,DDP)干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)表达水平;应用10μmol/L顺铂(相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC 50值)干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白(p-FOXO3a)表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf A1)干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果:与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。结论:顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。

咖啡酸苯乙酯通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解猪精液常温保存氧化应激的作用机制

【目的】探究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年(1—2岁)、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集,将质检合格的样品混池待用。试验设计如下:首先,在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L^(-1)浓度的CAPE,将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡,随即转入17℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪(CASA)测定1—5 d精子运动学参数(总活率与渐进性活力),筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L^(-1)。其次,将0.06 g·L^(-1) CAPE与400μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)建立氧化胁迫模型,在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力,荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性,抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶(catalase,CAT)与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,在第5天利用实时荧光定量PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因(AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT)及凋亡基因BAX的mRNA表达水平,蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】(1)浓度筛选试验中,0.06 g·L^(-1)的CAPE在保存第3天显著提高精子的总活率并维持至第5天(P<0.05),不仅如此,精子的渐进性活力在第1天显著高于其他处理组(P<0.05)。(2)氧化胁迫试验中,H_(2)O_(2)处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均显著低于空白组与CAPE+H_(2)O_(2)混合组(P<0.05),而空白组与CAPE+H_(2)O_(2)混合组的总活率、顶体完整性、CAT与SOD活性不存在显著差异(P>0.05)。与CAPE+H_(2)O_(2)混合组相比,H_(2)O_(2)处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),BAX的表达水平显著升高(P<0.05),而空白组与CAPE+H_(2)O_(2)混合组的AMPK、SOD1、CAT与BAX不存在显著差异(P>0.05)。在蛋白表达水平中,CAPE+H_(2)O_(2)混合组与H_(2)O_(2)组相比,AMPK、p-AMPK与p-AMPK/AMPK比率显著提升(P<0.05)。【结论】在常温基础稀释液中添加0.06 g·L^(-1)CAPE可通过促进磷酸化AMPK的表达,诱导AMPK/FOXO3a信号下游抗氧化分子的转录,继而缓解H_(2)O_(2)介导的氧化危害对精液品质产生的影响,延长精液的保存时间,但CAPE保护精子氧化损伤更为深入的分子机制仍需作进一步探究。

丹栀调脂汤对高脂诱导MAFLD大鼠PI3K/AKT/FOXO1信号通路的影响

目的研究丹栀调脂汤对高脂饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠PI3K/AKT/FOXO1信号通路的影响,探讨其在MAFLD治疗中的作用。方法雄性SD大鼠分为正常组、模型组及丹栀调脂汤高、中、低剂量组。正常组和模型组予等体积的生理盐水,丹栀调脂汤高、中、低剂量组分别予丹栀调脂汤20.4、10.2、5.1 g·kg^(-1)·d^(-1),连续灌胃8周后取材。检测5组大鼠体质量、血脂、血糖、胰岛素水平及HOMA-IR变化情况;肝脏组织脂质沉积情况;Western blot检测PI3K/AKT信号通路中各蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量、TG、TC、FFA、GLU、INS、LDL-C及HOMA-IR水平明显升高,HDL-C水平明显降低;肝脏组织油红O染色可见明显肿大的肝细胞及明显的脂质沉积;PI3K、AKT蛋白磷酸化表达水平显著降低。相较于模型组,丹栀调脂汤高、中、低剂量组体质量、TG、TC、FFA、GLU、INS、LDL-C及HOMA-IR水平不同程度降低;肝细胞肿大、肝细胞脂滴及排列结构均有不同程度的改善;PI3K、AKT、FOXO1蛋白磷酸化表达水平升高。结论丹栀调脂汤可能通过PI3K/AKT/FOXO1信号通路改善胰岛素抵抗,进而达到防治MAFLD的目的。