支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

猪FoxP3、IL-10双重实时荧光定量PCR方法建立及应用

旨在建立双重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qPCR方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染外周血调节性T淋巴细胞(Treg)和免疫器官中FoxP3和IL-10的mRNA含量;根据Western blot检测蛋白表达验证方法的可靠性。结果:建立的RT-qPCR方法呈现“S”型扩增曲线,相关系数R^(2)≥0.99;转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素17(IL-17)等基因的核酸模板和阴性对照均无扩增曲线,最低检测浓度10 copies/μL,批内、批间变异系数分别为0.87%、1.84%;PCV2攻毒组外周血Treg细胞中FoxP3和IL-10的mRNA含量均出现明显升高,FoxP3的mRNA含量在攻毒第14天到达峰值,IL-10的mRNA含量在攻毒第10天到达峰值,PCV2感染后导致胸腺、淋巴结和脾脏中FoxP3和IL-10转录水平升高;Western blot检测表明,FoxP3蛋白表达量在攻毒第14天、第28天,IL-10在攻毒第10天和第14天显著高于对照组,与RT-qPCR结果一致。综上,本研究建立的猪FoxP3、IL-10双重RT-qPCR方法具有特异、敏感、检测稳定可靠的特点,对于评价猪体的免疫应答水平和机体免疫稳态具有重要意义。

哮喘小鼠中Foxp3^+Treg/Th17的失衡及意义

目的检测哮喘小鼠与对照小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17及Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比,探讨哮喘小鼠中Foxp3+Treg/Th17比值变化及其在哮喘中的意义。方法将6周清洁级Balb/c小鼠随机分为对照组(control)和哮喘组(OVA),哮喘组给予OVA致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,对照组用PBS代替OVA。最后1次激发后24 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色制作肺组织病理切片,光镜下观察病理变化;小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性;流式细胞术检测小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17、Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比。结果哮喘组BALF细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞比例显著高于对照组,肺部炎症反应与气道高反应显著高于对照组。哮喘组小鼠肺组织中Th2、Th17细胞百分比明显高于对照组[分别为(0.83±0.08)%vs(0.50±0.03)%;(1.74±0.17)%vs(1.07±0.07)%,P<0.01];而Th1、Foxp3+Treg细胞百分比显著低于对照组[分别为(1.39±0.14)%vs(2.56±0.18)%;(4.87±0.35)%vs(7.67±0.44)%,P<0.001];哮喘组Th1/Th2及Foxp3+Treg/Th17明显低于对照组(分别为1.66±0.17 vs 5.19±0.56;3.02±0.49 vs 7.38±0.71,P<0.001)。结论除Th1/Th2失衡外,Foxp3+Treg/Th17失衡在哮喘发病中亦有重要作用。

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3^+Tregs、Th17表达的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3^+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(S.pneumonia组)。S.pneumonia组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3^+Tregs和IL-17^+CD4^+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P<0.05),CD103^+DCs、Foxp3^+Tregs水平较对照组显著减少(P<0.05),CD11b^+DCs及IL-17^+CD4^+T细胞较对照组显著增高(P<0.01)。对照组肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达呈正相关(P<0.01,r=0.593),而新生期感染肺炎链球菌后CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达无相关性(P>0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Tregs发育,促进CD11b^+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。

儿童AITP治疗前后CD_4^+CD_(25)^(High)Foxp3^+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的探讨CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系。方法流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达。结果单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P<0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P<0.01)。结论CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及生活质量的影响

【目的】观察补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞和Foxp3 mRNA表达的影响及对患者生活质量的改善作用。【方法】将60例慢性持续期肾虚证支气管哮喘患者随机分为对照组、穴注组与肌注组,每组20例。对照组维持入组前的常规西医治疗方案,穴注组与肌注组在原有治疗基础上加喘可治注射液穴注双侧足三里穴或肌肉注射,疗程均为90 d。观察各组治疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及Foxp3 mRNA表达的变化、成人哮喘生命质量评分量表(AQLQ)及哮喘控制测试量表(ACT)评分变化。【结果】(1)治疗后,除对照组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例无显著性变化外,各组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均较治疗前显著升高(P<0.01),且穴注组和肌注组的升高作用均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组Foxp3 mRNA表达也较肌注组显著升高(P<0.05)。(2)治疗后,除对照组对刺激原的反应、自我健康的关心和肌注组对刺激原的反应无显著性变化外,各组AQLQ各维度评分及其总分均较治疗前显著改善(P<0.05或P<0.01);且穴注组和肌注组在改善活动受限、哮喘症状、自我健康的关心及其总分方面均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组在改善活动受限方面也优于肌注组(P<0.01)。(3)治疗30 d及90 d后,各组ACT评分均显著升高(P<0.05或P<0.01),且治疗90 d后,穴注组和肌注组均较治疗30 d后显著升高(P<0.01);治疗30 d及90 d后,穴注组和肌注组的ACT评分均较对照组显著升高(P<0.01)。【结论】喘可治注射液能够调节哮喘慢性持续期患者的外周血T淋巴细胞亚群的紊乱状态,使之恢复平衡,改善患者的临床症状和生活质量。

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及其特异标志物Foxp3表达水平的研究

目的:通过检测炎症性肠病(IBD)不同病期患者以及对照组外周血CD4+CD25+Treg及其特异标志物Foxp3的表达,来分析与IBD疾病活动性关系,探讨CD4+CD25+Treg和Foxp3在IBD发病机制中的作用。方法:52例IBD患者和35例正常对照组分别应用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中CD4+CD25+T细胞亚群的百分率测定和外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病缓解期患者和正常对照组(P<0.01);活动期IBD患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;IBD患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3 mRNA表达水平低于缓解期和正常人,差异有显著性(P<0.05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P>0.05);IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率及PBMC中的Foxp3 mR-NA表达水平与疾病活动指数评分呈负相关性。结论:活动期IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达下调,而恢复期其表达回升,且二者呈正相关,并与临床活动评分呈负相关,因此认为CD4+CD25+Treg细胞和Foxp3可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关。

结核患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与巨噬细胞凋亡的临床意义

目的探讨结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞(Treg)表达与单核巨噬细胞(MΦ)凋亡的可能关系及临床意义。方法用流式仪测定29例活动性结核、17例肺外结核患者治疗前及治疗后3、6个月PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达及MΦ凋亡率,并与20例健康对照者(健康对照组)进行比较。结果活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达明显高于健康对照组和治疗后患者,且复治患者高于初治患者,肺外结核高于肺结核;患者MΦ凋亡率明显高于健康对照组(P<0.01),初治组明显高于复治组(P<0.01)。活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与MΦ凋亡呈负相关。结论 CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达升高,MΦ凋亡下降,提示与结核病呈慢性感染有关。

CD4^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法:采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率差异。结果:慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分别为(5.14±1.03)%、(9.86±1.72)%、(7.93±1.67)%及(7.06±1.61)%,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。

哮喘患者外周血CD8^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg细胞检测及其临床意义

目的:通过检测哮喘患者外周血CD8^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg(CD8^+ Treg)细胞比例,探讨其在哮喘发生发展过程中的作用。方法:选择哮喘患者50例,其中轻中度哮喘25例,重度哮喘25例,并选择与患者年龄、性别匹配的25例健康者作为对照组。流式细胞仪分析CD8^+ Treg细胞比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达;Luminex200检测血清IL-33、IL-1β和转化生长因子β1(TGF-β1)浓度。肺功能测试仪测定第1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰流速(PEF)。结果:重度哮喘组和轻中度哮喘组CD8^+ Treg比例分别为[2.32(1.24~3.63)%]和[4.13(2.05~5.41)%],两组均低于对照组[6.48(5.21~6.92)%],且重度哮喘组降低更显著(P<0.05)。与对照组相比,重度哮喘组及轻中度哮喘组血清IL-33浓度均明显升高,且重度哮喘组升高更明显(P<0.05);与对照组及轻中度哮喘组相比,重度哮喘组TGF-β1和IL-1β明显升高(P<0.05);哮喘患者CD8^+ Treg细胞比例与FEV1(r=0.411,P=0.003)、PEF(r=0.441,P=0.001)呈正相关。ROC曲线分析显示,CD8^+ Treg诊断哮喘具有较高的特异性和敏感性。结论:哮喘患者外周血CD8^+ Treg细胞比例降低,在疾病发生发展过程中发挥重要作用。

麻醉方式对直肠癌患者CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及预后的影响

目的探讨不同麻醉方式对直肠癌手术患者CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及其预后的影响。方法选取2011年1月-2012年12月于陕西省人民医院行CO_2气腹腹腔镜下直肠癌手术的患者143例。比较单纯全身麻醉(GA)、硬膜外复合全身麻醉(EA)及硬膜外复合全身麻醉下6%羟乙基淀粉液急性高容量血液稀释(EA^+AHH)麻醉对患者术中一般情况、术前和术后1个月外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及3年随访生存率的影响。结果 EA^+AHH组患者术中血压波动幅度小于其余两组患者。与术前比较,EA^+AHH组术后1个月外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+/CD4^+下降幅度大于其余两组,术后3年生存率高于其余两组(P<0.05)。结论 EA^+AHH麻醉可改善CO_2气腹腹腔镜下直肠癌手术患者术后细胞免疫状态及预后,值得在临床推广应用。

冠心病慢性心力衰竭患者外周血CD^(4+)CD^(25+)Foxp^(3+)Treg细胞的研究

目的测定冠心病慢性心力衰竭患者的免疫功能及血浆N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平,评价冠心病慢性心力衰竭的免疫激活状态。方法收集2013年8月—2014年2月,中国中医科学院广安门医院心内科的住院患者125例,其中慢性心力衰竭患者93例,非心力衰竭患者32例。采用化学发光免疫方法测定血浆NT-proBNP水平,流式细胞技术测定外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例。结果冠心病慢性心力衰竭患者血浆NT-proBNP高于冠心病非心衰组,而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例低于非心力衰竭组。结论冠心病慢性心力衰竭患者存在免疫激活状态,且血浆NT-proBNP水平随NYHA心功能分级增加而升高。

CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在自身免疫性甲状腺疾病中的作用研究

目的:探讨CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的作用。方法:收集2014年2月-2016年11月在本院进行检查的AITD患者80例为治疗组,其中Graves(GD)患者40例,为GD组;桥本甲状腺炎(HT)患者40例,为HT组;选取健康体检人员20例为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^+T、CD4^+CD25^+Tregs细胞数量和比例,采用RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达水平,采用化学发光法对血清中甲状腺素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT_3)、总甲状腺素(TT_4)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)的水平进行测定。结果:三组TSH、TT_3、TT_4、TgAb、TPOAb比较,差异均有统计学意义(P<0.05);三组外周血CD4^+T细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05);GD组外周血CD4^+CD25^+Tregs占CD4^+T细胞的比率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);HT组外周血CD4^+CD25^+Tregs占CD4^+T细胞的比率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GD组和HT组外周血Foxp3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);自身免疫性甲状腺疾病的CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs与TSH、TT_3、TT_4、TgAb和TPOAb有明显正相关性(P<0.05)。结论:CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs可能在AITD的发生发展进程中起着一定的作用,深入研究CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在AITD中的作用将有助于建立新的预防和治疗策略。

不明原因复发性流产小鼠模型CD4^+CD25^+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。

中药有效成分对荷视网膜母细胞瘤小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达及血清细胞因子水平的影响

目的:观察黄芪、党参及其组方对荷视网膜母细胞瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)表达及血清细胞因子水平的影响。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis荷视网膜母细胞瘤动物模型,动态观察黄芪、党参及其组方对抑瘤率、荷瘤转移抑制率、荷瘤小鼠体质量的影响。接种5、10、15、20d后用流式细胞仪检测荷视网膜母细胞瘤小鼠脾CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达,20d采集小鼠血清,用流式微球阵列技术检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70、IFN-γ水平。结果:20d黄芪组和黄芪+党参组小鼠体质量高于对照组(P<0.05),20d黄芪组和黄芪+党参组小鼠瘤重低于对照组(P<0.05),15d黄芪+党参组小鼠瘤重低于对照组(P<0.05);在抑瘤率方面黄芪组和黄芪+党参组明显高于党参组(P<0.01);黄芪+党参组肿瘤转移抑制率为46.61%;对照组小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg表达随荷瘤天数的增加呈上升趋势,而3个中药组则呈下调趋势;3个中药组与对照组比较均能明显下调IL-10水平(P<0.05)并上调IL-2和IFN-γ的水平(P<0.05)。结论:益气活血中药组方黄芪+党参可通过调控荷瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达显著改善其体内存在的免疫耐受状态,其作用效果明显优于单味中药。

扶肺煎对Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响

目的研究扶肺煎对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响。方法选取雄性C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌移植瘤模型,随机分为6组:模型组,扶肺煎低、中、高剂量组,顺铂组和扶肺煎中剂量联合顺铂组,每组8只。观察小鼠的一般情况及移植瘤大小。给药第15天后剥离肿瘤组织,计算各组抑瘤率;FCM检测肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量;免疫组化法检测Foxp3表达量;ELISA检测外周血细胞因子IL-10、TGF-β的表达水平。结果与模型组比较,各组平均瘤重均减小,顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组缩小明显(P<0.01),扶肺煎中剂量联合顺铂组抑瘤率最高(64.23%);扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3^(+)Tregs数量减少(P<0.05),其余各实验组Foxp3^(+)Tregs数量减少均无统计学意义;扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3表达量下降(P<0.01)。扶肺煎中剂量组、扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组外周血中细胞因子IL-10、TGF-β水平下降(P<0.01),IL-10下降幅度大。与顺铂组相比,扶肺煎中剂量联合顺铂组IL-10水平下降(P<0.01)。结论扶肺煎能有效抑制肺癌移植瘤的生长,对调控移植瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量影响不明显,对干预肿瘤微环境中Foxp3、TGF-β具有一定影响,对IL-10的影响十分显著。

唾液乳杆菌对哮喘小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞数量及TGF-β1表达的影响

目的探讨唾液乳杆菌对哮喘Balb/c小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法将32只Balb/c雌性小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘组、唾液乳杆菌组和哮喘+唾液乳杆菌组。应用卵蛋白激发方法建立急性哮喘模型,原代提取脾细胞,应用流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T比例,ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、TGF-β1水平。结果哮喘组小鼠脾细胞培养上清液中Th2细胞因子(IL-4)较正常对照组明显增高,而Th1细胞因子(IFN-γ)较对照组明显降低(P<0.05);唾液乳杆菌干预组较哮喘组Th2细胞因子(IL-4)水平下降,Th1细胞因子(IFN-γ)水平升高(P<0.05);唾液乳杆菌干预组小鼠脾细胞培养上清液中TGF-β1含量明显高于哮喘组(P<0.05);哮喘组小鼠脾淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例较正常对照组明显减少(P<0.05),而唾液乳杆菌干预组则明显高于哮喘组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg参与了支气管哮喘的发病过程,唾液乳杆菌可能通过上调CD4+CD25+Foxp3+Treg数量及增加TGF-β1表达调整Th1/Th2失衡,减轻哮喘炎症。

玉屏风颗粒联合激素治疗PNS患儿效果及对Foxp3^+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响

目的:探究玉屏风颗粒联合激素治疗原发性肾病综合征(PNS)患儿的效果及对Foxp3+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响。方法:将我院收治的92例PNS患儿以随机数字表法分为对照组与联合组,各46例,对照组应用糖皮质激素治疗,联合组应用玉屏风颗粒(5 g,tid)联合糖皮质激素治疗,观察两组疗效、免疫功能指标、Th1/Th2细胞因子及感染情况差异。结果:联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组T淋巴亚群指标(CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+)及Foxp3^+Treg细胞水平均较治疗前升高,且联合组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组白细胞介素(IL)-2、转化生长因子(TGF)-β1及IL-6水平均较治疗前降低,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后联合组IL-10水平高于对照组,感染率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:玉屏风颗粒联合激素治疗PNS的疗效显著,有利于改善患儿的免疫功能,调节Th1/Th2细胞平衡。

骨恶性肿瘤化疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的变化

目的:探讨骨恶性肿瘤患者的发病机制及化疗对外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:骨恶性肿瘤患者25例,其中骨肉瘤患者13例,骨尤文氏瘤患者12例,分别于化疗当天及化疗后2周采集外周血。采用流式细胞法检测外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞的含量、RT-PCR法检测Foxp3mRNA表达水平。结果:骨恶性肿瘤患者化疗前CD4+CD25+Foxp3+Treg含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(13.68±5.97)%、28.33±7.69,较正常对照组的(8.12±5.02)%、17.24±6.12明显升高(P<0.01);骨恶性肿瘤患者化疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(19.67±7.26)%、41.62±8.85,明显高于化疗前(P<0.05)。结论:骨恶性肿瘤的发生与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞引起的免疫抑制有关;化疗导致肿瘤免疫抑制的进一步增强。