Th17和调节性T细胞在人类免疫缺陷病毒疾病进展中的作用及其调控机制

目的本研究通过观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血Th17、Treg细胞及其相关转录因子、细胞因子的表达,进一步揭示Th17、Treg细胞的调控机制及其在HIV感染者疾病进展中的作用。方法选取2019年1月—2019年10月河南省上蔡县HIV感染者80例作为研究组,选取同地区健康人群20例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T及外周血单个核细胞Th17、Treg,酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平,实时聚合酶链反应检测转录因子ROR-γt及Foxp3 mRNA表达,Pearson法分析Th17、Treg与CD4^(+)T的相关性。结果研究组CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD3+T、CD4^(+)T/CD8^(+)T低于对照组(P<0.05),CD8^(+)T和CD8^(+)T/CD3+T高于对照组(P<0.05)。研究组Th17/CD4^(+)T、Th17/Treg低于对照组(P<0.05),Treg/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。研究组ROR-γtmRNA高于对照组(P<0.05),Foxp3mRNA低于对照组(P<0.05)。研究组IL-17、IL-23水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表示,Th17细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈正相关(r=0.293,P<0.05),Treg细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论HIV感染能降低Th17细胞、升高Treg细胞,破坏机体免疫平衡,其机制与调控转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-17、IL-23表达有关,Th17细胞、Treg细胞与HIV感染者疾病进展密切相关。

枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

Foxp3基因表达与CD4^+CD_(25)^+调节性T细胞在急性特发性血小板减少性紫癜发病中的作用

目的研究Foxp3基因与CD4+CD25+调节性T细胞(Tr细胞)在急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿中的表达变化,探讨其在AITP发病机制中的作用。方法流式细胞仪分别检测AITP患儿和正常健康儿童外周血Tr细胞的数量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其外周血IL-10、TGF-β水平,RT-PCR检测外周血单个核细胞中转录因子Foxp3 mRNA的表达。结果AITP患儿外周血Tr细胞的数量明显低于正常对照组[(2.83±1.05)%vs(5.07±0.59)%,P<0.05]。相关细胞因子中IL-10、TGF-β水平也明显低于正常对照,[IL-10(29.48±13.69)vs(43.10±14.95)ng/L;TGF-β1(170.04±91.58)vs(254.75±130.41)ng/L,Pa<0.05]。与对照组比较,AITP患儿外周血单个核细胞中转录因子Foxp3 mRNA水平明显降低[(0.74±0.14)%vs(0.34±0.12)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论AITP患儿中Tr细胞数量的减少,相关细胞因子水平减低,Foxp3 mRNA表达降低,可能在AITP发病中起重要作用。

白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4^+CD25^+Foxp3^+调节T淋巴细胞表达的影响

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发的UC小鼠模型中的变化情况以及白藜芦醇对溃疡性结肠炎(UC)治疗的可能机制.方法:采用DSS制作UC小鼠模型,小鼠随机分成4组:正常对照(NC)组,模型(MD)组,低剂量(RLD)、高剂量(RHD)白藜芦醇治疗组.造模7d后停用造模药物,给予白藜芦醇后继续治疗7d.14d后,处死小鼠,结肠行HE染色和病理学评分(HDS);流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率.结果:MD组HDS明显高于NC组(P<0.05);RLD和RHD组的HDS明显低于MD组(0.88±0.32,0.23±0.20vs1.39±0.21,均P<0.05);RHD组的HDS明显低于RLD组(P<0.05).RLD和RHD组结肠外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率明显高于MD组(均P<0.05),低于NC组(均P<0.05);RHD组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率高于RLD组(均P<0.05).结论:白藜芦醇可以提高CD4+CD25+Foxp3+Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC的治疗发挥了一定的作用.

慢性特发性血小板减少性紫癜治疗前后调节性T细胞及其FOXP3表达的变化

目的:探讨桑椹三仙胶对慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者外周血调节性T(Treg)细胞及FOXP3表达的影响。方法:采用流氏细胞术测定桑椹三仙胶治疗前后CITP病人及正常对照组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在外周血中的表达及CD4+CD25+FOXP3+在CD4+CD25+Treg的比例。结果:CITP组疗前CD4+CD25+Treg在淋巴细胞中的比例及CD4+CD25+FOXP3+在CD4+CD25+Treg的比例较正常对照组均明显降低,具有显著性差异(P<0.01);桑椹三仙胶治疗后CD4+CD25+Treg水平与治疗前相比明显提高,具有显著性差异(P<0.01),CD4+CD25+FOXP3+也有所提高,但与疗前比较无显著性差异(P>0.05)。治疗后CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+FOXP3+表达水平虽有所上升,但未恢复正常,与正常组比较,仍有显著差异(P<0.01)。结论:CITP患者CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制作用受损可能参与了CITP的发病,桑椹三仙胶可能通过提高CD4+CD25+Treg细胞及其抑制性标志物的表达,进而抑制异常的免疫状态发挥其治疗作用。

佐剂关节炎大鼠心功能变化与细胞因子、调节T细胞和Foxp3表达的相关性

目的:观察佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、心功能、细胞因子、调节T细胞及Foxp3的表达,探讨细胞因子、转录因子Foxp3与调节T细胞(Treg)在AA大鼠心功能改变中的作用机制。方法:24只Wistar雄性大鼠随机分为正常组和模型组(Model组)各12只,Model组大鼠成功复制成AA模型。分别在造模前1 d,造模后18及32 d时检测2组大鼠体质量、E及AI,48 d后检测心功能、外周血细胞因子和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、Treg及脾组织Foxp3的表达。结果:与正常组比较,Model组心率(HR)、心脏质量指数(HI)、左室收缩末压(LVSP)显著升高,左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低;体质量明显减轻,E、AI明显增高;血清中TNF-α、IL-17、IL-6的水平明显升高,IL-10显著降低;CD4+Treg、CD25+Treg、CD4+CD25+Treg的表达及脾组织Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值、Foxp3mRNA、Foxp3蛋白的表达水平均下调明显;Spearman相关分析结果显示,Model组大鼠心功能参数与AI、细胞因子、Treg及Foxp3等指标呈显著相关性(均P<0.05,P<0.01)。结论:AA大鼠在E、及AI升高的同时出现心功能及Foxp3、CD4+CD25+Treg表达降低,提示炎症、Foxp3、CD4+CD25+Treg表达的失衡可能为AA大鼠心功能改变的重要因素。

乳腺癌B7-H4的表达与FOXP3＋Treg细胞浸润及淋巴结转移的相关性研究

目的:研究B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润数量和淋巴结转移的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测B7-H4蛋白在16例正常乳腺组织和79例乳腺癌组织的表达;间接免疫荧光双标染色法观察64例浸润性乳腺癌组织中CD3+T细胞和FOXP3+Treg的浸润情况;统计学分析B7-H4的表达与癌间质浸润的FOXP3+Treg数量和淋巴结转移的相关性。结果 :B7-H4在正常乳腺组织、导管内癌和浸润性乳腺癌的阳性表达率分别为6.3%、40.0%和78.1%,其在浸润性乳腺癌中的表达明显高于正常乳腺组织和导管内癌组(P=0.000,P=0.009),但在正常乳腺组织和导管内癌间未见明显差异(P=0.037);B7-H4的表达与乳腺癌间质浸润的FOXP3+Treg数量正相关(P=0.368,P=0.003),而与浸润的CD3+T细胞数量负相关(r s=-0.316,P=0.011);但B7-H4的表达与乳腺癌的淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:B7-H4在乳腺癌异常高表达且与肿瘤局部免疫抑制有关,但与淋巴结转移无明显相关性。

大强度运动对大鼠CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋调节性T细胞的影响

目的：研究大强度运动训练对大鼠CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋调节性T细胞的影响，探讨运动性免疫抑制的机制。方法：30只大鼠随机分为安静对照组和大强度运动组。无菌采集外周血，分离单个核细胞，并分离脾脏制备单个核细胞悬液。流式细胞术检测大鼠外周血和脾脏单个核细胞中CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋T细胞所占百分率；ELlSA检测外周血血清TGF—β和IL-10水平。结果：大强度运动组外周血和脾脏CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋T细胞百分率分别为4．87％±1．05和5．45％±1．26，均明显高于安静对照组（3．01％±0．65和3．36%±0．98）（P〈0．05）。结论：大强度运动训练能够促进大鼠CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋调节性T细胞的生成，上调外周血TGF—β和IL—10水平，并可能是诱发运动性免疫抑制的机制之一。

溃疡性结肠炎患者调节性T细胞及Foxp3基因的研究

目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平以及Foxp3基因的表达,分析它们在UC发病机制中的作用。方法收集UC患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析UC患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,ELISA法检测血清中相关细胞因子IL-10、TGF-β1的水平,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,UC患者外周血CD4+T、CD25+T细胞百分率作及CD4+CD25+T/CD4+T均显著下降(P均<0.05),细胞因子IL-10、TGF-β1的水平也显著降低(P<0.05),T细胞Foxp3 mRNA的表达也明显降低(P<0.05)。结论UC患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T细胞耐受机制的破坏可能与UC的疾病活动状态和发病机制有关。

海藻酸钠复合工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子RORγt mRNA、 Foxp3 mRNA表达的影响

目的探讨组织工程学方法对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子(ROR)γt mRNA、叉头蛋白(Fox)p3 mRNA的影响。方法将新西兰兔分为:对照组(A组),模型组(B组),3个治疗组〔分别为支架治疗组(C组)、细胞治疗组(D组)、支架复合细胞组(E组)〕,每组8只。B、C、D、E组的关节炎模型用完全弗氏佐剂(FCA)诱导,治疗组用海藻酸钠支架、工程化软骨细胞及海藻酸钠复合工程化软骨细胞注入兔关节腔内治疗1个月,对照组给予等量生理盐水同法处理,观察各治疗组血清酶联免疫吸附试验(ELISA)和滑膜苏木素-伊红(HE)、RT-PCR结果。结果E组Foxp3 mRNA表达量明显高于B组(P<0.05);E组RORγt mRNA表达量明显低于B组(P<0.05);各治疗组与B组相比,滑膜炎症反应均有所改善;E组外周血中转化生长因子(TGF)-β明显高于B组(P<0.05)。结论海藻酸钠复合软骨细胞可提高Foxp3 mRNA的表达、降低RORγt mRNA的表达,这可能是其抗炎作用机制之一。

Foxp3^+调节性T细胞在播散性毛孢子菌病小鼠模型的表达研究

目的观察调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在播散性阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)病小鼠模型中的表达,初步探讨Foxp3^+调节性T细胞在播散性毛孢子菌病发病机制中可能发挥的作用。方法 50只雄性BALB/c小鼠随机分为试验组和对照组,每组25只,分别于尾静脉接种阿萨希毛孢子菌悬液和生理盐水。接种后第3,7,14,21及28天,流式细胞仪检测两组小鼠脾脏单个核细胞悬液中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞比率;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组小鼠脾脏Foxp3 mRNA水平表达情况。结果试验组小鼠脾脏中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞比率及Foxp3 mRNA表达随着感染进程先增高后下降至正常水平。接种后第3、28天,试验组小鼠脾脏单个核细胞中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05);接种后第7、14及21天调节性T细胞的比例较对照组明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。接种后第3、28天,试验组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);接种后第7、14、21天与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿萨希毛孢子菌可以诱导小鼠体内CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在感染中后期表达增高,调节性T细胞可能参与调节播散性毛孢子菌病的免疫应答。

特发性血小板减少性紫癜患者调节性T细胞及Foxp3基因的检测

目的研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在ITP发病机制中的作用。方法分别收集30例ITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析ITP患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果ITP者外周血CD4+T、CD4+CD25+T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P﹤0.01),并且CD4+CD25+T细胞百分率与Foxp3mRNA水平呈正相关。结论ITP患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与ITP的发病机制有关。

原发性IgA肾病患者肾内Foxp3^+调节性T细胞表达情况及其与血尿酸的关系

目的:探讨原发性IgA肾病(primary immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者肾内Foxp3+调节性T细胞(foxp3-expressing regulatory T lymphocytes,Tregs)的表达情况及其与血尿酸的关系。方法:纳入初发原发性肾小球疾病患者74例,其中52例IgAN和22例特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,MN)患者。按照肾组织是否表达Foxp3将IgAN患者分为Foxp3+和Foxp3-两个亚组。采用免疫组织化学染色方式检测肾内Foxp3表达情况,记录患者入院次日清晨检测所得血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白和尿肌酐,采用同位素99mTc-DTPA示踪定量法检测肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)。结果:较之MN组,IgAN组患者肾内Foxp3表达比例显著增高。IgAN亚组分析中,Foxp3+较Foxp3-者SUA水平和镜下血尿检出率增高,但尿微量白蛋白/肌酐比(albumin to creatinine ratio,ACR)降低。Logistic回归分析显示,SUA是IgAN肾内Foxp3+Tregs是否表达的独立预测因素。结论:原发性IgAN患者肾内Foxp3+Tregs表达增多并受SUA水平影响,Tregs可能参与保护高尿酸血症所致肾病进展。

急性ITP患儿外周血中CD_4^+CD_(25)^+Foxp^(3+)Tr细胞、IL-7水平变化及意义

目的探讨急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)的发病机制。方法选择35例AITP患儿(AITP组)和30例健康查体者(对照组),用流式细胞仪检测外周血CD4+CD2+5Foxp3+调节性T(Tr)细胞数量及占CD4+细胞比例,ELISA法检测血浆中IL-7水平。结果AITP组和对照组外周血CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞/CD4+细胞分别为0.11±0.04、0.15±0.02,IL-7分别为(2.32±0.53)、(0.44±0.80)pg/ml,P均<0.05;AITP组外周血IL-7水平与CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞/CD4+细胞呈负相关(r=0.71,P<0.05)。结论CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞数量减少、IL-7水平升高可能在AITP发病中具有重要作用,机制为降低有效免疫抑制作用,导致自身反应性T细胞激活增多、凋亡减少,促进血小板破坏。

射频消融术对原发性肝癌患者甲胎蛋白和外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的影响

目的:观察原发性肝癌患者经射频消融治疗后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞以及甲胎蛋白水平的变化,探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与肝癌预后的关系。方法:采用流式细胞仪检测58例经过多电极射频消融仪治疗的原发性肝癌患者术前术后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及CD4+/CD8+比值,采用化学发光方法检测甲胎蛋白值,并进行统计学分析。结果:原发性肝癌患者术前CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与甲胎蛋白水平存在相关性,而术后甲胎蛋白恢复正常的患者同时出现CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的显著下降。结论:CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平在原发性肝癌射频消融治疗过程中与甲胎蛋白的变化存在显著相关性,可能成为肝癌预后的重要预测指标。

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠CD4+CD25+Treg和Foxp3表达的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠外周血CD4+CD25+调节T细胞(Treg)及脾脏组织Foxp3表达的影响。方法:将84只大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组和新风胶囊低剂量组、新风胶囊中剂量组、新风胶囊高剂量组,每组12只,除正常对照组以外的其余大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(Freunds'complete adjuvant,FCA)0.1mL致炎,致炎后第19d开始给药。第49天处死大鼠,观察各组大鼠上述指标的变化。结果:模型组大鼠CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA、Foxp3蛋白表达明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均能明显升高CD4+CD25+Treg的比例(P<0.01或<0.05),组间比较显示,XFC中剂量组升高最为明显,与正常组无明显差异(P>0.05);各治疗组均能显著升高脾脏Foxp3mRNA的表达(P<0.01),XFC中剂量组升高最为明显,明显优于MTX组和XFC低剂量组(P<0.05或<0.01),与正常组、TPT组、XFC高剂量组无明显差异(P>0.05);与模型组比较,TPT组、XFC中、高剂量组均能明显升高胸腺Foxp3蛋白表达(P<0.01),明显优于MTX组和XFC低剂量组(P<0.05或<0.01)。结论:健脾化湿通络中药新风胶囊通过上调CD4+CD25+Treg比例,抑制致炎细胞因子分泌,抑制自身免疫T细胞活化,而达到抗炎抗免疫的治疗作用。

雷公藤多甙片对AA大鼠调节T细胞及Foxp3表达的影响

目的:观察雷公藤多甙片(TPT)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的调节T细胞及Foxp3的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、甲氨喋呤组(MTX)、雷公藤多苷片组(TPT),每组12只,分别向(NC除外)各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)造模,造模后第19天给药,NC及MC给予生理盐水,其余2组分别给予MTX、TPT。观察各组大鼠体质量、足跖肿胀度、关节炎指数(AI)、调节T细胞(Treg)、Foxp3表达的变化。结果:1.与NC组相比,MC组大鼠的体质量明显减轻(P<0.05),足跖肿胀度、AI明显升高(P<0.01);与MC组相比,各治疗组体质量明显升高(P<0.05),足跖肿胀度、AI明显降低(P<0.01);与MTX组比较,TPT组大鼠体质量增加更为明显(P<0.05),足跖肿胀度减低更为明显(P<0.05)。2.与NC组比较,MC组CD4+ CD25+ Treg显著降低(P<0.01);与MC组比较,各治疗组CD4+ CD25+ Treg均升高(P<0.05或P<0.01);与MTX组比较,TPT组CD4+ CD25+ Treg升高(P<0.05)。3.与NC组相比,MC组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值、Foxp3 mRNA的表达水平均明显下调(P<0.01);与MC组比较,MTX组、TPT组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值、Foxp3 mRNA的表达水平均明显升高(P<0.01或P<0.05);与MTX组比较,TPT组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值明显升高(P<0.05)。结论:TPT能改善AA大鼠体质量、足跖肿胀度、AI同时能够调节调节T细胞、Foxp3的表达。

原发性肝癌患者CD4+Foxp3+T细胞、IL-15和IL-33的动态变化及临床意义

目的探讨原发性肝癌(HCC)患者术前、术后外周血及癌组织中IL-15、IL-33和CD4+Foxp3+T细胞的变化,分析其与HCC临床检测指标甲胎蛋白(AFP)的相关性,以期发现HCC疾病监测及辅助诊断的新免疫分子及免疫细胞亚群。方法收取31例HCC患者的外周血及6例肝癌和癌旁组织,应用免疫组化和免疫荧光技术检测HCC患者肝癌组织中CD4、Foxp3的表达,流式细胞术检测HCC患者术前、术后外周血中CD4+Foxp3+T细胞比例,ELISA法检测HCC患者术前、术后血浆IL-15、IL-33水平变化。结果 HCC肿瘤组织中均可见CD4、Foxp3阳性表达,免疫荧光发现Foxp3共表达于CD4阳性细胞上,双阳性细胞在肿瘤组织散在分布,癌组织中的数量高于癌旁组织。与健康对照组相比,HCC患者术前CD4+Foxp3+T细胞比例升高,术后降低(P<0.05);术前CD4+Foxp3+T细胞比例与AFP浓度呈正相关(P<0.01);IL-15的表达水平在术前上升,术后降低(P<0.05),术前水平与AFP浓度呈正相关(P<0.01);IL-33的表达水平在术前增加,术后降低(P<0.05),术前水平与AFP浓度无相关性(P>0.05)。结论 CD4+Foxp3+T细胞与IL-15、IL-33参与了肝癌的进展,外周血CD4+Foxp3+T细胞、IL-15、IL-33的变化有望成为HCC诊断及病情监测的参考指标。

黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠调节性T细胞功能的影响

目的:观察不同剂量黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠调节性T细胞(Tr细胞)功能的影响,从而探讨该方治疗该病的免疫学机制。方法:采用高脂高糖辛辣饮食干预加2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法造出湿热型溃疡性结肠炎的大鼠模型;造模成功后,分别采用大中小剂量黄芩汤、白头翁汤、柳氮磺吡啶(SASP)及生理盐水对模型进行干预;用ELISA法检测大鼠血清白介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1),用实时PCR(Real-tim e PCR)法检测大鼠结肠组织Foxp3 mRNA含量。结果:模型组大鼠血清IL-10、TGF-β1及结肠组织Foxp3 mRNA含量均较正常对照组明显下降(P<0.01);经干预后以上指标有不同程度回升,尤以黄芩汤中剂量组最为明显,疗效优于阳性对照药白头翁汤及SASP(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可能通过上调以上指标而调节Tr细胞的功能,从而实现自身免疫调节的。