FOXO4对脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨叉头盒O4(forkhead box O4,FOXO4)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响,并初步探讨潜在的分子机制。方法将LPS处理的H9C2细胞分别用FOXO4重组慢病毒载体(LPS+Lv-FOXO4)、对照载体(LPS+Lv-NC组)和/或nigericin(LPS+Lv-FOXO4+N组)处理FOXO4。实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测FOXO4 mRNA表达。酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β的水平。流式细胞术检测细胞凋亡。蛋白质印迹分析FOXO4和NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达。结果LPS处理能够抑制心肌细胞中FOXO4的表达(P<0.05),而FOXO4过表达能够降低LPS处理的心肌细胞中TNF-α和IL-1β水平,抑制心肌细胞凋亡,降低促凋亡蛋白Bax表达并增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。此外,FOXO4过表达能够通过抑制P65、IκBα磷酸化和P65核移位来抑制NF-κB信号通路活化(P<0.05)。FOXO4过表达可通过抑制NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和N-GSDMD蛋白表达来抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡(P<0.05),而NLRP3炎症小体激活剂尼日利亚菌素能够逆转FOXO4过表达对LPS诱导心肌细胞损伤的保护作用(P<0.05)。结论FOXO4过表达可保护心肌细胞免受LPS刺激引起的炎症和凋亡,这可能是通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路介导的细胞焦亡来实现。

糖酵解相关基因HIF⁃1α、FOXO4、LDHA在胃癌中的表达及临床意义

目的检测糖酵解相关基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转录因子叉头框蛋白(FOX)O4(FOXO4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法UALCAN、LinkedOmics数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA在胃癌组织与正常组织中的表达及与表达相关的基因。免疫组化方法检测70例胃癌组织、癌旁组织及30例正常胃组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达,分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。Spearman相关性检验分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达的相关性,并用Starbase数据库验证三者间的关系。Kaplan-Meier Plotter数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达对患者生存预后的影响。选择与HIF-1α、FOXO4、LDHA表达相关的前50个基因与GeneCards中获得的胃癌相关基因取交集,并进行KEGG分析。结果生物信息学分析显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达,且三者可以共表达。免疫组化结果显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达;胃癌组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达与患者的TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<005)。Spearman相关性分析表明HIF-1α与FOXO4的表达呈负相关(r=-0338,P<005),HIF-1α与LDHA的表达呈正相关(r=0462,P<005)。Cox单因素与多因素回归分析结果显示,HIF-1α阳性、LDHA阳性、FOXO4阴性、淋巴结转移、肿瘤分期晚及分化程度低为胃癌不良的预后影响因素(P<005);Kaplan-Meier Plotter数据库的生存分析也表明HIF-1α、FOXO4、LDHA与患者生存预后有关(P<005)。KEGG分析显示三者均参与了胃癌的糖酵解/糖异生、HIF-1α通路等过程。结论HIF-1α、LDHA高表达于胃癌组织,FOXO4低表达于胃癌组织,且与胃癌患者的临床病理特征及生存预后密切相关,并可反映糖酵解情况,三者的检测有助于胃癌的诊疗及预后预测。

FOXO4过表达慢病毒载体构建及顺铂耐药稳定细胞株的建立

目的构建稳定过表达叉头框基因O4(FOXO4)的顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP,探讨FOXO4在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞顺铂耐药中的作用,为改善TNBC顺铂耐药提供理论基础。方法通过药物剂量递增法诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231获得顺铂耐药性,CCK-8法确定细胞的耐药指数。将目的基因FOXO4定向插入载体质粒GV492中构建重组慢病毒表达载体LV-FOXO4-OERNA。通过预实验选取助感液类型、确定感染的最佳转染复数值(MOI)以及嘌呤霉素筛选的最佳浓度。将重组慢病毒表达载体感染MDA-MB-231/DDP细胞,嘌呤霉素最佳浓度筛选FOXO4过表达细胞株(FOXO4-OERNA组)。qRT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况,测定不同组IC 50确定细胞对顺铂敏感性。结果成功建立乳腺癌顺铂耐药细胞株(耐药指数=5.231)。与亲本细胞株相比,MDA-MB-231/DDP耐药细胞株FOXO4 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。通过基因测序证明,序列与预计序列一致,重组慢病毒表达载体构建成功,通过嘌呤霉素成功筛选出FOXO4稳定表达株。通过过表达FOXO4可以降低MDA-MB-231细胞对顺铂的耐药性,FOXO4-OERNA组耐药指数(RI=3.063),逆转指数达到1.708。结论通过药物剂量递增法可建立MDA-MB-231顺铂耐药细胞株,过表达FOXO4可逆转MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的耐药性。

原花青素B2通过Akt/FoxO4通路拮抗内皮细胞衰老的实验研究

研究原花青素B2(PCB2)对内皮细胞衰老的调控作用,探讨其可能的分子机制。以棕榈酸(PA)50μmol/L处理胰岛内皮细胞MS-1建立细胞衰老模型,根据细胞活力、β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色以及细胞周期相关基因的表达来评估内皮细胞衰老;同时加入PCB2干预,检测衰老相关指标及Akt/FoxO4通路的蛋白表达水平的变化情况。MS-1细胞经PA处理后SA-β-Gal阳性细胞增加,细胞周期相关基因p53和p21上调显示细胞周期阻滞在G0/G1期,表明PA处理后能诱导内皮细胞衰老发生;经PCB2(50μg/mL)干预后能够有效改善PA诱导的细胞衰老。相比于正常组,经PA处理后抑制Akt活化,其表达由胞核转至胞浆,在胞核中表达明显减少;导致Akt下游信号FoxO4的磷酸化降低,使其在细胞核中明显增加;而应用PCB2(50μg/mL)处理后能有效逆转这一现象;PCB2对棕榈酸诱导的内皮细胞衰老有明显的保护作用,其可能通过Akt/FoxO4信号通路发挥调控作用。

转录因子FOXO4在大肠癌中的表达及意义

目的:探讨叉头样转录因子O4(FOXO4)在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取80例大肠癌患者手术切除肿瘤及其癌旁组织标本(TNM分期:I期18例,Ⅱ期32例,Ⅲ期24例,Ⅳ期6例),应用免疫组织化学染色方法检测FOXO4在大肠癌和癌旁组织的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果:FOXO4在大肠癌组织中的阳性表达率为47.50%(38/80),明显低于在癌旁组织91.25%(73/80)的表达率(P<0.01)。在肿瘤组织中FOXO4表达水平在患者年龄、性别,肿瘤大小和侵润深度之间的差异无统计学意义(P>0.05);但与肿瘤分化程度、分期和淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FOXO4在大肠癌中表达明显降低或缺失,提示其可能在大肠癌的发生、发展过程中起抑癌基因的作用。

疏肝和胃降逆颗粒对反流性食管炎大鼠食管FOXO4信号通路的影响

目的观察FOXO转录因子及其信号通路在反流性食管炎中的表达及疏肝和胃降逆颗粒对其表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组,每组10只。用幽门半结扎加食管下括约肌切开法建立反流性食管炎大鼠模型,造模1周后给予药物干预,共28d。治疗结束后处死动物,取食管下段组织,分别进行常规HE染色病理检查和采用QRT-PCR技术检测FOXO4/NF-κB/TNF-α信号通路的表达。结果模型组食管下段组织病理积分和NF-κB、TNF-αmRNA的表达较正常组和假手术组明显升高(P<0.05);FOXO4mRNA的表达较正常组和假手术组明显下降(P<0.05)。疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组食管下段组织病理积分和NF-κB和TNF-α mRNA的表达均较模型组明显下降(P<0.05),但仍高于正常组;FOXO4mRNA的表达较模型组明显升高(P<0.05)。疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组比较,病理积分和信号通路的表达水平差异无显著性(P>0.05)。组织病理损伤与NF-κB和TNF-α mRNA的表达呈正相关(r=0.872),与FOXO4mRNA的表达呈负相关(r=-0.831)。结论疏肝和胃降逆颗粒对反流性食管炎病理损伤具有改善作用,可调节FOXO4/NF-κB/TNF-α信号通路的表达。

菊苣酸下调3T3-L1前脂肪细胞中PGC-1α及FoxO4蛋白表达

通过菊苣酸作用于3T3-L1前脂肪细胞,检测其对PGC-1α及FoxO4蛋白表达的影响并探讨其作用机制。结果表明,菊苣酸能够有效抑制细胞中PGC-1α及FoxO4蛋白的表达;PI3K/Akt抑制剂LY294002可增强菊苣酸对两种蛋白的影响。提示菊苣酸通过PI3K/Akt信号通路下调PGC-1α及FoxO4蛋白的表达。

HIF-1α、MACC1、FOXO4与胃癌病理和预后的关系

目的探究低氧诱导因子-1(HIF-1α)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)和转录因子FOXO4在胃癌中的表达及与胃癌的临床病理特征和预后的关系。方法收集2006年12月至2008年5月安徽医科大学第一附属医院外科手术切除的原发性胃癌石蜡包埋标本110份,和距癌灶边缘5cm以上且经病理检查确定为正常胃黏膜的癌旁组织标本46份,进行HIF-1α、MACC1和FOXO4蛋白免疫组织化学检测。统计标本来源患者的信息进行HIF-1α、MACC1和FOXO4蛋白与胃癌及转移淋巴结相关性分析。用Kaplan-Meier法分析术后胃癌患者的5年生存率和用Cox法进行生存率多因素回归分析。结果免疫组织化学法检测发现HIF-1α(P<0.001)和MACC1(P<0.001)蛋白在癌灶细胞中的表达明显高于癌旁组织,而FOXO4蛋白在癌灶细胞中的表达明显低于癌旁组织(P<0.001)。统计分析发现细胞分化程度越低、浸润程度越大、伴随着淋巴结转移和TNM分期越高,HIF-1α和MACC1的阳性表达也越高,而FOXO4因子的表达降低。胃癌组织中3种因子的表达存在显著相关性。HIF-1α、MACC1和FOXO4 3种因子的表达明显影响患者术后5年的生存率,而且是决定胃癌患者预后的独立因素。结论 HIF-1α、MACC1和FOXO4在胃癌组织中存在异常表达,与胃癌的临床病理特征和胃癌患者的预后密切相关。

异位表达FOXO4对胃癌细胞凋亡的影响

目的应用p CMV5-Flag和p LL3.7真核表达载体构建Forkhead box O4(FOXO4)基因的过表达质粒和干扰RNA表达质粒,研究其对胃癌细胞凋亡的影响。方法将FOXO4基因的开放阅读框克隆入p CMV5-Flag载体,将靶向FOXO4基因的siRNA克隆入p LL3.7载体,获得FOXO4的表达质粒Flag-FOXO4和干扰质粒FOXO4-shRNA。将获得的质粒及对照质粒通过脂质体转染MKN45和SGC7901胃癌细胞,Western blot检测其对细胞中FOXO4蛋白的表达和沉默效率。FCM检测其对细胞凋亡的影响,Western blot检测Cleaved Caspase-3的表达以及应用Real-time PCR检测其对促凋亡转录因子BCL-6的表达的变化。结果成功构建FOXO4的表达质粒Flag-FOXO4和干扰质粒FOXO4-shRNA。Western blot结果表明,Flag-FOXO4可以明显增加细胞FOXO4的表达,FOXO4-shRNA明显抑制细胞FOXO4的表达。FCM结果显示,Flag-FOXO4组与Control组相比较,MKN45细胞和SGC7901细胞凋亡显著增加了16.54%(P<0.001)和26.23%(P<0.001)。Western blot结果显示Cleaved Caspase-3表达与FCM结果一致。Real-time PCR结果表明Flag-FOXO4组细胞FOXO4下游促凋亡基因BCL-6的表达显著增加(P<0.01),FOXO4-shRNA明显抑制了细胞BCL-6的表达(P<0.01)。结论 FOXO4的过表达可能通过增加FOXO4下游促凋亡基因BCL-6的表达促进了胃癌细胞的凋亡。FOXO4的沉默降低了BCL-6的表达。

转录因子FOXO4与胃癌及Hp感染关系的临床研究

目的:探讨FOXO4在胃癌发生过程中的表达、临床意义及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:应用免疫组织化学SP法分别检测16例正常胃黏膜、26例慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、36例异型增生胃黏膜及60例胃腺癌组织中FOXO4的表达,并检测患者Hp感染状况。结果:FOXO4在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、异型增生胃黏膜及胃腺癌组织中的阳性率分别为100%、84.6%、69.4%和40.0%,胃腺癌组阳性率显著低于正常对照组(P<0.01)。FOXO4的阳性率在高、中分化和低分化型胃腺癌组织中呈现递减趋势,且其表达和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生及胃腺癌组织中FOXO4表达与Hp感染之间均无明显相关性(P均>0.05)。癌前病变组织中FOXO4表达与Hp感染率之间呈明显正相关(P<0.01)。结论:在胃黏膜癌变过程中,FOXO4的表达和作用逐渐下调;在癌前病变组织中FOXO4表达和Hp感染密切相关。

绵羊miR-127/FOXO4反馈环路及其对卵泡颗粒细胞凋亡相关基因表达的影响

旨在研究oar-miR-127/FOXO4反馈环路及其对绵羊卵泡颗粒细胞的作用。本研究利用Promoter 2.0预测绵羊miR-127启动子,利用JASPAR数据库预测转录因子FOXO4与oar-miR-127启动子区的结合位点,构建包含预测结合位点的pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体;利用TargetScan软件在线预测oar-miR-127与FOXO4基因3′-UTR区结合位点,构建包含预测结合位点的pmir-GLO-FOXO4野生型、突变型和缺失型荧光素酶报告基因重组质粒;将pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体共(或单独)转染体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞,FOXO4突变型、野生型和缺失型重组质粒与miR-127 mimic/mimic NC共转染体外培养的293T细胞,48 h后检测荧光素酶活性;pcDNA-FOXO4过表达载体(miR-127 mimic/mimic NC)转染绵羊卵泡颗粒细胞48 h,利用qRT-PCR检测miR-127(FOXO4)及凋亡基因(Casp3、Bax及BCL2)的表达水平。过表达转录因子FOXO4显著降低了oar-miR-127启动子相对荧光素酶活性(P<0.05)和oar-miR-127表达水平(P<0.05);miR-127 mimic和FOXO4野生型重组质粒共转染的颗粒细胞荧光素酶活性显著低于共转染miR-127 mimic和FOXO4缺失/突变型重组质粒的细胞(P<0.05)。转染miR-127 mimic的颗粒细胞中FOXO4表达量显著降低(P<0.05),Casp3和Bax基因表达水平极显著升高(P<0.001);过表达转录因子FOXO4的颗粒细胞中Casp3和Bax的表达水平无显著变化(P>0.05),但BCL2相对表达量显著降低(P<0.05)。本研究证实了oar-miR-127与靶基因FOXO4间存在反馈环路,并促进绵羊卵泡颗粒细胞的凋亡,为研究其在绵羊卵泡发育中的作用机制奠定了基础。

miR-4286靶向FOXO4对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:探讨miR-4286靶向FOXO4对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-4286和FOXO4 mRNA的表达。将miR-4286抑制物(anti-miR-4286)转染至肺癌A549细胞,CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、Western blot分别检测抑制miR-4286表达对A549细胞存活、克隆形成、凋亡、迁移侵袭及P21、Caspase-3、E-cadherin和MMP-2表达的影响。荧光素酶报告基因实验及Western blot验证miR-4286对FOXO4的靶向调控关系。结果:肺癌组织中miR-4286的表达较癌旁组织显著升高,FOXO4 mRNA的表达较癌旁组织显著降低(P<0.05)。抑制miR-4286表达后A549细胞的存活率、克隆形成及迁移侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,P21、Caspase-3和E-cadherin蛋白表达显著升高,MMP-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。miR-4286靶向FOXO4并负性调控A549细胞中FOXO4表达。抑制FOXO4表达可逆转抑制miR-4286对A549细胞存活、克隆形成、迁移侵袭及凋亡的影响(P<0.05)。结论:肺癌组织中miR-4286呈高表达。抑制miR-4286通过上调FOXO4抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。

HIF-1α、转录因子FoxO4在胃癌术后的表达及意义

目的探讨胃癌术后患者低氧诱导因子(HIF)-1α和转录因子叉头框蛋白(Fox)O4的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌组织并行HIF-1α、FoxO4检测的40例患者;随访胃癌患者通过胃镜取吻合口组织,对吻合口组织行HIF-1α、FoxO4检测。随访过程中术后复发患者10例,未复发患者30例。结果胃癌患者术后HIF-1α、FoxO4阳性率的表达与胃癌的不同分化程度、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移情况密切相关,均具有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α、FoxO4阳性率在不同性别、年龄的胃癌患者间比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色结果显示:HIF-1α阳性表达于细胞质和细胞核,胃癌术后复发者HIF-1α阳性表达率明显高于胃癌术后未复发者。FoxO4阳性多表达于细胞核区,细胞质中呈弱表达,胃癌术后复发者FoxO4阳性表达率明显低于胃癌术后未复发者。胃癌术后复发患者的HIF-1α阳性率明显高未复发患者,差异具有统计学意义(P<0.01);胃癌术后复发患者的FoxO4阳性率明显低于未复发患者,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论HIF-1α在患者胃癌术后复发患者中表达水平明显升高,FoxO4表达水平明显降低,可用于患者预后水平的评估。

miR-150靶向调控FOXO4促进宫颈癌C-33A细胞生长与生存

目的检测miR-150在宫颈癌细胞C-33A中的表达,并探讨其是否通过调控靶向基因FOXO4促进宫颈癌细胞的增殖与凋亡。方法将携带miR-150 mimic(模拟物)和miR-150 inhibitor(抑制物)、阴性对照siRNA经LipofectamineTM2000转染至C-33A细胞中,将细胞分为NC组(阴性对照组)、miR-150模拟物组(转染miR-150 mimic细胞组)及miR-150-in抑制物组(转染miR-150 inhibitor细胞组)。采用流式细胞仪、TUNEL检测法、荧光定量PCR、Western bolt分别检测miR-150对宫颈癌C-33A细胞周期、凋亡以及周期和凋亡相关基因的影响。3'-端非翻译区(UTR)荧光素酶活性分析证实miR-150的直接靶向作用。结果miR-150模拟物促进宫颈癌细胞C-33A的增殖与凋亡,抑制物作用相反,miR-150模拟物促进细胞由G1/G0期进展到S期,从而促进宫颈癌细胞增殖,抑制物相反,miR-150调控几个细胞周期、凋亡相关基因CyclinD1、p27、BIM和FASL的表达;miR-150通过靶向结合FOXO4的3'UTR区从而抑制FOXO4的表达。结论miR-150靶向作用于FOXO4从而调节多种基因的表达以致宫颈癌细胞C-33A的增殖与凋亡。

FOXO4在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨FOXO4在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法方便选取南通大学附属医院心胸外科2005年3月—2007年3月手术切除的150例NSCLC标本及20例正常肺组织标本,应用SP法分别检测FOXO4表达情况,并分析NSCLC组织中FOXO4表达与临床病理特征之间的关系。结果 FOXO4在肿瘤组织中阳性表达率为42.67%,明显低于正常肺组织的80.00%(P<0.01)。FOXO4在肿瘤组织中的表达与性别、年龄、吸烟、肿瘤大小和病理分型之间差异无统计学意义(P>0.05);但与分化程度、淋巴结转移和TNM分期之间密切相关(P<0.05)。其中高、中分化组FOXO4阳性表达率(62.50%;50.00%)明显高于低分化组(25.00%)(P=0.004);无淋巴结转移组表达率(80.00%)明显高于淋巴结转移组(29.09%)(P<0.01);TNMⅢ期组表达率(7.32%)明显低于Ⅰ、Ⅱ期组(77.50%;43.48%)(P<0.01)结论 FOXO4在NSCLC中低表达,提示其可能为抑癌基因。

胃癌患者血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平及其临床意义

目的探讨胃癌患者血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平及其与胃癌临床病理特征的相关性。方法收集胃癌患者90例,健康者50例作为对照组。测定2组研究对象血清中FOXO4和甲状腺转录因子1水平。分析胃癌组患者血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平与胃癌临床病理特征的相关性。比较随访期间存活组与死亡组患者血清中FOXO4和甲状腺转录因子1水平。结果与对照组比较,胃癌组患者血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平均显著降低(P<0.01)。胃癌患者血清中FOXO4和甲状腺转录因子1水平与患者的年龄、性别及胃癌的大小、肿瘤位置无明显相关,与临床分期、分化程度、淋巴结转移有明显相关(P<0.01)。1年期随访发现:死亡29例,存活61例。死亡组患者入院时血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平明显低于存活组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌患者血清FOXO4和甲状腺转录因子1水平明显降低,与胃癌的恶性程度联系密切,可视为是胃癌患者预后的重要评估指标。

FOXO4在甲状腺癌中的表达及其对上皮间质转化的影响

目的探究FOXO4在甲状腺癌中的表达及其对上皮间质转化的调控作用。方法通过基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)、Ualcan、cBioportal等数据库分析FOXO4在甲状腺癌和正常组织中的表达,以及与不同临床分期、患者预后、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的相关性;采用Western blot和PCR技术检测甲状腺上皮Nthy-ori-3-1细胞以及甲状腺癌TPC-1和BCPAP细胞内FOXO4的表达水平。通过DNA转染技术构建过表达FOXO4的甲状腺癌TPC-1/FOXO4及其对照TPC-1/vector细胞系,并采用Western blot和PCR技术检测TPC-1/FOXO4和TPC-1/vector细胞系内FOXO4、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平。最后采用细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测甲状腺癌TPC-1/FOXO4和TPC-1/vector细胞内划痕爬行距离和细胞侵袭迁移数目。结果相较于癌旁正常组织,FOXO4在甲状腺癌组织中呈低表达,且差异有统计学意义(P<0.01);但FOXO4在甲状腺癌不同临床分期组间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。数据库分析也显示甲状腺癌中FOXO4的表达与E-钙黏蛋白呈正相关关系(P<0.05)。体外实验显示,甲状腺癌TPC-1和BCPAP细胞内FOXO4的表达显著低于甲状腺上皮Nthy-ori-3-1细胞(P<0.001);且过表达FOXO4能够上调甲状腺癌TPC-1内E-cadherin的蛋白表达,同时下调N-cadherin的表达(P<0.001)。此外,FOXO4的过表达能够抑制甲状腺癌细胞的侵袭和迁移。随后的数据库生存分析显示,FOXO4的差异表达与甲状腺癌患者的总体生存期、无病生存期均无明显相关(P>0.05)。结论FOXO4在甲状腺癌中呈低表达,与E-钙黏蛋白的表达呈正相关。且FOXO4能够抑制甲状腺癌细胞的上皮间质转化及侵袭迁移能力。

鼻咽癌中miR-421和FOXO4的表达及与放疗敏感性和预后的相关性

目的:研究鼻咽癌中miR-421和FOXO4的表达及与放疗敏感性和预后的相关性。方法:选择2013年1月-2015年12月期间在我院诊断为鼻咽癌并接受放疗的92例患者及同期经组织活检确诊的鼻咽部慢性炎症的50例患者,检测miR-421、FOXO4的表达量,评价鼻咽癌患者的放疗敏感性、随访鼻咽癌患者的远期生存。结果:鼻咽癌组织中FOXO4的阳性表达率明显低于鼻咽部慢性炎症组织,miR-421的表达明显高于鼻咽部慢性炎症组织;T_(3-4)期、N_(2-3)期、M 1期、临床Ⅲ-Ⅳ期鼻咽癌组织中miR-421的表达量明显高于T_(1-2)期、N_(0-1)期、M 0期、临床Ⅰ-Ⅱ期鼻咽癌组织,FOXO4的阳性率明显低于T_(1-2)期、N_(0-1)期、M 0期、临床Ⅰ-Ⅱ期鼻咽癌组织;放疗不敏感的鼻咽癌组织中miR-421的表达量明显高于放疗敏感的鼻咽癌组织,FOXO4的阳性率明显低于放疗敏感的鼻咽癌组织;FOXO4阳性表达的鼻咽癌患者的无进展生存期及总生存期均明显优于FOXO4阴性表达的鼻咽癌患者。结论:miR-421/FOXO4途径的改变与鼻咽癌发生、病理进程、放疗敏感性及远期预后均密切相关。

miR-4286调控FOXO4对肺癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨微小RNA-4286(miR-4286)对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人肺癌细胞系A549和人正常支气管上皮细胞系HBE中miR-4286和FOXO4 mRNA的表达水平。转染miR-4286抑制剂或FOXO4过表达载体至肺癌细胞A549,构建miR-4286表达抑制或过表达FOXO4的肺癌细胞A549。四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞存活率、Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力、蛋白印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4286与FOXO4靶向关系。结果与正常支气管上皮细胞组比较,肺癌细胞中miR-4286表达显著升高(P<0.05),FOXO4 mRNA表达显著降低(P<0.05)。抑制miR-4286表达或过表达FOXO4后,肺癌细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),FOXO4 mRNA、P21蛋白表达显著升高(P<0.05)。miR-4286在肺癌细胞中靶向负调控FOXO4表达。抑制FOXO4表达可逆转干扰miR-4286对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论抑制miR-4286表达通过靶向上调FOXO4表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-96-5p靶向FOXO4对高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-96-5p(miR-96-5p)对高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养SD大鼠视网膜血管内皮细胞(RRVEC)进行实验,将细胞分为对照组(NG)、高糖组(HG),收集高糖诱导的细胞,分别或共同转染miR-96-5p模拟物(mimic)、无义miRNA(miR-NC)、FOXO4 siRNA(si-FOXO4)、FOXO4阴性对照序列(si-NC)、pcDNA-FOXO4、pcDNA。分别采用qRT-PCR与Western blotting检测miR-96-5p与FOXO4的表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p的靶基因;Western blotting检测细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspased-3蛋白表达。结果:高糖处理后,RRVEC中miR-96-5p、CyclinD1、Bcl-2表达水平均显著降低,而FOXO4、p21、p27、Bax、cleaved-caspased-3表达水平显著升高,抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡;miR-96-5p过表达与抑制FOXO4表达后CyclinD1、Bcl-2表达水平显著升高,抑制p21、p27、Bax、cleaved-caspased-3表达,增强细胞增殖能力,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告实验证明,FOXO4是miR-96-5p的靶基因;FOXO4过表达可逆转miR-96-5p过表达对高糖诱导的RRVEC增殖和凋亡的作用。结论:miR-96-5p通过靶向FOXO4以抑制高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡并促进细胞增殖。