使用Leader引物和FR1引物检测IGHV突变的结果比较

目的比较Leader引物和FR1引物检测免疫球蛋白重链基因可变区(IGHV)体细胞高频突变的差别,优化IGHV突变检测流程。方法收集2021年9月—2022年8月苏州大学附属第一医院血液科就诊的187例患者的IGHV突变标本,分别使用Leader引物和FR1引物进行PCR扩增、基因测序(单克隆峰使用Sanger测序,双克隆峰使用TA克隆测序),将序列与免疫球蛋白数据库中已知的胚系基因标准序列进行比较,以确定IGHV突变状态,比较不同引物扩增后结果的一致性。结果送检的187例标本中单克隆166例,双克隆21例。统计结果显示,使用Leader引物的阳性率(89.76%)高于使用FR1引物的阳性率(84.94%),两者差异无统计学意义(P>0.05)。两种扩增后的PCR产物中位长度分别为295 bp和252 bp,使用Leader引物扩增的V区完整性(100%)高于使用FR1引物扩增的V区完整性(85.62%),两种引物的使用差异有统计学意义(P<0.0001)。准确性方面,使用Leader引物和FR1引物对结果判读整体上差异无统计学意义(P=0.106),而当同源性百分比处于判读的阈值以上范围≥98%和临界范围97%~99%时,两者差异有统计学意义(P=0.003、P=0.008),表明使用Leader引物的结果准确性要高于使用FR1引物的结果准确性。结论IGHV突变检测时,建议优先使用Leader引物,这样的检测体系准确、快速,能显著提高报告单时效。