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线粒体型蛋白frataxin在家蚕微孢子虫中的鉴定与分析 被引量:2
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作者 胡军华 潘国庆 +5 位作者 许金山 芦琨 党晓群 吴正理 李艳红 周泽扬 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期608-615,共8页
【目的】Frataxin是铁硫簇相关蛋白,在线粒体代谢中起着重要作用。分析家蚕微孢子中该蛋白的结构特征,系统进化关系以及在孢子体内的转录翻译活性。【方法】基于家蚕微孢子全基因组序列,同源序列搜索获得该基因序列。进行蛋白二级结构比... 【目的】Frataxin是铁硫簇相关蛋白,在线粒体代谢中起着重要作用。分析家蚕微孢子中该蛋白的结构特征,系统进化关系以及在孢子体内的转录翻译活性。【方法】基于家蚕微孢子全基因组序列,同源序列搜索获得该基因序列。进行蛋白二级结构比较,近缘物种共线性特征分析及系统进化树构建。此外构建pGEX-4T-1-Nbfra原核重组表达载体,转化E.coliBL21(DE3)进行目的蛋白表达纯化,以此为抗原免疫小鼠,制备抗体,并与家蚕微孢子总蛋白进行Western免疫杂交。【结果】Nbfra蛋白缺乏进入线粒体的信号序列,功能区缺乏部分α-螺旋;frataxin基因在不同微孢子基因组中的分布具有共线性特征,表明其在基因组进化中非常保守。系统进化分析显示微孢子形成独立进化支,并且与高等真核生物近缘,说明微孢子在进化地位上比其它原虫更加高等,支持了微孢子虫是真菌的姊妹枝的进化地位假说。【结论】免疫杂交结果表明Nbfra基因家蚕微孢子虫中能正常表达与翻译。本研究为微孢子的分类地位及线体假说提供了重要的补充依据。 展开更多
关键词 frataxin 共线性 家蚕微孢子虫 微孢子
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Frataxin与弗里德赖希共济失调
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作者 江泓 唐北沙 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期385-387,共3页
关键词 弗里德赖希共济失调 常染色体隐性遗传 临床特征 frataxin 致病基因 发病机制
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Frataxin、线粒体铁代谢与Friedreich遗传性共济失调 被引量:1
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作者 姜宏 钱忠明 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期149-151,共3页
关键词 frataxin 线粒体 铁代谢 Friedreich遗传性共济失调 自由基 基因突变 常染色体隐性遗传
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小鼠frataxin抗体的制备及应用
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作者 郝双影 许芳霞 李宽钰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1313-1322,共10页
弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传性疾病,由frataxin(FXN)第一个内含子中GAA重复扩增导致其表达量减少所致。FXN是一种线粒体蛋白,可以调节细胞中铁的代谢,参与铁硫簇和血红素的合成,去除氧化应激等... 弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传性疾病,由frataxin(FXN)第一个内含子中GAA重复扩增导致其表达量减少所致。FXN是一种线粒体蛋白,可以调节细胞中铁的代谢,参与铁硫簇和血红素的合成,去除氧化应激等。前期研究发现FRDA病人受累组织有特异性表达的FXN亚型蛋白。为了检测小鼠不同组织中Fxn亚型蛋白的表达,首先要获得具有高度特异性和灵敏性的小鼠Fxn抗体。利用PCR技术扩增小鼠Fxn基因,通过酶切、连接、转化等常规分子克隆方法构建重组原核表达质粒pET24(+)-mFxn,经转化大肠杆菌BL21(DE3),表达可溶性含有his6标记的融合蛋白。该蛋白不含Fxn氨基端77个氨基酸的信号肽,含有130个氨基酸,理论分子量为14.38 kDa。表达的蛋白经Ni-NTA柱和连续梯度离心纯化,获得目的蛋白作为抗原;免疫新西兰大白兔制备抗血清并用硫酸铵沉淀初步纯化得到多克隆抗体。经Western blotting和免疫荧光分析测试,所获得的抗体能够特异性识别细胞内源Fxn,也可应用于组织的免疫沉淀和免疫荧光。这是首次报道利用鼠源Fxn作为免疫原制备的具有高度特异性和灵敏性的Fxn抗体,为深入研究小鼠frataxin亚型蛋白的存在和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 弗里德赖希氏共济失调 frataxin 蛋白表达纯化 多克隆抗体
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Enhancement of the geomagnetic field reduces the phototaxis of rice brown planthopper Nilaparvata lugens associated with frataxin down-regulation 被引量:1
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作者 Ying-Chao Zhang Gui-Jun Wan +5 位作者 Wei-Hong Wang Yue Li Yang Yu Yu-Xia Zhang Fa-Jun Chen Wei-Dong Pan 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2020年第5期1043-1052,共10页
The geomagnetic field(GMF)is an environmental cue that provides directional information for animals.The intensity of GMF is varied over space and time.Variations in the GMF intensity afect the navigation of animals an... The geomagnetic field(GMF)is an environmental cue that provides directional information for animals.The intensity of GMF is varied over space and time.Variations in the GMF intensity afect the navigation of animals and their physiology.In this study,the phototaxis of the migratory insect rice planthopper Nilaparvata lugens(N.lugens)and frataxin in N.lugens(NI-fh),which is a mitochondrial protein required for cellular iron homeostasis and iron-sulfur cluster assembly,were investigated by using different intensities of magnetic field.From the results,individuals of N.lugens showed decreased phototaxis when reared and tested in a behavioral arena under a strong magnetic field.Besides the reduction in performance,an accompanying ffect of the strong magnetic field condition was a reduced level of Nl-fh-messenger RNA,and a NI-fh knockdown indeed impaired the phototactic behavior in a tested sample of insects.This leads to the conclusion that the expression of frataxin is dependent on the strength of the surrounding magnetic field and that functional frataxin facilitates phototactic behavior in N.lugens. 展开更多
关键词 frataxin ma gnetic field migratory Nilaparvata lugens PHOTOTAXIS
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类鼻疽伯克霍尔德菌Frataxin样蛋白的表达与纯化
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作者 陈垂这 肖英伦 +4 位作者 尹浩燕 吴芸华 张雪连 李肇伟 夏乾峰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第12期1377-1380,1384,共5页
目的构建重组原核表达质粒,表达类鼻疽伯克霍尔德菌Frataxin样蛋白并进行纯化。方法PCR扩增类鼻疽伯克霍尔德菌Frataxin基因,胶回收纯化后测序验证。用HindⅢ和NdeⅠ双酶切目的片段与pET30a(+),将目的基因片段插入含His标签序列的原核... 目的构建重组原核表达质粒,表达类鼻疽伯克霍尔德菌Frataxin样蛋白并进行纯化。方法PCR扩增类鼻疽伯克霍尔德菌Frataxin基因,胶回收纯化后测序验证。用HindⅢ和NdeⅠ双酶切目的片段与pET30a(+),将目的基因片段插入含His标签序列的原核表达载体PET30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a(+)-Frataxin,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,并进行SDS-PAGE和Western blot检测分析,通过His-HP柱及分子筛进行纯化。结果PCR扩增的Frataxin基因片段为327 bp,与预期大小相符。目的片段与原核表达质粒载体连接后进行PCR鉴定与测序验证,重组质粒pET30a(+)-Frataxin构建正确。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导5 h,从细菌裂解液中检测到Frataxin融合蛋白,分子质量单位约为12 ku。通过His-HP柱与分子筛纯化,获得单一SDS-PAGE条带的目的蛋白。结论成功表达并纯化了Frataxin样蛋白,为研究Frataxin样蛋白与铁的相互作用关系奠定了基础。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 frataxin样蛋白 原核表达
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弗里德赖希共济失调YG8R转基因小鼠的运动行为学及病理变化比较
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作者 张晓静 林培彬 欧文倩 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2023年第4期327-331,共5页
目的比较弗里德赖希共济失调(FRDA)转基因(YG8R)小鼠运动行为学及病理变化。方法利用加速转棒实验、旷场实验、抓力实验和步态检测等行为学手段,评价YG8R转基因小鼠与同窝野生型(WT)小鼠的运动差异;免疫组化染色评价小鼠脊髓组织中神经... 目的比较弗里德赖希共济失调(FRDA)转基因(YG8R)小鼠运动行为学及病理变化。方法利用加速转棒实验、旷场实验、抓力实验和步态检测等行为学手段,评价YG8R转基因小鼠与同窝野生型(WT)小鼠的运动差异;免疫组化染色评价小鼠脊髓组织中神经元的死亡情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠背根神经节(DRG)和小脑组织中Frataxin mRNA的表达水平。结果从第4个月开始,与WT组相比,YG8R小鼠的在棒时间、运动距离和抓力均明显下降(P<0.05);在第6个月,与WT组相比,YG8R小鼠的左后肢和右后肢步长距离显著下降(P<0.05),YG8R小鼠两前肢和两后肢步宽显著增加(P<0.01),右后肢的摆动时间显著下降(P<0.01),左后肢及右后肢触地时间显著增加(P<0.05);YG8R小鼠脊髓中神经元数量显著降低(P<0.01);qRT-PCR结果表明,与WT组相比,YG8R小鼠脊髓和DRG中Frataxin mRNA水平均显著降低(P<0.0001)。结论本研究进一步提供了基于GAA重复扩增的转基因YG8R小鼠FRDA模型的详细运动特征及病理变化,这将为后续研究FRDA的疾病机制和治疗提供证据。 展开更多
关键词 弗里德赖希共济失调 YG8R小鼠 运动行为学 frataxin
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3种转录因子对FXN基因表达的影响 被引量:2
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作者 戴晓曼 周迪 李宽钰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第7期690-694,共5页
目的弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传疾病,其发病机制是frataxin(FXN)基因的第1个内含子上GAA序列的大量重复扩展,使FXN蛋白表达量减少所致。文中旨在研究FXN基因启动子区域上的转录因子对FXN表达的... 目的弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传疾病,其发病机制是frataxin(FXN)基因的第1个内含子上GAA序列的大量重复扩展,使FXN蛋白表达量减少所致。文中旨在研究FXN基因启动子区域上的转录因子对FXN表达的影响。方法运用Genomatix软件预测出FXN基因的启动子区域及转录因子可能的结合位点,用基因定点突变技术克隆这些结合位点,并用双报告基因法检测启动子活性;qPCR、Western blot以及酶活性实验分别用于检测过表达转录因子后FXN表达量的变化及FXN在铁代谢中的功能。结果启动子活性测定发现FXN基因的启动子1和启动子2活性较高,在该活性较高区域,预测出转录因子可能结合位点,并发现这些结合位点对启动子的活性很重要;过表达转录因子HMX2、HMX3和EGR3能促进细胞内源性FXN mRNA和蛋白的表达,并影响细胞内铁代谢水平。结论转录因子HMX2,HMX3和EGR3能够促进FXN基因的表达,增强细胞铁代谢的能力和线粒体的功能。 展开更多
关键词 弗里德赖希共济失调 启动子 frataxin HMX2 HMX3 EGR3
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与铁稳态有关的生物分子 被引量:1
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作者 韩光亮 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期72-75,共4页
根据近几年来发表的与铁稳态有关的生物分子的研究文献 ,将这些生物分子根据其与铁的吸收、转运、储存以及对铁稳态的监控调节等方面的关系 ,对这些生物分子进行了分类。特别是对细胞膜载体、运铁蛋白受体。
关键词 铁稳态 铁调蛋白 铁反应元件 运铁蛋白 乌关酸酶 运铁蛋白受体
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Structural and Functional Studies of the Mitochondrial Cysteine Desulfurase from Arabidopsis thaliana 被引量:2
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作者 Valeria R. Turowski Maria V. Busi Diego F. Gomez-Casati 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2012年第5期1001-1010,共10页
AtNfsl is the Arabidopsis thaliana mitochondrial homolog of the bacterial cysteine desulfurases NifS and IscS, having an essential role in cellular Fe-S cluster assembly. Homology modeling of AtNfslm predicts a high g... AtNfsl is the Arabidopsis thaliana mitochondrial homolog of the bacterial cysteine desulfurases NifS and IscS, having an essential role in cellular Fe-S cluster assembly. Homology modeling of AtNfslm predicts a high global similarity with E. coil IscS showing a full conservation of residues involved in the catalytic site, whereas the chloroplastic AtNfs2 is more similar to the Synechocystis sp. SufS. Pull-down assays showed that the recombinant mature form, AtNfslm, specifically binds to Arabidopsis frataxin (AtFH). A hysteretic behavior, with a lag phase of several minutes, was observed and hysteretic parameters were affected by pre-incubation with AtFH. Moreover, AtFH modulates AtNfslm kinetics, increasing Vmax and decreasing the S0.5 value for cysteine. Results suggest that AtFH plays an important role in the early steps of Fe-S cluster formation by regulating AtNfsl activity in plant mitochondria. 展开更多
关键词 cysteine desulfurase Fe-S biogenesis MITOCHONDRIA ARABIDOPSIS frataxin.
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西格列汀及胰高血糖素样肽1对脐静脉内皮细胞铁代谢相关基因的调控作用 被引量:3
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作者 李莉 金军华 +5 位作者 邹丽辉 张恩毅 张俊华 黄薇 潘琦 肖飞 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2017年第5期292-297,共6页
目的 观察西格列汀及胰高血糖素样肽1(GLP-1)对正常糖浓度(正糖)及高糖条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)铁代谢相关共济蛋白(FXN)及顺乌头酸梅1(ACO1)蛋白表达的影响.方法 用西格列汀(1μmol/L)和(或)GLP-1(100 nmol/L)... 目的 观察西格列汀及胰高血糖素样肽1(GLP-1)对正常糖浓度(正糖)及高糖条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)铁代谢相关共济蛋白(FXN)及顺乌头酸梅1(ACO1)蛋白表达的影响.方法 用西格列汀(1μmol/L)和(或)GLP-1(100 nmol/L)处理HUVECs,正糖(5.5 mmol/L)及高糖(30.0 mmol/L)状态下分别设相应对照组、GLP-1处理组、西格列汀处理组以及GLP-1+西格列汀联合处理组.检测药物对正常状态下HUVECs细胞增殖的影响,用实时定量逆转录PCR和Western blotting法分别于24 h及48 h后检测HUVECs内FXN和ACO1的mRNA及蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较使用Bonferroni检验(满足方差齐性检验时)或Dunnett T3检验(不满足方差齐性检验时).结果 (1)正糖下经西格列汀和(或)GLP-1处理24 h后,与对照组(表达水平设为1)相比,各组的HUVECs细胞增殖水平均无明显变化(分别为0.99±0.04、1.07±0.08、1.06±0.05,F=4.059,均P〉0.05);而各加药组的FXN mRNA表达均呈下降趋势,其中,西格列汀+GLP-1组FXN的mRNA表达水平降低为0.68±0.18(t=3.59,P〈0.05);西格列汀单独或联合GLP-1组ACO1的mRNA表达水平也明显降低(分别为0.49±0.13、0.59±0.15,F=10.802,均P〈0.05);各加药组的FXN及ACO1的蛋白水平均低于对照组,但差异无统计学意义(均P〉0.05).(2)高糖下经西格列汀和(或)GLP-1处理48 h后,与对照组(表达水平设为1)相比,西格列汀+GLP-1组FXN mRNA表达升高(1.75±0.26,t=-5.71,P〈0.05);但各组的ACO1 mRNA表达变化均不明显且差异无统计学意义(均P〉0.05).结论 西格列汀和GLP-1可在不影响正常状态内皮细胞增殖的条件下,通过调节正常或高糖状态下HUVECs中FXN及ACO1的表达水平影响细胞内的铁代谢. 展开更多
关键词 西格列汀 胰高血糖素样肽1 共济蛋白 顺乌头酸梅1 人脐静脉内皮细胞
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