FRIL蛋白体外维持脐血造血干/祖细胞的作用及细胞周期调控基因的表达

为探讨新的豆类凝集素(Flt3 receptor-interacting lectin,FRIL)体外维持脐血CD34^+细胞的作用以及维持过程中细胞周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达及意义,我们利用FRIL维持培养脐血CD34^+细胞,对其增殖曲线、细胞周期及集落形成能力进行常规分析,并用半定量RT-PCR法分别测定FRIL体外维持不同时间后脐血CD34^+细胞中周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达变化。结果显示,FRIL培养的CD34^+造血干/祖细胞的增殖趋势平缓,整个培养期间细胞增殖倍数不超过起始的3倍;14d之前,FRIL培养细胞的高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)形成集落数与FL组无差别,其后则维持高于FL的情况。细胞周期分析则显示,在28d的培养过程内,利用FRIL培养的细胞始终有80%以上维持在G0期;而周期调控基因HTm4及HTm4S在刚分离的脐血CD34^+细胞中的表达水平较高;但培养1d后,几乎检测不到HTm4基因的表达;培养3～14d,该基因的表达回升并持续维持在高水平。而HTm4S基因的表达在第7d达最高水平,其余时间基本呈稳定表达。转染HTm4和HTm4S,亚细胞定位结果显示HTm4主要定位于核周围,而HTm4S则定位于整个胞浆,由此可能导致它们功能的区别。以上结果提示,长期培养体现出FRIL在维持造血干/祖细胞多能性上的优势;