过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。方法 qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。结果 ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。结论 过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。

去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期的FRO细胞,分别加入终浓度为0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的NCTD,分别干预12 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。取对数生长期的FRO细胞,分为0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组,加入相应浓度的NCTD,干预24 h后检测细胞凋亡情况、B淋巴细胞肿瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)凋亡相关因子mRNA表达情况、线粒体膜电位;干预2周后克隆形成实验检测细胞克隆率。结果随着NCTD浓度增大、干预时间延长,FRO细胞增殖抑制率增加(P<0.05)。10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组均出现细胞凋亡,且浓度越高凋亡现象越明显。0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组细胞克隆形成率、细胞线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达水平依次降低,Bax mRNA表达水平依次升高(均P<0.05)。结论NCTD可以抑制FRO细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与降低线粒体膜电位有关。

去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭影响及机制研究

目的探讨去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭能力及机制研究。方法取对数生长期的人未分化甲状腺癌FRO细胞,加入不同浓度的去甲斑蝥素(2.5,5,10,20,40,80μg/mL)处理12 h、24 h和48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况。取对数生长期的人未分化甲状腺癌FRO细胞,分为空白组、10μg/mL去甲斑蝥素组、20μg/mL去甲斑蝥素组、40μg/mL去甲斑蝥素组,各组培养24 h后,采用划痕实验和Transwell实验检测FRO细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测转移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平。结果2.5,5,10,20,40,80μg/mL的去甲斑蝥素对FRO细胞均有明显的增殖抑制作用,呈剂量时间依赖性。10μg/mL去甲斑蝥素组、20μg/mL去甲斑蝥素组、40μg/mL去甲斑蝥素组FRO细胞的迁移和侵袭能力均逐渐减弱,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率逐渐增高,E-cadherin表达量逐渐增高,MMP-9表达量逐渐降低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论去甲斑蝥素能够抑制人未分化甲状腺癌FRO细胞的增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,其机制可能与上调E-cadherin和下调MMP-9蛋白表达有关。

磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY29400联合吲哚-3-甲醇对人甲状腺未分化癌细胞FRO增殖的抑制作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY29400(简称LY)联合吲哚-3-甲醇(I3C)对人甲状腺未分化癌细胞FRO增殖的抑制作用。方法:取对数生长期FRO细胞,分为空白对照组、I3C(250μmol/L)组、LY(10μmol/L)组和联用(I3C 250μmol/L+LY 10μmol/L)组,药物作用24、48、72 h。采用MTT法测定并计算各组细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测作用48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测作用48 h后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达;免疫组化法检测作用48 h后Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:细胞增殖抑制率随药物作用时间的延长而明显升高,联用组各时间点间差异具有统计学意义(P<0.05)。与I3C组和LY组比较,联用组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3、Bax蛋白表达均增强,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LY与I3C联用对FRO细胞的增殖具有协同抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、激活Caspase级联反应诱导细胞凋亡有关。

雷公藤甲素抑制未分化甲状腺癌细胞增殖

目的研究雷公藤甲素对人未分化甲状腺癌FRO细胞株增殖抑制作用。方法以雷公藤甲素处理FRO细胞,采用WST-1法检测细胞增殖的抑制率、Western blot方法分析雷公藤甲素对FRO细胞的activated Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响;荧光探针-2’,7’-二氯氢化荧光素-二乙酸酯测定雷公藤甲素对胞内活性氧(ROS)水平的影响,酶标仪检测胞内谷胱甘肽(GSH)和氧化性谷胱甘肽(GSSG)含量的变化。结果与空白对照组相比,雷公藤甲素呈浓度、时间依赖性抑制FRO细胞增殖,IC50为22.8 nmol/L;Western blot检测发现雷公藤甲素给药处理12 h后,其activated Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增加。雷公藤甲素作用2 h后,能显著增加FRO细胞ROS水平(P<0.01);雷公藤甲素能显著降低FRO细胞内GSH水平,作用48 h胞内GSH降为对照组的(21.07±1.29)%(P<0.05),而氧化型谷胱甘肽GSSG含量的变化无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤甲素对人未分化甲状腺癌FRO细胞株的生长有抑制作用,诱导细胞凋亡,胞内氧化还原稳态失衡在其中起了重要作用。