磺胺二甲嘧啶对FRTL-5细胞合成、分泌甲状腺球蛋白的影响

[目的 ]研究磺胺二甲嘧啶对FRTL 5细胞株合成、分泌甲状腺球蛋白的影响 ,并探讨FRTL 5细胞株用于筛选环境甲状腺素干扰物的可能性。 [方法 ]FRTL 5细胞分别经 0 .5、1.0、2 .0、4.0、和 8.0 μg/ml磺胺二甲嘧啶染毒处理48h后 ,用MTT实验检测磺胺二甲嘧啶对细胞活力的影响以确定染毒浓度 ;以MTT实验最大无作用浓度作为最高染毒浓度 ,另设中、低浓度共 3组染毒细胞 ,用放射免疫法测定染毒 48h后培养液中细胞分泌甲状腺球蛋白的浓度 ;用活细胞爬片的免疫组化染色观察最高浓度处理组细胞胞质中合成甲状腺球蛋白的表达水平 ,并用透射电镜观察细胞的超微结构。[结果 ]根据MTT实验 ,确定染毒浓度为 0 .5、1.0和 2 .0 μg/ml,随磺胺二甲嘧啶浓度的增大 ,FRTL 5细胞培养液中甲状腺球蛋白的浓度逐渐降低 ,其中 1.0 μg/ml浓度组与对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,2 .0 μg/ml浓度组培养液中未能检出甲状腺球蛋白 ;免疫组化染色可见染毒组细胞胞质中合成的甲状腺球蛋白表达显著减弱 ,图像分析结果显示其灰度值的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;细胞超微结构观察发现染毒组细胞出现粗面内质网扩张。 [结论 ]通过损伤甲状腺滤泡细胞的粗面内质网 ,而影响甲状腺球蛋白的合成与分泌 。

应用FRTL-5细胞甄别农药亚乙基硫脲、二甲戊乐灵甲状腺素干扰效应

目的 了解亚乙基硫脲 (ETU)、二甲戊乐灵对FRTL 5细胞分泌甲状腺球蛋白的影响。方法 首先用MTT法测这两种化学物的细胞毒性。然后根据细胞毒性结果确定染毒剂量并用放免法测细胞培养液甲状腺球蛋白的浓度。结果 MTT实验中 ,当二甲戊乐灵浓度大于 5ng μl,亚乙基硫脲浓度大于 36 0ng μl时 ,有明显细胞毒性。亚乙基硫脲和二甲戊乐灵在中高剂量均可引起甲状腺球蛋白浓度显著降低。结论 这两种化学物可能干扰甲状腺球蛋白的合成和分泌。

磺胺二甲嘧啶对FRTL-5细胞基因表达谱的影响

目的研究磺胺二甲嘧啶对FRTL5细胞基因表达谱的影响,探讨环境甲状腺素干扰物的作用机制。方法指数生长期细胞经20μgml磺胺二甲嘧啶处理24h后,用TRIzol法提取RNA,用9753位点的cDNA芯片检测基因表达情况,实验组和对照组细胞分别用Cy3dCTP和Cy5dCTP标记,计算Cy3和Cy5的比值,找出差异表达基因。结果芯片经扫描分析后,发现表达有差异的基因共有679条占芯片上基因总数的70%,其中395(40%)条基因表达增加,284(30%)条基因表达下降,涉及基因表达调控、细胞周期调控、细胞免疫,细胞代谢等众多事件。结论磺胺二甲嘧啶对FRTL-5细胞的毒性效应,其机制涉及多种基因。

杀草强对FRTL-5细胞甲状腺激素相关基因转录的影响

目的观察杀草强对FRTL-5细胞中甲状腺球蛋白基因(tg)、甲状腺过氧化物酶基因(tpo)、钠碘转运体蛋白基因(nis)、促甲状腺激素受体基因(tshr)、甲状腺转录因子基因1(ttf-1)和双链复合蛋白8基因(pax-8)转录的影响,初步探索其干扰甲状腺激素活性的机制。方法0.001、0.01和0.1mg/ml杀草强分别处理FRTL-5细胞24h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR观察杀草强对tg、tpo、nis、tshr、pax-8和ttf-1基因转录的影响。结果杀草强各剂量组使tg基因转录均显著增强;杀草强高剂量组使pax-8和tshr基因转录显著降低,使ttf-1基因转录显著降低;杀草强各剂量组对tpo和nis基因无显著影响。结论杀草强干扰甲状腺激素活性可能与其对tg,tshr,pax-8和ttf-1基因的影响有关。

应用FRTL-5细胞探索五氯苯酚干扰甲状腺激素作用机制

目的利用FRTL-5细胞,在体外研究五氯苯酚干扰甲状腺激素活性的机制。方法设二甲亚砜溶剂对照组(DMSO);高氯酸钠摄碘阳性对照组;五氯苯酚:0.1μg/ml、0.3μg/ml和0.5μg/ml三个剂量组;五氯苯酚处理FRTL-5细胞24小时,用3H掺入法测其对FRTL-5细胞DNA合成的影响,放免法测其对培养液中甲状腺球蛋白浓度的影响;用五氯苯酚、高氯酸钠处理FRTL-5细胞12和24小时后,用同位素125I测摄碘能力的变化。结果3H掺入法显示五氯苯酚各剂量组对FRTL-5细胞DNA合成无显著影响;放免法显示五氯苯酚0.3μg/ml和0.5μg/ml剂量组显著降低甲状腺球蛋白浓度;五氯苯酚处理FRTL-5细胞12小时后,0.3μg/ml和0.5μg/ml剂量组使FRTL-5细胞摄碘能力显著增强,处理24小时后,FRTL-5细胞摄碘能力无显著改变,但有降低的趋势,高氯酸钠阳性对照组使FRTL-5细胞摄碘能力在12小时和24小时都极显著降低。结论五氯苯酚干扰甲状腺激素作用可能与其使甲状腺球蛋白浓度的改变有关。

农药二巯基敌枯双对FRTL-5细胞合成甲状腺球蛋白的影响

目的观察农药二巯基敌枯双对FRTL-5细胞株合成甲状腺球蛋白的影响,并探讨其作用机制以及FRTL-5细胞株用于筛选环境甲状腺素干扰物的可能性。方法FRTL-5细胞分别经0.1、1.0和10.0μg/mL二巯基敌枯双染毒处理48 h后,用酶组织化学法测定培养液中甲状腺球蛋白的浓度;用活细胞爬片的酶细胞化学染色观察细胞内甲状腺过氧化物酶的表达强度,并用透射电镜观察最高浓度处理组细胞的超微结构。结果随二巯基敌枯双浓度的增大,FRTL-5细胞培养液中甲状腺球蛋白的浓度逐渐降低,其中0.1、1.0μg/mL浓度组与溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),10.0μg/mL浓度组培养液中未能检出甲状腺球蛋白;酶细胞化学染色未见染毒组细胞甲状腺过氧化物酶活性改变,图像分析结果显示其阳性细胞的积分光密度(IOD)值与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);细胞超微结构观察发现染毒组细胞出现粗面内质网扩张。结论二巯基敌枯双可能是通过损伤甲状腺滤泡细胞的粗面内质网,从而影响甲状腺球蛋白的合成与分泌;FRTL-5细胞培养液中甲状腺球蛋白的浓度可以作为体外筛选环境甲状腺素干扰物的敏感指标之一。

甲亢宁胶囊对FRTL-5细胞周期的影响

目的观察甲亢宁胶囊(以下简称甲亢宁)对FRTL-5细胞周期的影响,探讨甲亢宁治疗Graves病的作用机制。方法将FRTL-5细胞分为基线组、模型组、甲亢宁组、甲巯咪唑组,采用MTT法检测甲亢宁不同浓度及作用时间对FRTL-5细胞的影响,分析甲亢宁的量效和时效关系,确定甲亢宁的浓度及作用时间;采用流式细胞技术检测甲亢宁对FRTL-5细胞周期的影响;采用Western Blot检测甲亢宁干预后FRTL-5细胞cyclin D1蛋白的表达水平。结果甲亢宁组处于G0G1期的FRTL-5细胞多于模型组(P <0. 01),处于S期的FRTL-5细胞少于模型组(P <0. 05),甲巯咪唑组处于各细胞周期的FRTL-5细胞与模型组间差异无统计学意义(P> 0. 05)。甲亢宁组FRTL-5细胞的cyclin D1蛋白表达水平低于模型组(P <0. 05),甲巯咪唑组与模型组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论甲亢宁能下调FRTL-5细胞cyclin D1的蛋白表达,阻滞FRTL-5细胞从Gl期进入S期,从而抑制细胞增殖。

Graves病人血清TRAb诱导FRTL-5细胞原癌基因表达初探

Ｇｒａｖｅｓ病人血清ＴＲＡｂ诱导ＦＲＴＬ５细胞原癌基因表达初探吕枚方佩华周卫东王玉汤特李建民袁承运细胞原癌基因（ｃｆｏｓ）是一种核内蛋白类原癌基因，在它的３′末端有转录调节成分，其特点之一是可被促甲状腺激素（ＴＳＨ）等快速而短暂地激活；它也是转...

甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用

目的探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体(TSAb)单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5)增殖作用和自噬的影响。方法体外培养FRTL-5细胞,采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系,并确定作用最佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清。将FRTL-5细胞分为模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清),中药低、中、高剂量组(M22刺激24 h后5%、10%、15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),正常组(15%空白大鼠血清)。采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中c AMP水平。确定高剂量(15%)甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用最强后再将FRTL-5细胞分为正常组(15%空白大鼠血清)、模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清)和中药组(M22刺激24 h后15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化,Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平。结果 M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系,确定1μg/m L M22于24 h增殖作用最佳。与正常组比较,模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强(P <0. 01),细胞上清液中c AMP释放量增加(P <0. 01),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少(P<0. 01);与模型组比较,中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制(P <0. 01),上清液中c AMP释放量减少(P <0. 05,P <0. 01),中药低剂量组作用差异无统计学意义(P>0. 05),中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高(P <0. 01)。透射电镜提示,模型组较正常组自噬小体的数量减少,而中药组较模型组增多。结论 M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常,而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常,进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用。

低剂量五氯苯酚对FRTL-5细胞甲状腺过氧化物酶基因表达的影响

目的研究低剂量五氯苯酚(pentachlorophenol,PCP)对FRTL-5细胞甲状腺过氧化物酶(thyroperixidase,Tpo)基因的影响。方法调整FRTL-5细胞密度为4×104个/孔,分别加入终浓度为0(溶剂对照)、0.3、0.9、2.7、5.4、10.8、32.49、2.7μg/ml的PCP溶液,培养24 h后采用MMT试验测定细胞活性。调整FRTL-5细胞密度为1×104个/孔,分别加入终浓度为0(溶剂对照)、0.1、0.3、0.9μg/ml的PCP溶液,培养24 h后测定DNA合成、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)的含量及Tg和甲状腺促转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF-1)t、po mRNA的表达。结果当PCP浓度≤0.9μg/ml时,PCP对FRTL-5细胞无明显细胞毒性。各PCP染毒组与对照组FRTL-5细胞Tg积分光密度(IOD)值间比较,差异无统计学意义。与溶剂对照组比较,0.3、0.9μg/ml PCP染毒组FRTL-5细胞Tg的含量和TTF-1的IOD值均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与溶剂对照组比较,0.9μg/ml PCP染毒组FRTL-5细胞tpo mRNA的IOD值较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCP可明显降低FRTL-5细胞中tpo mRNA、TTF-1和Tg蛋白的表达。

乙烯硫脲对FRTL-5细胞甲状腺球蛋白合成分泌及摄碘功能的影响

目的探讨乙烯硫脲(ETU)对FRTL-5细胞的甲状腺球蛋白(TG)合成分泌和摄碘能力的影响。方法用30、150和270μg/ml乙烯硫脲处理FRTL-5细胞后,用MTT法和3H掺入法测乙烯硫脲的细胞毒性;放免法和免疫细胞化学法测乙烯硫脲对TG合成分泌的影响;RT-PCR检测乙烯硫脲对nis基因和tg基因的影响;同位素示踪法检测对细胞摄碘能力的影响。结果30～270μg/ml乙烯硫脲对FRTL-5细胞无显著细胞毒性。150μg/ml和270μg/ml乙烯硫脲显著降低培养液中TG浓度,对胞浆内TG无显著影响;使nis基因转录显著降低,对tg基因无显著影响;150μg/ml和270μg/ml乙烯硫脲显著降低细胞摄碘能力。结论乙烯硫脲可抑制FRTL-5细胞分泌TG,对TG合成无显著影响;乙烯硫脲各剂量组显著降低nis基因转录,但仅在高剂量组显著降低细胞摄碘能力。

活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨活血消瘿片(Huoxuexiaoying Tablet)含药血清对大鼠甲状腺细胞FRTL-5增殖和凋亡的影响。方法:用SD大鼠制备活血消瘿片含药血清及空白血清;采用CCK-8法检测不同浓度活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖活性的影响;按含药血清比例分为对照组和活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组,加药作用24 h后,采用流式细胞术检测活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞周期及凋亡的影响;采用Western blot法检测各组细胞中特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、半胱天冬氨酸酶-9(Caspase-9)以及活化的Caspase-9(Cleaved-Caspase-9)蛋白的表达情况。结果:活血消瘿片含药血清呈浓度依赖趋势将FRTL-5细胞周期阻滞于G0/G1期;与对照组比较,各给药组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Western blot结果表明活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组细胞中Cyclin D1、PCNA、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量显著降低,Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导其凋亡。其机制可能与抑制CyclinD1、PCNA的表达,促进Caspase-3、Caspase-9的活化有关。

白细胞介素1α对鼠甲状腺细胞增殖的影响

目的 :观察 TSH存在和缺乏时白细胞介素 - 1α( IL- 1α)对鼠甲状腺细胞增殖的影响。 方法 :FRTL - 5细胞培养 ,经不同浓度 IL - 1α(含 TSH或不含 TSH)孵育 ,用四氮唑蓝 ( MTT)比色法检测细胞增殖。 结果 :在无 TSH条件下 IL- 1α2 0～ 2 0 0 0 k U/ L,对 FRTL- 5细胞无明显促增殖作用 ;在 TSH存在时 IL- 1α2 0和 2 0 0 k U/ L 对 FRTL- 5细胞增殖亦无明显抑制作用 ,IL- 1α2 0 0 0 k U/ / L则可显著抑制 TSH介导的 FRTL- 5细胞增殖。 结论 :本研究提示较高浓度的 IL-1α能抑制

肿瘤坏死因子对鼠甲状腺细胞增殖的影响

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对甲状腺细胞生长增殖有何影响尚未定论，作者采用四氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定ＴＮＦ－α对鼠ＦＲＴＬ－５细胞生长增殖的影响。结果提示：在不存在ＴＳＨ条件下，ＴＮＦ－α在２００～２００００ｋＵ／Ｌ范围内对ＦＲＴＬ－５细胞既无明显细胞溶解作用，亦无明显促增殖作用；在ＴＳＨ存在条件下，上述剂量ＴＮＦ－α对ＦＲＴＬ－５细胞增殖有轻～中度抑制作用。ＴＮＦ－α对甲状腺细胞增殖的抑制作用，可能不是通过其细胞毒作用，而主要是通过抑制ＴＳＨ作用来实现。

白细胞介素-1β诱导甲状腺细胞凋亡机制的研究

目的探讨在桥本甲状腺炎(HT)中白细胞介素-1β(IL-1β)诱导甲状腺细胞凋亡及其可能的作用机制。方法①不同浓度、不同时间IL-1β刺激大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5细胞),采用实时荧光定量PCR方法检测FRTL-5细胞自杀因子(Fas)mRNA的表达。②设立对照组、IL-1β组、IL-1β+caspase-8抑制剂(Z-IETD-FMK)组,采用流式细胞术检测各组的甲状腺细胞凋亡率。结果①定量PCR结果显示IL-1β与FRTL-5细胞Fas mRNA表达水平存在剂量-时间依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);②流式细胞术结果显示,与对照组比较,IL-1β作用后,甲状腺细胞的凋亡率增加(P<0.05);联合加入Z-IETD-FMK后,可抑制IL-1β诱导甲状腺细胞凋亡率的增加(P<0.05)。结论IL-1β可能通过Fas和caspase-8途径导致甲状腺细胞的凋亡。

模拟失重对甲状腺滤泡上皮细胞分泌功能和超微结构的影响

目的研究模拟微重力环境对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRTL-5)分泌功能和超微结构的影响。方法应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统,将FRTL-5细胞随机分为模拟微重力组(SMG)和正常重力对照组(NG)。经6、12、24、36 h培养后收集2组细胞,检测FRTL-5细胞培养上清液中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、甲状腺球蛋白(TG)和甲状腺过氧化物酶(TPO)浓度;观察培养12 h和36 h的FRTL-5细胞超微结构变化。结果 RCCS培养6 h时,SMG组FRTL-5细胞上清液中T4、FT4、FT3水平低于NG组(P <0. 05)。SMG组FRTL-5细胞TG和TPO分泌均高于NG组(P <0. 01),SMG组12 h细胞质内粗面内质网呈扁平囊状,呈扩张状态,线粒体形态及数目正常,细胞膜清晰未损伤; SMG组36 h细胞膜结构及其基质正常,胞质内粗面内质网呈扩张状态,线粒体形态正常但数量减少。结论 RCCS模拟微重力对FRTL-5细胞T4、FT4和FT3分泌代谢、Tg生成及TPO水平有明显影响,同时引起FRTL-5细胞超微结构改变。

先天性甲低患儿血清TGII的测定

目的 :探讨先天性甲状腺功能低下症的病因与自身免疫功能的关系。方法 :对20例先天性甲低以FRTL -5细胞生物法进行了TGII的测定。结果 :6例为阳性 ,占30% ,说明部分先天性甲低患儿体内存在甲状腺生长抑制免疫球蛋白。结论

IFN-γ上调桥本甲状腺炎Fas表达介导甲状腺破坏

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)对桥本甲状腺炎(HT)Fas表达的影响及可能致病因素。方法 (1)采用免疫组织化学方法检测HT和正常甲状腺组织中IFN-γ及Fas的表达和分布;(2)不同浓度、不同时间IFN-γ刺激大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5细胞),采用实时荧光定量PCR、流式细胞术方法分别检测FRTL-5细胞Fas m RNA和蛋白的表达。结果 (1)HT组织中甲状腺滤泡细胞Fas蛋白、淋巴细胞IFN-γ蛋白的表达显著高于正常甲状腺组织,且Fas阳性甲状腺滤泡细胞常见于淋巴细胞浸润区;(2)IFN-γ与FRTL-5细胞Fas m RNA表达水平存在时间-剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);(3)流式细胞术测定经IFN-γ作用的FRTL-5细胞表面Fas表达水平显著高于未经IFN-γ刺激的FRTL-5细胞。结论 IFN-γ通过上调Fas的表达介导甲状腺滤泡细胞凋亡。

模拟微重力对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性的影响

建立模拟微重力的细胞培养系统，将大鼠甲状腺滤泡上皮细胞（FRTL-5）分为模拟微重力组（SMG）和正常重力对照组（NG），经6、12、24、36 h培养后收集2组细胞，利用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪技术检测细胞周期，激光共聚焦显微镜和荧光素FITC标记技术观察细胞微丝结构形态变化。MTT检测结果显示，与NG组相比，SMG组FRTL-5细胞经6、12、24、36 h培养后，各时相细胞增殖均明显抑制（P〈0.05），其中24 h最为明显。流式细胞仪检测结果显示，与NG组相比，FRTL-5细胞微重力培养6、12、24、36 h后G1期细胞比例显著增高（P〈0.05）；除6 h外，S期细胞比例明显降低；而各时相的G2/M期细胞比例表现为模拟失重早期（6～12 h）降低，其中12 h出现低谷值，24 h一过性显著增高。激光共聚焦显微镜观察发现模拟微重力培养36 h后，细胞微丝骨架局部解聚，张力纤维减少，结构和排列紊乱，细胞伪足少见，细胞形状呈不规则。