二花脸猪FSH β亚基位点PCR-SSCP标记与产仔数关系初探

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ－ＳｉｎｇｌｅＳｔｒａｎｄＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）作为遗传标记，对二花脸猪ＦＳＨβ亚基位点与产仔数性状的关系进行了研究。二花脸猪在被扩增位点有较大的变异，而在作为对照品种的大约克猪中则完全纯合。两品种在该位点基因频率差异显著。以标记基因型为因子，分别对二花脸猪群体的头胎产仔数、头三胎产仔数之和以及最高产仔数进行方差分析。结果表明，该标记位点与产仔数性状显著相关，其贡献率达到１０％以上。本文还就产仔数指标的选择作了讨论。

猪FSHβ亚基基因结构区Alu序列插入突变的研究

通过聚合酶链式反应 (PCR)对中国华北型优良地方猪种莱芜猪及杜里猪、长白猪的卵泡刺激素 (FSH) β亚基基因结构区插入片段进行扩增 ,并对 0 .5kb扩增产物进行克隆和测序。序列分析表明 ,在已发表的猪FSHβ亚基基因全序列的 +80 9与 +810碱基之间 ,莱芜猪、杜里猪和长白猪分别存在一个长度为 2 75、2 77和 2 74bp的插入片段 ,插入片段末端的poly(A)分别为 17、19和 16个腺苷酸 ,均显著短于高产猪种太湖猪 (2 92bp和 32个腺苷酸 )。对FSHβ亚基基因插入片段进行BamHⅠ多态性分析 ,发现本研究所检测样品中不存在BamHⅠ多态性。插入片段中存在一个RNA聚合酶Ⅲ启动子及AluⅠ内切酶识别位点 ,所以该片段可能为Alu成分。因RNA聚合酶Ⅲ这种有功能的内部启动子能够转录相邻的染色体序列 ,该插入片段可能影响FSHβ亚基基因或其他基因的表达调控。把FSHβ亚基基因作为控制猪产仔数主效基因的候选基因与产仔数进行连锁分析 ,证明FSHβ基因座位在莱芜猪种中与控制猪产仔数的主效基因紧密连锁 ,优势基因AA纯合子比BB纯合子母猪平均每胎多产仔 1.2头。因不同品种猪插入序列的主要差异是末端的poly(A)长短不同 ,推测该插入片段末端的poly(A)结构亦可能影响猪的产仔数。

猪FSH-β位点对猪繁殖性状的影响

采用 PCR- SSCP技术对猪 FSH- β亚基基因的多态性进行了研究。结果表明 ,基因型分布与品种极显著相关 (P<0 .0 0 5 ) ;除大梅 F1 以外 ,所研究群体的 FSH-β PCR- SSCP位点均处于遗传平衡状态 ;在头胎中 ,G等位基因可以显著提高产仔数和产活仔数 ,加性效应分别为 1.2 0 0头 /窝、1.345头 /窝 (P<0 .0 5 ) ;在经产胎次 ,GG基因型母猪的产仔数和产活仔数显著高于 HH基因型 (P<0 .0 5 ) ,每拷贝 G等位基因可以控制 0 .6 18头 /窝的产仔数和 0 .834头 /窝的产活仔数 ;GG基因型母猪乳头数多 (P<0 .0 5 ) ,加性效应为 1.4 2 9个 ,而后代乳头数没有显著的差异 ,可以确定猪乳头数主要受自身基因型决定 ,且具有一定母本效应 ;GG型后代平均初生重比 HH型低 ,GH型的育成率显著比 HH型高(P<0 .0 5 ) ;GG基因型母猪的年产仔窝数显著低于 GH型 (P<0 .0 5 ) ;GG基因型的断奶到发情间隔比 GH基因型显著短 (P<0 .0 5 ) ,GH基因型的断奶到配种间隔显著比 HH基因型短 (P<0 .0 5 )。

牛科物种FSHβ基因外显子1和外显子2遗传特征分析

促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)对刺激动物卵泡发育和促进精子生成具有重要作用,但有关牛科物种FSH基因的群体遗传特征还不十分清楚。本文针对FSHβ基因外显子1和外显子2,采用PCR-SS-CP结合PCR产物直接测序技术对353头水牛(来自11个水牛群体)、30头牦牛和30头大额牛样品进行了群体变异检测,并结合NCBI数据库中已发表的普通牛、山羊和绵羊等物种同源序列进行了群体遗传和生物信息学分析。在FSHβ基因外显子1中,水牛中发现1个核苷酸替换和1个缺失,即c.-49A>G和c.-31delG;其中,SNP-49在河流型和沼泽型水牛中均存在,等位基因c.-49A为优势等位基因,而c.-31delG只存在于沼泽型水牛中,且为杂合状态,基因频率为0.077。在牦牛外显子1中检测到c.-37G>A和c.-12T>C替换,且为连锁遗传的,而在大额牛外显子1中未检测到SNP位点。在FSHβ基因外显子2中,水牛中发现c.132G>A替换,该位点在河流型和沼泽型水牛均存在,但等位基因频率在两类水牛间不一致。在牦牛外显子2中检测到c.9C>T和c.21C>T替换,该替换也存在于普通牛中;大额牛外显子2为单态,未见SNP位点。生物信息学分析显示,在一些牛科物种FSHβ基因外显子2中发现的SNP位点均为同义替换,揭示了其序列的高度保守性。在牛科物种中,山羊和绵羊FSHβ基因第36位密码子编码氨基酸与其他物种不同,可作为区分它们的遗传标记。

淮猪新品系FSHβ亚基基因多态性及其与产仔数的相关性研究

在212头淮猪新品系母猪群中进行FSHβ亚基基因多态性及其与头胎产仔数性状的相关性分析,结果表明,在淮猪新品系母猪群中,FSHβ亚基基因的A等位基因为优势等位基因,其基因频率为0.6085。在淮猪新品系母猪头胎产仔数性状上,FSHβ亚基基因的AA基因型为有利基因型,AA型的头胎总产仔数比BB型高1.47头(P<0.01),AA型的头胎产活仔数比BB型高1.15头(P<0.05)。

姜曲海猪FSHβ-亚基基因PCR-SSCP分析

用 PCR- SSCP方法对 15 2头姜曲海猪的 FSHβ-亚基基因进行了分型。结果表明 ,FSHβ-亚基基因在姜曲海猪中有 AA、AB、BB三种基因型 ,其频率分别为 0 .2 89、0 .493和 0 .2 17;A基因频率为 0 .5 36 ,B基因频率为 0 .46 4。A、B基因频率方差及两基因频率协方差分别为 0 .0 0 1、0 .0 0 1和 - 0 .0 0 1。A基因频率的群体估计值的 95 %置信区间为 [0 .473,0 .5 99],B基因频率对应为 [0 .40 1,0 .5 2 7];基因杂合度为 0 .498。经检验 ,该座位处于哈迪 -温伯格平衡状态。

牛科物种FSHβ基因外显子3编码区遗传多态性及其生物信息学分析

促卵泡素是动物垂体前叶分泌的重要繁殖调控激素。采用PCR产物直接测序法对河流型和沼泽型水牛、牦牛和大额牛的FSHβ基因外显子3编码区进行群体变异检测,并进行了生物信息学分析。牛科物种FSHβ基因外显子3编码区均为231 bp。在水牛中共发现16个SNP位点,其中异义替换13个,推测4个异义替换对FSH功能有显著影响(subPSEC<-3)。沼泽型水牛中发现的SNP位点均与河流型水牛共享,但它们在两类水牛中的群体遗传组成不同。在普通牛、牦牛和大额牛中分别确定8,3,1个SNP位点,但只有SNP307是异义替换,普通牛与牦牛共享该位点,推测其对FSH功能无显著影响(subPSEC>-3)。在山羊中有11个SNP位点,8个为异义替换,推测只有SNP253对FSH功能有显著影响(subPSEC<-3)。在绵羊中有3个SNP位点,皆为同义替换。确定水牛特有的核苷酸位点4个,山羊特有的位点1个,普通牛、牦牛和大额牛共有的核苷酸位点4个,山羊和绵羊中共有的位点2个,这些位点编码氨基酸的差异可能引起了不同类型牛科物种间FSHβ亚基功能上的差异性。

撒坝猪促卵泡素β亚基基因多态性及其与头胎产仔性能相关性研究

此文分析了促卵泡素(FSH)β亚基基因在撒坝猪群体中的多态性分布及其不同基因型与头胎产仔性能的相关性。结果表明,撒坝猪FSHβ亚基基因等位基因A及其基因型AA在群体中占优势,频率分别为0.8490和0.7604。FSHβ亚基基因在群体中处于哈迪-温伯格不平衡状态。乳头数以AA基因型最高,产仔数、产活仔数、初生窝重和45日龄窝重以AB基因型最高,BB基因型在所有分析性状上均表现最低,但3种基因型间的差异均不显著(P>0.05)。

猪促卵泡激素α和β亚基基因的克隆及其重组腺病毒表达载体的构建

为探索人工制备猪促卵泡激素的可行性,从猪的脑垂体中抽提总RNA,通过RT-PCR方法,克隆了猪促卵泡激素α、β亚基基因,并将其分别定向插入腺病毒穿梭质粒中,通过转化BJ5183-AD-1细胞继而构建含有猪促卵泡激素α、β亚基基因的重组腺病毒质粒;将含有猪促卵泡激素α、β亚基基因的重组腺病毒质粒转染AD-293细胞,细胞产生病变,证实猪促卵泡激素α、β亚基基因重组腺病毒表达载体构建成功。

猪雌激素受体、卵泡刺激素-β、催乳素受体和视黄醇结合蛋白4基因合并基因型对产仔数的影响

目的探讨猪雌激素受体(estrogenreceptor,ESR)、卵泡刺激素-β(folliclestimulatinghormonebetasubunit,FSH-β)、催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)和视黄醇结合蛋白4(retinol-binding proteins 4,RBP4)基因合并基因型对产仔数的影响。方法采用PCR法从来自沈阳地区9个种猪场的大白猪、长白猪、杜洛克猪扩增ESR、FSH-β、PRLR、RBP4基因,PCR-RFLP法检测各基因的多态性,分析4种基因的单基因及合并基因型对产仔数的影响。结果 ESR、FSH-β、PRLR和RBP4基因均存在AA、AB和BB 3种基因型,各基因均处于遗传平衡状态。4种基因的单基因分析表明,长白猪、大白猪FSH-β基因的总产仔数差异有统计学意义(P<0.05),BB型为优良基因型;其他3种基因的产仔数差异无统计学意义(P>0.05),ESR基因的优良基因型为AA型,PRLR基因的优良基因型为BB型,RBP4基因的优良基因型为AB型。4种基因的合并分析表明,AABBBBAB为最优合并基因型。结论合并基因型的遗传效应显著高于单基因的遗传效应,可利用合并基因型对猪的产仔数进行标记辅助选择。

卵泡刺激素多肽修饰的纳米粒制备及体外靶向性研究

目的制备卵泡刺激素多肽修饰的纳米粒，并探讨其体外靶向性。方法用免疫细胞化学法检测人肝癌细胞BEL-7402、人卵巢上皮性癌细胞SKOV-3和Caov-3中卵泡刺激素受体的表达。合成卵泡刺激素B链第81～95个氨基酸片段，并与纳米粒共价连接。通过细胞形态学和流式细胞技术进行多肽和纳米粒的靶向性检测。结果制备的纳米粒直径为100nm左右，Zeta电位大约为-25mV。BEL-7402和SKOV-3细胞不表达卵泡刺激素受体，而Caov-3细胞的卵泡刺激素受体呈阳性表达。Caov-3细胞对卵泡刺激素多肽修饰的纳米粒的摄取能力为4．17±0．86，显著强于SKOV-3细胞的2．30±0．21，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。卵泡刺激素多肽修饰后，转运纳米粒的能力也显著增加，Caov-3细胞摄取卵泡刺激素多肽修饰纳米粒为4．17±0．86，而摄取纳米粒为0．41±0．32，两者比较，差异也有统计学意义（P〈0．05），且随着时间延长和浓度增加而增强。结论卵泡刺激素多肽修饰的纳米粒对卵泡刺激素受体阳性的卵巢上皮性癌细胞具有良好的靶向性，可能的机制为受体介导的特异性内吞作用。