Genetic characterization of FSH beta-subunit gene and its association with buffalo fertility

Objective:To study genetic variation in buffalo follicle stimulating hormone beta-subunit (FSHB) gene and its association with fertility.Methods: In this experimental study, blood samples were collected by standard methods using EDTA anticoagulant and transrectal ultrasound examination was conducted on fertile (n=74) and infertile buffaloes with a history of anestrum (n=30) or repeat breeding (n=12). The genomic DNA was extracted for PCR followed by single strand conformation polymorphism analysis. DNA sequencing was performed for the determination of single nucleotide polymorphism ofFSHB gene.Results:The study results showed that there was genetic polymorphism with two different single strand conformation polymorphism patterns, AA and AB. The former pattern was associated with fertility in Egyptian buffaloes. Pair wise alignment of the two patterns sequences revealed that FSHB pattern II (AB) has C nucleotide insertion as SNP at the site of 208 bp of sequenced fragment.Conclusions:FSHB is polymorphic in the infertile Egyptian buffaloes, suggesting its practicability as a candidate marker for female fertility.

8个猪种ESR和FSHβ基因合并基因型与繁殖性状关系的研究

采用测序和PCR-SSCP方法,对莱芜猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行ESR和FSHβ基因的多态性分析,并采用最小二乘法分析了这2个基因座的合并基因型对繁殖性状的影响。结果表明:2个基因位点在8个猪种的测定群体中均存在多态性,但山东地方/培育猪种与引进猪种间在合并基因型频率上存在较大差异。遗传效应分析表明,合并基因型对初产和经产胎次的产仔数影响显著(P<0.05),优势合并基因型BBBB的母猪比AAAA合并基因型母猪的初产总产仔数和活产仔数分别多2.54和2.65头/胎,经产总产仔数和活产仔数分别多2.29和2.35头/胎,并且合并基因型对产仔性状的遗传效应并非各基因型效应的简单相加。

撒坝猪ESR和FSH-β基因多态性及其与产仔数的关联分析

在对762头撒坝猪的ESR和FSH-β基因多态性进行检测的基础上,系统地分析了两个基因座位的基因型及其合并基因型产仔数的影响。结果表明,撒坝猪ESR基因座位的BB基因型和B等位基因的频率最高,FSH-β基因座位的AA基因型和A等位基因的频率最高。在初产胎次的产仔数上,ESR基因以AA型最多(P<0.05或P<0.01),FSH-β基因则以BB型最多(P<0.05或P<0.01),呈现显著的加性遗传效应(P<0.05);在经产胎次的产仔数上,ESR基因以AB型最高(P<0.05),表现出显著的显性遗传效应(P<0.05或P<0.01),FSH-β基因的3种基因型间则无显著差异(P>0.05)。ESR与FSH-β合并基因型为AABB型的母猪,其初产总仔数及活仔数最多(P<0.05或P<0.01);AAAB型母猪的经产总仔数与活仔数也明显高于其他基因型(P<0.05或P<0.01)。ESR和FSH-β基因确实与猪产仔数存在一定关联,但ESR基因对产仔数的效应与前人关于ESR BB型为猪产仔数增效基因型的结果明显不同。

猪FSHβ亚基基因结构区Alu序列插入突变的研究

通过聚合酶链式反应 (PCR)对中国华北型优良地方猪种莱芜猪及杜里猪、长白猪的卵泡刺激素 (FSH) β亚基基因结构区插入片段进行扩增 ,并对 0 .5kb扩增产物进行克隆和测序。序列分析表明 ,在已发表的猪FSHβ亚基基因全序列的 +80 9与 +810碱基之间 ,莱芜猪、杜里猪和长白猪分别存在一个长度为 2 75、2 77和 2 74bp的插入片段 ,插入片段末端的poly(A)分别为 17、19和 16个腺苷酸 ,均显著短于高产猪种太湖猪 (2 92bp和 32个腺苷酸 )。对FSHβ亚基基因插入片段进行BamHⅠ多态性分析 ,发现本研究所检测样品中不存在BamHⅠ多态性。插入片段中存在一个RNA聚合酶Ⅲ启动子及AluⅠ内切酶识别位点 ,所以该片段可能为Alu成分。因RNA聚合酶Ⅲ这种有功能的内部启动子能够转录相邻的染色体序列 ,该插入片段可能影响FSHβ亚基基因或其他基因的表达调控。把FSHβ亚基基因作为控制猪产仔数主效基因的候选基因与产仔数进行连锁分析 ,证明FSHβ基因座位在莱芜猪种中与控制猪产仔数的主效基因紧密连锁 ,优势基因AA纯合子比BB纯合子母猪平均每胎多产仔 1.2头。因不同品种猪插入序列的主要差异是末端的poly(A)长短不同 ,推测该插入片段末端的poly(A)结构亦可能影响猪的产仔数。

FSH-β和PRLR基因多态性对长白猪繁殖性能的影响

[目的]调查PRLR和FSH-β基因与长白猪繁殖性状的关系。[方法]采用PCR-RFLP技术分析了长白猪FSH-β基因和PRLR基因的多态性及其与繁殖性状的相关性。[结果]FSH-β基因3个基因型AA、AB、BB在长白猪中的频率分别为0.035、0.075、0.890;PRLR基因3个基因型AA、AB、BB在长白猪中的频率分别为0.164、0.585、0.251。FSH-β基因对长白母猪的各项繁殖性状影响不显著;PRLR基因对长白母猪的总产仔数、产活仔数、初生窝重和断奶窝重影响显著,并呈现出AB>AA>BB的趋势。[结论]该研究为PRLR和FSH-β2个基因的应用提供基础数据。

猪FSH-β位点对猪繁殖性状的影响

采用 PCR- SSCP技术对猪 FSH- β亚基基因的多态性进行了研究。结果表明 ,基因型分布与品种极显著相关 (P<0 .0 0 5 ) ;除大梅 F1 以外 ,所研究群体的 FSH-β PCR- SSCP位点均处于遗传平衡状态 ;在头胎中 ,G等位基因可以显著提高产仔数和产活仔数 ,加性效应分别为 1.2 0 0头 /窝、1.345头 /窝 (P<0 .0 5 ) ;在经产胎次 ,GG基因型母猪的产仔数和产活仔数显著高于 HH基因型 (P<0 .0 5 ) ,每拷贝 G等位基因可以控制 0 .6 18头 /窝的产仔数和 0 .834头 /窝的产活仔数 ;GG基因型母猪乳头数多 (P<0 .0 5 ) ,加性效应为 1.4 2 9个 ,而后代乳头数没有显著的差异 ,可以确定猪乳头数主要受自身基因型决定 ,且具有一定母本效应 ;GG型后代平均初生重比 HH型低 ,GH型的育成率显著比 HH型高(P<0 .0 5 ) ;GG基因型母猪的年产仔窝数显著低于 GH型 (P<0 .0 5 ) ;GG基因型的断奶到发情间隔比 GH基因型显著短 (P<0 .0 5 ) ,GH基因型的断奶到配种间隔显著比 HH基因型短 (P<0 .0 5 )。

ESR和FSH-β基因多态性对大白猪繁殖性能的影响

为探讨雌激素受体基因(ESR)和卵泡刺激素β亚基基因(FSH-β)的多态性对大白猪繁殖性状的影响,本文采用PCR和PCR-RFLP技术检测大白母猪群的ESR和FSH-β基因多态性,并分析其对大白母猪总产仔数、总活仔数、健仔数、死胎、木乃伊数和初生窝重等性状的影响。结果表明:ESR和FSH-β基因的优势基因均为B等位基因;对于初产母猪,ESR和FSH-β基因BB型比AA型在总产仔数、总活仔数、健仔数性状上高0.06~1.14头(P>0.05);对于经产母猪,ESR基因BB型比AA型总活仔数、健仔数分别高0.12头和0.07头(P>0.05),FSH-β基因在总产仔数、总活仔数、健仔数性状上AA型高于BB型0.04~0.24头(P>0.05);合并基因型分析发现ESR和FSH-β基因的有利合并基因型在初产母猪为ABAA,经产母猪为BBAA;BBAA合并基因型在总产仔数、总活仔数、健仔数性状上分别显著高于AAAA合并基因型2.03、1.75、1.65头(P<0.05)。因此,ESR和FSH-β基因多态性与大白猪繁殖性状相关。

鸡FSH β基因5’调控区单核苷酸多态性分析

促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素。运用PCR-SSCP法检测鸡FSHβ基因5’调控区的单核苷酸多态性。检测发现该区域存在6个SNP位点,即G-494A,T-470A,A-464G,-450处插入碱基A,A-405G,A-361G。同时分析了SNPs与文昌鸡早期产蛋性能的相关性。结果显示,FSHβ基因调控区SNPs位点与鸡的早期产蛋性能显著相关。

云岭黑山羊FSH基因表达量与其产羔数相关性研究

本文对云岭黑山羊产羔性状的分子基础进行了研究,分析了云岭黑山羊FSH基因表达量与其产羔数性状的相关性。采用绝对荧光定量PCR方法对两个品种山羊卵巢组织中FSH基因的表达量、用放射免疫技术对血液中FSH的水平进行了测定。结果表明,云岭黑山羊FSH表达水平显著地低于波尔山羊(P<0.05),云岭黑山羊血清FSH浓度显著低于波尔山羊(P<0.05),且云岭黑山羊FSH表达水平与产羔数之间的相关系数为0.9540,存在显著正相关(P<0.05)。由此可见,和波尔山羊比较,云岭黑山羊FSH基因低表达量、血浆中FSH低浓度是导致低产羔数的一个可能原因。

猪ESR、FSH-β和PRLR基因合并基因型对产仔数的影响

统计了辽宁省3个引进猪种:长白、大白和杜洛克的产仔数记录,并采用PCR-RFLP方法检测3个猪种ESR、FSH-β和PRLR基因的多态性,分析3个基因的单基因及合并基因型对产仔数的影响。结果表明,ESR、FSH-β和PRLR基因都存在AA、AB和BB3种基因型,在各猪群内基因型分布差异不显著(P>0.05),各基因均处于遗传平衡状态。单基因分析表明,ESR和FSH-β基因型产仔数的最小二乘均值具有按AA、AB、BB递增的趋势,BB型为优良基因型,而PRLR基因的优良基因型为AA型。ESR、FSH-β和PRLR基因的合并分析表明BBBBAA为最优合并基因型,合并后效应显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),且合并基因型的遗传效应高于单基因型效应。因此,可以利用合并基因型对猪的产仔数进行标记辅助选择。

玉山黑猪ESR和FSH-β基因多态性及相关性状的研究

采用PCR-RFLP方法对玉山黑猪的ESR基因和FSH-β基因多态性进行检测,并分析其与繁殖性能间的关系。结果表明,ESR基因的3种基因型AA、AB、BB在玉山黑猪中的频率分别为0.417、0.300、0.017,各基因型对应的产仔数存在差异,总体表现BB>AB>AA,其中初产仔猪数BB型多于AA型1.21头,多于AB型0.91头;BB型经产仔猪数也高于AB型和AA型,但3种基因型之间差异不显著。FSH-β基因的3种基因型AA、AB、BB在玉山黑猪中的频率分别为0.567、0.333、0.100,各基因型对应的产仔数存在差异,总体表现BB>AB>AA,初产仔猪数BB型多于AA型0.80头(P<0.05),多于AB型0.43头(P>0.05);BB型的经产仔猪数也是3种基因型中最高的,但彼此之间差异不显著。ESR和FSH-β基因在初产仔猪数及经产仔猪数上都具有显著的加性遗传效应(P<0.05)。

牛科物种FSHβ基因外显子1和外显子2遗传特征分析

促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)对刺激动物卵泡发育和促进精子生成具有重要作用,但有关牛科物种FSH基因的群体遗传特征还不十分清楚。本文针对FSHβ基因外显子1和外显子2,采用PCR-SS-CP结合PCR产物直接测序技术对353头水牛(来自11个水牛群体)、30头牦牛和30头大额牛样品进行了群体变异检测,并结合NCBI数据库中已发表的普通牛、山羊和绵羊等物种同源序列进行了群体遗传和生物信息学分析。在FSHβ基因外显子1中,水牛中发现1个核苷酸替换和1个缺失,即c.-49A>G和c.-31delG;其中,SNP-49在河流型和沼泽型水牛中均存在,等位基因c.-49A为优势等位基因,而c.-31delG只存在于沼泽型水牛中,且为杂合状态,基因频率为0.077。在牦牛外显子1中检测到c.-37G>A和c.-12T>C替换,且为连锁遗传的,而在大额牛外显子1中未检测到SNP位点。在FSHβ基因外显子2中,水牛中发现c.132G>A替换,该位点在河流型和沼泽型水牛均存在,但等位基因频率在两类水牛间不一致。在牦牛外显子2中检测到c.9C>T和c.21C>T替换,该替换也存在于普通牛中;大额牛外显子2为单态,未见SNP位点。生物信息学分析显示,在一些牛科物种FSHβ基因外显子2中发现的SNP位点均为同义替换,揭示了其序列的高度保守性。在牛科物种中,山羊和绵羊FSHβ基因第36位密码子编码氨基酸与其他物种不同,可作为区分它们的遗传标记。

淮猪新品系FSHβ亚基基因多态性及其与产仔数的相关性研究

在212头淮猪新品系母猪群中进行FSHβ亚基基因多态性及其与头胎产仔数性状的相关性分析,结果表明,在淮猪新品系母猪群中,FSHβ亚基基因的A等位基因为优势等位基因,其基因频率为0.6085。在淮猪新品系母猪头胎产仔数性状上,FSHβ亚基基因的AA基因型为有利基因型,AA型的头胎总产仔数比BB型高1.47头(P<0.01),AA型的头胎产活仔数比BB型高1.15头(P<0.05)。

金堂黑山羊FSH信号调节对卵巢基因表达谱影响的研究

【目的】本研究旨在搞清楚金堂黑山羊FSH信号调节机制的作用模式。【方法】将10只生殖周期相同的健康空怀的金堂黑山羊成年母羊随机分成2组,一组为对照组,一组为试验组。在发情后的第2天对试验组金堂黑山羊进行FSH肌肉注射100IU,并在注射24 h后,摘取金堂黑山羊的卵巢;对照组发情后的第3天摘取卵巢。分别提取它们的总RNA,进行表达谱测序。【结果】经测序分析:对照组和试验组分别得到有效序列30 906 038和27 763 272条;经统计分析后,得到归一化序列30 216 946和27 124882条,与山羊基因组的符合率分别达85.30%和86.13%。比对后发现239个基因出现显著性差异表达,其中139个基因上调了表达,100个基因下调了表达。GO功能分类发现在86个生物学过程、细胞组分、分子功能出现了显著性差异。KEGG功能分类发现有6个调节途径发生了显著性改变。【结论】FSH信号强度变化作用在卵巢上主要通过调节卵巢激素分泌、调节卵巢上FSH信号传导通路、调节脂代谢来响应,从而调节了动物的繁殖性能。

金堂黑山羊FSH信号调节对下丘脑基因表达谱的影响

【目的】本研究旨在搞清楚金堂黑山羊FSH信号调节机制的作用模式。【方法】将10只生殖周期相同的健康空怀的金堂黑山羊成年母羊随机分成2组,一组为对照组,一组为试验组。在发情后的第2天对试验组金堂黑山羊进行FSH肌肉注射100IU,并在注射24 h后,摘取金堂黑山羊的下丘脑;对照组发情后的第3天摘取下丘脑,分别提取他们的总RNA,进行表达谱测序。【结果】经测序分析:对照组和试验组分别得到有效序列26004442和25041098条;经统计分析后,得到归一化序列25338808和24413890条,与山羊基因组的符合率分别达85.31%和85.32%。比对后发现152个基因出现显著性差异表达,其中117个基因上调了表达,35个基因下调了表达。GO功能分类发现1个生物学过程出现了显著性差异。KEGG功能分类没发现调节途径发生了显著性改变。结果显示FSH信号通过负反馈调节的方式对下丘脑进行调节,除了少量的基因表达随着FSH信号强度的变化外,其主要的生物学过程,调节途径均无显著性变化,这说明FSH信号的负向调节要轻微很多。【结论】FSH信号通过负反馈调节的方式对下丘脑进行调节,相比正向调节,FSH信号的负向调节要轻微很多。

德宏水牛及杂交后代FSH-β基因多态性与繁殖性能的关系

[目的]本研究分析德宏水牛及杂交后代FSH-β基因多态性,为了解水牛繁殖性能的分子基础及建立检测分子标记奠定基础。[方法]采用PCR及直接测序法检测了德宏水牛及杂交后代FSH-β基因的多态性,并分析了该基因变异位点不同等位基因与繁殖性能的关系。[结果]德宏水牛及杂交后代80个个体的FSH-β基因序列共检测到27个SNP位点,未发现插入/缺失变异。其中2个位于第一内含子,3个位于第二外显子,13个位于第二内含子,6个位于第三外显子,3个位于3'非转录区,9个外显子变异中5个为引起氨基酸改变的功能性变异。经χ2检验,水牛FSH-β基因全部27个变异位点都处于群体遗传平衡状态。而在所有27个变异位点中,有23个位点的等位基因频率在繁殖良好和繁殖异常两个群体中存在差异。[结论]FSH-β基因在德水牛及杂交后代具有很高的基因变异性,可能是影响水牛繁殖性能的一个主要基因。

贵州小香羊FSH-β基因部分序列的RFLP多态性

为寻找与小香羊繁殖力相关的分子标记提供基础数据和科学依据,以贵州小香羊为试验材料,颈静脉采血后,提取血液全基因组DNA,根据NCBI Gene Bank山羊FSH-β基因序列(S64745.1)设计引物,采用限制性内切酶片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)方法对FSH-β基因内含子1与内含子2的序列进行多态性检测。结果表明:在两段特异性扩增产物中存在限制性酶切位点,不存在RFLP多态性。

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定

利用牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1全序列(GenBank登录号:AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641bp,A、C、G、T 4种碱基分别占35.73%,13.88%,17.47%,32.92%;A+T(68.65%)的含量远高于G+C(31.35%)的含量。所测定7个个体的碱基序列完全一致,表明FSHβ基因内含子1的保守性较强。

姜曲海猪FSHβ-亚基基因PCR-SSCP分析

用 PCR- SSCP方法对 15 2头姜曲海猪的 FSHβ-亚基基因进行了分型。结果表明 ,FSHβ-亚基基因在姜曲海猪中有 AA、AB、BB三种基因型 ,其频率分别为 0 .2 89、0 .493和 0 .2 17;A基因频率为 0 .5 36 ,B基因频率为 0 .46 4。A、B基因频率方差及两基因频率协方差分别为 0 .0 0 1、0 .0 0 1和 - 0 .0 0 1。A基因频率的群体估计值的 95 %置信区间为 [0 .473,0 .5 99],B基因频率对应为 [0 .40 1,0 .5 2 7];基因杂合度为 0 .498。经检验 ,该座位处于哈迪 -温伯格平衡状态。

水貂FSH-β基因序列的克隆与测序

从水貂腿部肌肉中分离提取总DNA,经PCR扩增出水貂FSH-β基因DNA序列。PCR产物经凝胶回收纯化,连接到pMD-18T载体上,然后转化到感受态细胞JM109中。在含X-gal和IPTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆菌落,提取质粒作限制性酶切及PCR鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明,PCR扩增出的DNA片段碱基数为500 bp,通过Blast比对,分析了其与人、牛、猪、绵羊、鼠促卵泡激素核苷酸序列的同源性。