云岭黑山羊FSH基因表达量与其产羔数相关性研究

本文对云岭黑山羊产羔性状的分子基础进行了研究,分析了云岭黑山羊FSH基因表达量与其产羔数性状的相关性。采用绝对荧光定量PCR方法对两个品种山羊卵巢组织中FSH基因的表达量、用放射免疫技术对血液中FSH的水平进行了测定。结果表明,云岭黑山羊FSH表达水平显著地低于波尔山羊(P<0.05),云岭黑山羊血清FSH浓度显著低于波尔山羊(P<0.05),且云岭黑山羊FSH表达水平与产羔数之间的相关系数为0.9540,存在显著正相关(P<0.05)。由此可见,和波尔山羊比较,云岭黑山羊FSH基因低表达量、血浆中FSH低浓度是导致低产羔数的一个可能原因。

重组山羊FSH基因在毕赤酵母中的高效表达

为探讨快速高效表达山羊FSH(促卵泡素)基因的方法,将获得的FSHα,β亚基基因克隆到毕赤酵母快速表达载体pPICZαA中,然后将构建的载体线性化处理后,电击转化至毕赤酵母GS115中,经Zeocin抗生素筛选后获得阳性菌落,经甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE和Western–blot分析。结果表明:pPICZαA载体可以快速正确的表达FSH,分子量为27KD,放射免疫法测定表达上清,表达量为20.155 mIU/mL,显著高于本实验室在细胞中的表达。

高产从江香猪资源调查及其FSH基因型分析

对贵州省从江县养殖的从江香猪资源进行了全面的调查,发现当地存在特殊的高产从江香猪群体。对同龄的高、低产香猪的体尺进行对比,同时采用PCR分析2个群体的促卵泡激素β亚基(follicle stimulating hormone,FSHβ)的基因型,结果表明,高产从江香猪群体的产仔数明显高于低产群体,同时,从江香猪高产群体的体长、体重、胸围、腰围4项指标明显较高(P<0.05),纯合的AA基因型频率也较高。结果表明:高产从江香猪不仅产仔数多,同时生长速度较快,基因更为纯合。从江香猪高产群体的深入研究将为香猪资源的多方位开发利用奠定基础。

鹅FSH基因原核表达

促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因,但FSH在生物体内的半衰期非常短,本试验将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因各亚基的C末端进行基因融合,以期获得pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α重组蛋白。设计去除目的基因信号肽和含有酶切位点的特异性引物,经融合PCR扩增获得了目的基因FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α,通过构建原核表达载体pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,蛋白纯化。结果显示,3个融合蛋白FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α的IPTG最佳诱导时间分别为4、5和5h,最佳诱导浓度分别为0.2、0.8和1.5mmol/L,且都是以包涵体形式存在,相对分子质量分别为32 000、35 000和46 000,与预期大小一致。结果表明,本试验成功构建了鹅pET-32a-FSHα-CTP、pET-32a-FSHβ-CTP和pET-32a-FSHβ-CTP-α的原核表达载体,并对它们的重组蛋白进行了纯化,为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础。

猪FSHβ亚基基因RFLPs研究初报

本文用猪ＦＳＨβ基因ｃＤＮＡ作为探针，对二花脸猪、梅山猪、长白猪、大约克猪、香猪基因组ＤＮＡ进行ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ三种限制性内切酶的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析。发现猪品种之间在该位点变异较大，而且发现ＦＳＨβ／ＢａｍＨＩＲＦＬＰｓ中，太湖猪（二花脸、梅山猪）表现出品种内一致性。

8个猪种ESR和FSHβ基因合并基因型与繁殖性状关系的研究

采用测序和PCR-SSCP方法,对莱芜猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行ESR和FSHβ基因的多态性分析,并采用最小二乘法分析了这2个基因座的合并基因型对繁殖性状的影响。结果表明:2个基因位点在8个猪种的测定群体中均存在多态性,但山东地方/培育猪种与引进猪种间在合并基因型频率上存在较大差异。遗传效应分析表明,合并基因型对初产和经产胎次的产仔数影响显著(P<0.05),优势合并基因型BBBB的母猪比AAAA合并基因型母猪的初产总产仔数和活产仔数分别多2.54和2.65头/胎,经产总产仔数和活产仔数分别多2.29和2.35头/胎,并且合并基因型对产仔性状的遗传效应并非各基因型效应的简单相加。

ESR、FSHβ及OPN基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对大白猪和长白猪猪群进行了雌激素受体基因(ESR)、卵泡促激素β亚基基因(FSHβ)和骨桥蛋白基因(OPN)等3个与繁殖性能相关的基因多态性检测,并对不同基因型的总产仔数、产活仔数及出生窝重进行了相关分析。结果表明:①在长白猪中,ESR和OPN基因的优势基因是A等位基因,FSHβ基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因BB型个体比AA型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重高,FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重上高,OPN基因BB基因型个体比AA基因型个体总产仔数少1.20头,差异显著(P<0.05);在经产母猪中,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高,ESR基因总产仔数、产活仔数规律与初产母猪相反。②在大白猪群体中,ESR基因的优势基因是A等位基因,FSHβ和OPN基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因AA型比BB型个体产活仔数和出生窝重高,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高;在经产母猪中,ESR、OPN及FSHβ基因全都表现出BB型比AA型个体总产仔数和产活仔数高的趋势。

安徽省4个地方猪种ESR和FSHβ基因多态性及其与产仔数的关联分析

分别利用PCR-琼脂糖凝胶电泳和PCR-RFLP方法对皖南黑猪、皖南花猪、定远猪、安庆六白猪4个安徽地方猪种共213头繁殖母猪进行FSHβ和ESR基因多态性及其与产仔性状的关系进行研究,旨在为安徽地方猪种的标记辅助选择提供科学依据。结果表明:(1)ESR和FSHβ基因在4个地方猪种中都存在多态性,ESR在安庆六白猪、定远猪中出现了AA、AB、BB3种基因型,而在皖南黑猪、皖南花猪中只出现了AA、AB 2种基因型;FSHβ在皖南黑猪、皖南花猪中出现了CC、CD、DD 3种基因型,而在安庆六白猪、定远猪中只出现了CC、CD 2种基因型;(2)不同基因型母猪的TNB、NBA存在一定差异,ESR不同基因型对定远猪和皖南花猪经产母猪的TNB、NBA影响显著(P<0.05);FSHβ不同基因型对皖南黑猪初产、经产和定远猪经产母猪的TNB、NBA影响显著(P<0.05)。以上结果表明ESR和FSHβ基因不同基因型对部分安徽地方猪的产仔性状有着一定的影响,可作为其标记辅助选择的潜在遗传标记。

FSHβ基因多态性及对不同品种猪繁殖性状的影响

选取FSHβ基因为影响猪繁殖性状候选基因,对8个猪种906头猪进行FSHβ基因的多态性分析,并采用最小二乘法分析了其对总产仔数、产活仔数和妊娠期的遗传效应。结果显示,FSHβ基因在嘉兴黑猪、巴马香猪、金华猪和八眉猪中几乎只有A等位基因,在美系杜洛克和嵊县花猪中以B等位基因为主,只有在大约克、长白、台系杜洛克中A,B等位基因均衡分布。遗传效应分析表明,在初产美系杜洛克猪中,BB基因型妊娠期比AB型缩短0.94 d(P<0.01);在初产大约克猪中,BB基因型妊娠期比AA型缩短1.61 d(P<0.01);在经产长白猪中,AB型产仔数和产活仔数分别比BB型多了2.27头(P<0.05)和2.31头(P<0.05)。总体而言,FSHβ基因对不同品种母猪繁殖性能效应各有差异,在初产美系杜洛克和大约克中BB基因型妊娠期更短,在经产长白猪中AB型产仔数和产活仔数更多。

大白、长白及其杂交母猪FSHβ基因多态性与繁殖性状的相关分析

通过PCR扩增检测FSHβ基因多态性,分析FSHβ各基因型与繁殖性状的相关性,结果表明:大白、长白及长大杂种母猪FSHβ基因座A等位基因频率较低,分别为0.213 3、0.161 5和0.140 5,B等位基因频率较高分别为0.786 7、0.838 5和0.859 5。该位点多态性与初产母猪的产活仔数、初生窝重存在显著差异(P<0.05),与总产仔数和断奶成活数差异不显著(P>0.05);与经产母猪的总产仔数、产活仔数、初生窝重和断奶成活数都差异不显著(P>0.05)。

母猪FSHβ基因对仔猪哺乳期生长影响的研究

用ＰＣＲＳＳＣＰ法对８９ 头姜曲海母猪的ＦＳＨβ基因分型，分析了ＮＮ，Ｎｎ 和ｎｎ ３ 种不同基因型母猪的８３７ 头仔猪哺乳期的生长差异． 结果表明： ＮＮ，Ｎｎ 和ｎｎ 基因型母猪的仔猪初生重分别为（１－６４５ ±０ ．３５９） 、（１ ．７２１ ±０ ．３７５） 和（１ ．６９９±０ ．３７３）ｋｇ，２０ 日龄重分别为（５ ．８２６ ±１ ．５０４） 、（６ ．３０７±１－５４４） 和（６ ．０１４ ±１ ．５４０）ｋｇ ，４０ 日龄重分别为（１９ ．５３５ ±４ ．５８３） 、（２０ ．１５８ ±４ ．２９１） 和（１９ ．３１３ ±４．８５４）ｋｇ． 在哺乳期间， Ｎｎ 基因型母猪后代生长速度比纯合子快，存在明显的杂合效应（ Ｐ＜ ０ ．０５） ． 携带ｎ 等位基因的母猪，其胎儿初生重显著大于ＮＮ 基因型的母猪（ Ｐ＜ ０ ．０５） ．

豫南黑猪及3个引进猪种FSHβ和PRLR基因多态性与产仔性能的关系

检测FSHβ和PRLR基因多态性及其对豫南黑猪和3个引进猪种产仔性能的影响。采用PCR-RFLP方法,对豫南黑猪、杜洛克猪、长白猪和大约克夏猪4个猪种进行FSHβ基因和PRLR基因多态性检测,并采用最小二乘法分析其对产仔性能的影响。结果表明,对于FSHβ亚基基因,豫南黑猪在初产总产仔数与产活仔数方面,基因型CC型比AC型的分别多2.67,2.79头(P<0.05);在经产总产仔数和产活仔数方面,基因型CC型比AC型分别多2.03和2.14头(P<0.05);而引进猪种基因型对产仔数没有显著差异。对于PRLR基因,豫南黑猪不同基因型对产仔数没有显著影响,但呈现BB型>AB型>AA型的趋势。而引进猪种在经产总产仔数与产活仔数方面,BB基因型比AB基因型平均多产2.04,2.47头,差异显著(P<0.05)。因此,将FSHβ基因和PRLR基因作为猪繁殖性能的候选基因,可能有利于其繁殖性能的提高。

苏姜猪ESR基因和FSHβ基因多态性及其对部分生长性状的影响

研究157头苏姜3世代猪ESR和FSHβ基因型分布,并对基因型与6月龄体高、体长、胸围和体重作了相关分析。结果表明:两位点在苏姜猪中存在多态性;ESR基因BB基因型猪的体高、体长、胸围和体重显著(P<0.05)低于AA基因型的个体,体高、胸围、体重达到极显著水平;FSHβ基因BB基因型个体的体长显著(P<0.05)低于AA型的个体。合并基因型BBBB个体的体高和胸围显著(P<0.05)低于AAAB、AABB、ABAB和ABBB基因型个体,而体重则显著(P<0.05)低于其他合并基因型的,部分基因型之间达到极显著水平(P<0.01)。结果提示,两基因有利于产仔数的BB型体尺性状较小,生长速度较慢。苏姜猪选育时应进行ESR和FSHβ基因的分子标记辅助选择,可避免B等位基因的流失。

鸡FSHβ、ESRα基因多态性及其合并基因型与产蛋性能的关联性分析

使用SSCP技术检测FSHβ、ESRα的SNPs位点,分析鸡FSHβ、ESRα基因多态性及其合并基因型与产蛋性能的相关性,为寻找玫瑰冠鸡产蛋性能相关分子标记提供依据。结果表明:在玫瑰冠鸡和海兰褐蛋鸡群体中分别检测到FSHβ(A-173G)和ESRα(G-78416T、A-119854T、C-158689G)4个多态位点,其中A-173G位点、A-119854T位点、C-158689G位点AB型对玫瑰冠鸡300日龄产蛋数有显著影响(P<0.05);ESRα基因单倍型GTC个体的开产体质量和300日龄产蛋数高于单倍型GAG,是2种鸡的优势基因型;FSHβ、ESRα合并基因型中玫瑰冠鸡H6型的初生质量显著高于H1基因型(P<0.05),海兰褐蛋鸡H1型的开产蛋质量显著高于H9、H10及H12合并基因型(P<0.05),开产日龄显著早于H11基因型(P<0.05),300日龄产蛋数显著高于其他合并基因型(P<0.05)。因此FSHβ(A-173G)、ESRα(A-119854T)、ESRα(C-158689G)AB型与FSHβ、ESRα合并基因H6型有望作为与玫瑰冠鸡产蛋性能相关的分子标记。

ESR和FSHβ基因与晋阳白猪繁殖性状关系研究

用PCR-RFLP和PCR方法对60头晋阳白猪的ESR和FSHβ基因进行研究,分析了ESR和FSHβ不同基因型繁殖性状的差异。结果表明,在所检测的猪群中,ESR和FSHβ基因对繁殖性状有显著影响,B等位基因为有利基因,BB型均为优良基因型。

FSHβ基因对金华猪繁殖性状效应的研究

应用PCR -RFLP技术测定了 2 6 7头金华猪的FSHβ基因型 ,并且分析了FSHβ基因对金华猪Ⅰ系的繁殖性状的影响 ,结果表明 :在金华猪上有利基因B的频率为 0 .0 12 ,BB基因型的频率为 0 .0 0 6 ;FSHβ基因对初产死仔数影响极显著 (P =0 .0 0 1) ,而对产仔数和初生重没有影响。

五龙鹅GnRH、PRL和FSHβ基因多态性与产蛋性状相关研究

本试验对五龙鹅促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(PRL)和促卵泡激素β亚基(FSHβ)基因进行多态性检测,并分析其与产蛋性状的关系。选产蛋高峰期五龙鹅100只,采取个体圈养方式饲养,记录个体产蛋量。结果显示,FSHβ外显子3存在1个SNP位点产生3种基因型AA、AB、BB,产蛋量呈现AA型>AB型>BB型趋势;PRL内含子2上存在1个SNP位点产生3种基因型CC、CD、DD。CC型、CD型、DD型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重之间差异不显著(P>0.05),CD型、DD型的产蛋总量显著高于CC型(P<0.05);GnRH基因5′端调控区存在1个SNP位点产生2种基因型EE、EF型,EF型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重都要高于EE型,但是二者之间差异不显著(P>0.05),EE型的产蛋总量显著高于EF型(P<0.05)。

北京黑猪FSHβ亚基基因的多态性与繁殖性状的关联分析

本研究以北京黑猪为研究对象,以FSHβ亚基基因为产仔性状的候选基因,分别采用PCR产物直接电泳和PCR-RFLP方法来检测FSHβ亚基基因2个位点的多态性。结合测序发现:FSHβ-1位点上,北京黑猪BB型的134与135 bp(D00621序列的6 473与6 474 bp)之间插入273 bp的片段而产生多态,序列分析表明该插入片段为一典型的逆转座子,在插入片段中还发现了一个RNA聚合酶Ⅲ内部启动子;FSHβ-2位点上,由于扩增片段173 bp处存在C→T的突变,使得HaeⅢ酶切位点消失而产生多态;2个位点的A、B等位基因在北京黑猪群体中都有分布,且处于低度多态。χ2适合性检验结果表明,该群体在这2个位点的突变都达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。用SAS 8.2软件最小二乘法拟合线性模型,将基因座不同基因型与繁殖性状总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和出生重(WB)进行了关联分析,结果表明:就初产母猪而言,FSHβ-1位点上,AA型比AB和BB型个体的TNB分别多0.96头和1.85头(P<0.05),AA和AB型比BB型个体的NBA分别多0.95头和1.69头(P<0.05)。FSHβ-2位点上,AA型比AB型和BB型个体的TNB分别多1.57头和2.15头(P<0.05);AA和AB型比BB型个体的NBA分别多1.00头和0.94头(P<0.05);就经产母猪而言,FSHβ-2位点上,AA型个体的WB比BB型的WB重0.25 kg(P<0.05)。全部群体的FSHβ-1位点的A等位基因和初产母猪FSHβ-2位点的A等位基因对TNB、NBA和WB表现为正效应。

FSHβ亚基基因与繁殖性能及胎盘性状的关联分析

以117头大白猪为研究对象,以FSHβ亚基基因为候选基因,采用PCR产物直接电泳方法检测FSHβ亚基基因位点的多态性,检出3种基因型,分别为AA、AB和BB基因型。将基因座不同基因型与总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)、初生体质量(BW)和胎盘性状(PT)进行关联分析。结果表明:FSHβ亚基基因在该位点上,就初产母猪而言,AA和AB基因型比BB型个体的TNB分别多3.25和2.37头(P<0.05),AA和AB基因型比BB型个体的NBA分别多3.31和2.49头(P<0.05)。就经产母猪而言,AA和AB基因型比BB型个体的TNB分别多2.71和1.60头(P<0.05),AA和AB基因型比BB型个体的NBA分别多2.95和1.74头(P<0.05)。AA基因型比AB和BB型个体的胎盘效率(PE)分别高16.28%和23.09%(P<0.05)。总体而言,FSHβ亚基基因在该位点的A等位基因对TNB、NBA和PE均表现为正效应。

三个外种猪原始核心群ESR及FSHβ基因多态性检测

运用某种猪场杜洛克、长白猪、大白猪育种核心群作为素材,采用聚合酶反应(polymerasechainreac tion:PCR),对上述三个猪种基因组DNA进行ESR和FSHβ基因的多态性分析。结果观察到上述三个猪种群体中ESR基因的A和B基因的频率分别为0.8194和0.1806,0.7921和0.2079,0.7051和0.2949;而对于FSHβ基因,A和B基因的频率分别为0.0833和0.9167,0.2865和0.7135,0.2231和0.7769。因此,该场应侧重选留ESR基因的B等位基因,以进一步提高猪群产仔数。