HaCaT细胞中FUT4表达与其启动子区甲基化的相关性分析

岩藻糖基转移酶Ⅳ(FucosyltransferaseⅣ,FUT4)在正常细胞中表达量很低,但其低表达的调控机制以及是否受其启动子甲基化调控并不十分清楚。文章采用Western blot、免疫荧光和Real-time PCR的方法检测正常人永生化表皮细胞系HaCaT细胞FUT4的表达,观察DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-d C处理对FUT4表达的影响。应用甲基化特异性PCR方法分析HaCaT细胞中FUT4启动子甲基化状态。结果表明,HaCaT细胞中FUT4的表达水平明显低于人表皮鳞癌细胞A431和SCC12。5μmol/L的5-aza-d C处理72 h的HaCaT细胞,其FUT4m RNA水平明显升高,并且与未经5-aza-d C处理的对照组相比,U引物扩增检测到的产物量增加,M引物扩增检测到的产物量明显减少。这些结果表明,HaCaT细胞中FUT4的低表达可能与其启动子区Cp G岛甲基化有关。

miR-105靶向调控FUT4影响骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

背景:骨关节炎(OA)的发生与进展与软骨细胞增殖和凋亡密切相关,探究micro RNA-105(miR-105)对软骨细胞增殖和凋亡的影响及机制可为OA治疗提供作用靶点。目的:研究miR-105通过靶向调控岩藻糖基转移酶4(FUT4)对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过分离和培养人OA软骨细胞和人正常软骨细胞,通过Real-time PCR检测不同细胞中miR-105和FUT4 mRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹(WB)分析FUT4的蛋白表达水平,通过细胞转染法构建上调或下调miR-105的OA软骨细胞,Real-time PCR检测miR-105的表达以验证转染效果,MTT法检测OA软骨细胞增殖情况,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,通过生物信息学方法预测miR-105靶基因结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-105和FUT4的靶向关系,检测上调或下调miR-105对细胞中FUT4表达的影响。通过共转染构建上调miR-105和FUT4以及下调miR-105和FUT4的OA软骨细胞,以同样的方法检测对细胞中FUT4表达及细胞增殖和凋亡的影响。结果:人OA软骨细胞中miR-105的表达水平与人正常软骨细胞相比显著降低,FUT4 mRNA和蛋白的表达水平显著升高。miR-105模拟物转染OA软骨细胞可上调miR-105的表达,且细胞增殖能力增强,细胞凋亡率下降;下调OA软骨细胞中miR-105的表达则表现出相反的效果。靶基因预测miR-105和FUT4 3’非编码区(3’UTR)存在靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证了FUT4是miR-105的靶向基因。上调miR-105的表达可显著抑制FUT4 mRNA和蛋白的表达,下调miR-105的表达可显著促进FUT4 mRNA和蛋白的表达。共转染FUT4互补脱氧核糖核酸(cDNA)和miR-105模拟物可上调由过表达miR-105导致的OA软骨细胞中FUT4表达量下降,逆转了miR-105上调引起的细胞增殖促进、凋亡抑制的作用;共转染FUT4小干扰RNA(siRNA)和miR-105抑制剂可下调由过表达miR-105导致的OA软骨细胞中FUT4表达量升高,逆转了miR-105下调引起的细胞增殖抑制、凋亡促进的作用。结论:miR-105能够抑制OA软骨细胞增殖、促进凋亡,其作用机制与靶向调控FUT4有关。

FUT4-siRNA增强5-aza-dC对鳞癌细胞增殖和迁移的抑制

岩藻糖基转移酶IV(fucosyltransferase IV,FUT4)是催化蛋白质岩藻糖基化的关键酶.已经证明,FUT4-siRNA能够抑制鳞癌细胞的增殖.5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-d C)是临床常用化疗药物,但5-aza-d C是否对鳞癌有治疗作用,以及与FUT4-siRNA联合使用能否加强对鳞癌细胞增殖和迁移的抑制尚不清楚.本研究以鳞癌细胞系A431和SCC12为对象,探讨5-aza-d C及其与FUT4-siRNA联合使用对细胞增殖和迁移的影响.MTT结合流式细胞周期分析显示,5-aza-d C处理A431和SCC12细胞4 d后,细胞增殖被明显抑制,抑制率分别为18%和20%(P<0.05);与对照组比较,加药处理组G1期细胞数量减少,S期细胞数量明显增加.Western印迹结果揭示,A431细胞FUT4表达水平较SCC12细胞高.经5-aza-d C处理后SCC12细胞FUT4表达有所增加,但仍低于A431细胞中的表达.FUT4-siRNA转染结合台盼蓝活细胞记数证明,FUT4-siRNA明显降低细胞FUT4表达,5-azad C处理同时转染FUT4-siRNA的A431和SCC12细胞增殖进一步被抑制,抑制率分别为54%和60%(P<0.05).细胞划痕法显示,5-aza-d C与FUT4-siRNA联合使用,对细胞迁移能力的抑制作用比5-aza-d C单独使用增强.上述结果提示,5-aza-d C通过诱导细胞S期阻滞抑制鳞癌细胞增殖,FUT4-siRNA与5-aza-d C联合使用可加强对细胞增殖和迁移的抑制.

FUT4过表达促进胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附

胚胎与子宫内膜上皮细胞之间的黏附是胚胎成功植入的关键.岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)对胚胎细胞与子宫内膜细胞黏附的影响未见报道.本研究以人子宫内膜细胞(HEC-1A)和胚胎细胞(JAR)为体外着床模型,观察上调HEC-1A细胞中FUT4表达对JAR细胞与HEC-1A细胞黏附的影响.RT-PCR和免疫细胞化学检测结果显示,FUT4过表达增加HEC-1A细胞中FUT4基因及蛋白的表达;免疫细胞化学及Western印迹结果表明,上调HEC-1A细胞中FUT4增加细胞表面LeY的合成;细胞黏附实验结果显示,与未转染组相比较,FUT4过表达增加了JAR细胞与HEC-1A细胞的黏附率.本研究证明,FUT4过表达可以增加细胞表面LeY寡糖抗原的合成,从而促进胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附.

FUT4和LeY在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的 探讨FUT4和LeY在子宫内膜异位症患者中的表达情况及其临床价值。方法 选择2010年3月～2012年6月辽宁省大连市妇幼保健院（以下简称“我院”）妇产科经腹腔镜手术证实为子宫内膜异位症的70例患者,将患者分为在位内膜组和异位内膜组,每组各35例。同时选择同期我院行手术治疗的单纯子宫肌瘤患者35例为对照组。采用免疫组化、RT-PCR检测三组患者子宫内膜组织中FUT4和LeY的表达情况,并对其变化的意义进行评价和分析。结果 1与对照组比较,在位内膜组和异位内膜组患者的FUT4阳性表达率均明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组FUT4的阳性表达率高于在位内膜组（P〈0.05）;2与对照组比较,在位内膜组和异位内膜组患者的LeY的阳性表达率均明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组LeY的阳性表达率高于在位内膜组,差异有统计学意义（P〈0.05）;3与对照组比较,FUT4在异位内膜组和在位内膜组中的阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组FUT4的阳性表达率高于在位内膜组（P〈0.05）。结论 FUT4和LeY不仅在子宫内膜异位症的形成和发展过程中发挥着重要作用,其在胚胎黏附、植入过程中也起着重要作用,而FUT4是LeY合成的关键酶,当其表达量高于某一临界值时,会诱发子宫内膜异位症,影响胚胎的正常着床,从而进一步导致不孕。

子宫内膜癌中FUT1、FUT4、LeY寡糖抗原的表达及意义

目的:研究LeY、FUT1、FUT4在正常子宫内膜、异常增生子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶连接(SP)法,检测子宫内膜腺癌、子宫内膜不典型增生、单纯与复杂增生及正常增值期内膜LeY、FUT1、FUT4的表达。结果:FUT1、FUT4、LeY在正常子宫内膜不表达,在单纯与复杂增生型子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜腺癌中过表达,主要表达于子宫内膜腺上皮的细胞膜和(或)胞浆;LeY寡糖抗原在子宫内膜腺癌中过表达,并与组织学分级有关,与临床手术病理分期无关。结论:FUT1、FUT4、LeY在子宫内膜癌的发生发展中可能起重要的作用,可能参与了子宫内膜癌的早期病变。

黄芩、白术通过调节岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ的表达促进胚胎体外黏附

目的:探讨黄芩、白术对胚胎体外黏附的影响及其调控的糖分子机制。方法:培养人子宫内膜细胞(RL95-2)和人绒毛膜细胞(JAR),并经米非司酮诱导后建立着床障碍模型。通过黏附实验观察不同浓度黄芩、白术水煎液对胚胎黏附率的影响,采用RT-PCR、Western blotting检测着床相关寡糖合成关键酶的表达变化。结果:黄芩、白术50 mg/L治疗组胚胎黏附率较模型组显著升高(P<0.05),着床相关的岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ(FUT4、FUT7)的m RNA及蛋白表达显著增加(P<0.001)。结论:中药黄芩、白术可通过上调FUT4、FUT7的表达促进胚胎体外黏附。

米非司酮通过调节岩藻糖基转移酶IV的表达抑制胚胎体外黏附

目的:探讨米非司酮对人胚胎细胞JAR与人子宫内膜细胞RL95-2之间黏附的影响及其调控的分子机制。方法:采用黏附实验分别观察RU486以及岩藻糖基转移酶IV(FUT4)对JAR细胞与RL95-2细胞之间黏附的影响。采用RT-PCR以及Western blotting检测米非司酮对RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4表达的调控。结果:①米非司酮抑制JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附;②米非司酮抑制RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4基因和蛋白的表达;③FUT4质粒转染RL95-2细胞后,调节JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附。结论:米非司酮通过调节FUT4的表达抑制胚胎体外黏附。

岩藻糖基转移酶Ⅳ和肿瘤相关性的研究进展

岩藻糖基转移酶(FUTs)是一类催化糖蛋白或糖脂岩藻糖基化的酶。目前已发现13种FUTs,其中岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)是负责催化合成岩藻糖基化寡糖Lewis X(Le X)和Lewis Y(Le Y)等的关键酶。FUT4在很多上皮来源的恶性肿瘤中高表达。本文就FUT4基因在肿瘤细胞中的表达特点和调控机制,以及FUT4在肿瘤恶性发展过程中的作用作一综述,旨为肿瘤的发生发展提供理论依据,为肿瘤的诊断及治疗提供参考。